依那普利联合替米沙坦对自发性高血压大鼠肾脏的保护作用

殷泉忠，王加虹，崔俊友，郑若龙，马根山

(1东南大学医学院附属江阴医院，江苏 江阴 214400;2东南大学附属中大医院)

近年来，高血压导致的终末肾病的发生率呈逐年上升趋势，约28%的终末肾病与高血压有关［1］。因此在抗高血压药物研究中，除评价其降压疗效外，是否具有肾脏保护作用亦越来越受到关注。2009年1月～2010年12月，我们观察了依那普利联合替米沙坦对自发性高血压大鼠(SHRs)肾脏的保护作用。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 12周龄的SHRs 40只，雌雄各半，体质量250～300 g，随机分成4组:依那普利组、替米沙坦组、依那普利+替米沙坦组以及SHRs空白对照组各10只;12周龄的正常血压大鼠(WKYs)10只，雌雄各半，体质量250～300 g;所有动物购自江苏省实验动物中心。KN-210大鼠尾动脉血压测定仪(上海华岩仪器公司)，HITACHI7150型全自动生化分析仪(日本HITACHI公司)，ZEISS Axiovert 40 CFL显微镜(美国ZEISS公司)。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、转化生长因子β1(TGF-β1)放免试剂盒(北京北方生物技术研究所)。依那普利购自江苏常州制药厂。替米沙坦购自上海勃林格殷格翰药业有限公司。

1.2 方法

1.2.1 给药方法 依那普利组给予依那普利10 mg/(kg·d)，替米沙坦组给予替米沙坦30 mg/(kg·d)，依那普利+替米沙坦组给予依那普利10 mg/(kg·d)+替米沙坦30 mg/(kg·d)，SHRs空白对照组及WKYs正常对照组以同样给药方式予以10 ml/(kg·d)的蒸馏水，连续灌胃给药12周。

1.2.2 血压、尿蛋白含量的测定 治疗期间每周用无创性套尾法测定清醒状态下大鼠的收缩压，每次测量3次，取平均值即为血压值。治疗期间每2周将大鼠置于代谢笼中，收集24 h尿量，取其中1 ml尿液，8000 r/min离心10 min后，用考马斯亮蓝法测定尿蛋白浓度。

1.2.3 AngⅡ和 TGF-β1水平的测定 治疗结束后，3%戊巴比妥钠腹腔麻醉后，胸腹联合切口，直视下右心房采集静脉血，6000 r/min离心10 min得到血浆;取肾脏皮质少量，加入适当蒸馏水制备成组织匀浆。分别检查血浆和组织 AngⅡ、TGF-β1水平。其中，AngⅡ水平测定采用放射免疫分析法、TGF-β1水平测定采用酶联免疫吸附法。

1.2.4 肾脏组织形态学观察 处死大鼠后，立即将肾脏用10%的甲醛溶液固定24 h以上，将固定好的肾脏经酒精梯度脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片，HE染色后，光镜下观察肾脏组织形态学改变。

1.3 统计学方法 采用SPSS10.0统计软件，结果以表示，结果比较采用t检验、区组设计方差分析。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠治疗前后血压、尿蛋白含量比较 见表1。

2.2 各组大鼠治疗前后血浆及肾脏的AngⅡ和TGF-β1水平比较 见表2。

表1 各组大鼠血压与蛋白尿含量比较()

表1 各组大鼠血压与蛋白尿含量比较()

注:与SHRs空白对照组比较，*P＜0.05;与依那普利+替米沙坦组比较，★P＜0.05

组别 n 血压(mmHg)治疗前 治疗12周尿蛋白(mg/ml)治疗前 治疗12周后依那普利组 10 175.64±23.76 142.84±15.69＊★ 1.26±0.23 1.29±0.25＊★替米沙坦组 10 171.73±25.79 134.39±14.83＊★ 1.24±0.28 1.26±0.30＊★依那普利 +替米沙坦组 10 176.33 ±27.41 124.18 ±10.73* 1.28 ±0.31 1.12 ±0.32*SHRs空白对照组 10 174.88 ±26.25 217.53 ±34.58 1.27 ±0.32 2.13 ±0.56 WKYs正常对照组 10 120.64 ± 9.47 123.53 ±10.78 0.67 ±0.08 0.69 ±0.10

表2 各组大鼠治疗后血浆、肾脏的AngⅡ和TGF-β1水平的比较(mmol/L，)

表2 各组大鼠治疗后血浆、肾脏的AngⅡ和TGF-β1水平的比较(mmol/L，)

注:与依那普利组、替米沙坦组比较，*P＜0.05

组别 n 血浆AngⅡ TGF-β1肾脏AngⅡ TGF-β1依那普利组10 5.4 ±0.26 4.5 ±0.18 7.4 ±0.22 6.6 ±0.27替米沙坦组 10 8.4 ±0.41 4.1 ±0.24 9.1 ±0.37 6.8 ±0.23依那普利 +替米沙坦组 10 4.1 ±0.17* 2.6 ±0.18* 5.7 ±0.27* 5.9 ±0.28*SHRs空白对照组 10 7.5 ±0.31 6.0 ±0.31 8.5 ±0.31 8.0 ±0.35 WKYs正常对照组10 4.0 ±0.23 2.4 ±0.15 5.5 ±0.25 5.6 ±0.20

2.3 肾脏组织病理改变 在光镜下观察肾脏HE染色组织切片，SHRs空白对照组肾小球旁小动脉管壁增厚，管腔明显狭窄，肾小球体积缩小，组织结构致密;肾间质充血、轻度纤维化;经过12周的治疗后，三个用药组均可见肾小球旁小动脉管壁增厚及管腔狭窄，程度较SHR空白对照组明显减轻，而且联合用药组减轻肾脏病理损害的效果明显优于依那普利组和替米沙坦组。

3 讨论

高血压的发病与肾脏的关系是十分密切的。肾脏既是血压调节的重要器官，同时又是高血压损害的主要靶器官之一。AngⅡ参与高血压的病理生理过程，循环和组织中AngⅡ水平过高是高血压、心肌肥厚、肾硬化的主要因素。血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)都有较好的降压效果，已成为临床一线的降压药物。依那普利是ACEI类药物，通过抑制血管紧张素转换酶活性、降低血浆和组织中的AngⅡ水平起到抗高血压、减轻心肌肥厚、减少尿蛋白含量、减轻肾脏硬化的作用［2］，但体内催化AngⅠ产生 AngⅡ过程中尚有糜酶、组织蛋白酶等参与，其结果是长期应用可能导致反馈性激活AngⅡ产生的旁路途径而致肾素—血管紧张素系统(RAS)的抑制不完全。替米沙坦是ARB类药物，能选择性地阻断AngⅡ与AT1受体的结合，从而有效地抑制RAS系统［3］。从理论上说，ACEI与ARB联合应用于高血压疾病的治疗，就能更好地阻断RAS，保护肾脏免受损伤。

阻断RAS可延缓或阻止疾病进程，抵消AngⅡ的血流动力学效应，抑制依赖于AngⅡ的促生长细胞因子、氧自由基和组织纤维化介导物质的生成［4］，可产生以下生物学效应:血压下降，尿蛋白减少等。研究表明，单独使用ACEI或ARB均有利于保护高血压引起的心脑肾血管损伤［5，6］。但由于两者作用于不同的位点，联合应用ACEI和ARB可能互相增强彼此的作用。最近的研究表明［7～9］，两者联合使用能达到更佳治疗效果。本实验中，我们比较了单独使用依那普利或替米沙坦以及两者联用对SHRs血浆和肾脏各个指标的影响程度，结果表明依那普利和替米沙坦联合应用，对于降低SHRs的血压有很好的协同作用，并且对肾脏有很好的保护作用。

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