三种抗凝管在血细胞分析中的评价

唐金华

（防城港市第一人民医院检验科，广西 防城港 538021）

在临床医学实验室中，检验操作经历了手工操作、半自动化分析和自动化分析的过程。目前自动化分析仪以高新技术为基础，以提高准确度、精密度、灵敏度、高效率为特点，在现在临床医学实验室中广泛应用[1]。供检验分析的抗凝血标本，用传统方法制备的抗凝剂远远不能满足实验室的要求，需采用EDTA盐，因其对红、白细胞形态影响很小，根据国际血液学标准公委员会(International committee standard of hematology，ICSH)1993年文件建议，血细胞计数用EDTA二钾做抗凝剂，用量为 EDTA-K2·2H2O 1.5～2.2 mg，(4.45±0.85)μmol/ml血液。EDTA-Na与EDTA-K2对血细胞计数影响均较小，但二钠溶解度明显低于二钾，有时影响抗凝效果，其他抗凝剂不适用于血细胞计数。为了快速方便的应于临床实验室，因此近10年来，国内外均有生产各抗凝管应用于临床实验室。由于各种抗凝管都遵循了国际血液学标准，选择最适合做血细胞计数分析的EDTA二钾做抗凝剂，只是用量和性状不同，有的是干剂，有的是水剂，但是用的比例是一样的。本文对三种抗凝管对血细胞及血细胞形态的影响进行比较，结果显示三种抗凝管对血细胞计数分析无影响，但通过制片进行瑞氏染色，用光学显微镜观察，发现购买的烘干抗凝管对血细胞形态影响较大，血小板易凝集。探讨的过程如下：

1 资料与方法

1.1 标本来源 选择本院2011年1～4月门诊健康体验人群40份血液标本。

1.2 仪器与试剂 日本东芝KX-21N血细胞分析仪，希森美康生物有限公司(无锡)提供的配套的溶血素、释稀液、浓缩清洗液。日本生产OLYMPUS光学显微镜，由珠海贝索生物技术有限公司生产的瑞氏-吉姆萨染液。

1.3 自制抗凝剂EDTA二钾的制备 用分析天平准确称量EDTA-K2·2H2O 10 g，倒入烧杯中，然后用蒸镏水溶解，倒入带1000 ml刻度的容量瓶中，先加少量蒸镏水分多次溶解烧杯中的EDTA-K2，直到溶解完，然后加蒸镏水到容量瓶中准确定位到1000 ml，充分振荡混匀，然后过滤，过滤后分装到带0.5 ml刻度的管中，每管加EDTA溶液10 μl，加盖放室温避光阴凉处备用[2]。

1.4 血片的制备 三种抗凝管的血液标本进行血细胞计数后，立即进行制片，按照日常工作标准操作进行制作，制作有头有尾，厚薄适宜的血片。自制抗凝管、购买烘干抗凝管、购买液体真空抗凝管各推一张血片，待自然风干后，进行瑞氏-吉姆萨染色，用光学显微镜观察其血细胞的形态。

1.5 血细胞计数的5项指标检测 采用门诊健康体检人群随机选取的血标本，按其要求的血量置于三种抗凝管中，充分混匀，观察有无凝块或微小凝集，上机进行5个项目的检测，检测方法按标准操作程序规范操作分析。

1.6 统计学方法 定量5项检测指标的资料配对采用t检验。

2 结果

自制抗凝管、购买烘干抗凝管、购买液体真空采血抗凝管，按其要求比例进行采血，充分混匀后观察均无凝集或微小凝块现象。三种抗凝管做好血细胞计数分析及制片后，放置一段时间观察血浆均无溶血现象发生。

自制抗凝管、购买烘干抗凝管、购买液体真空采血抗凝管对40份标本进行抗凝，抗凝血标本5项血液指标检测结果见表1。由表1可见，自制抗凝管与购买烘干抗凝管及自制抗凝管与购买液体真空采血管经过配对t检验比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)，由此说明自制抗凝管对检验结果无影响，说明自制抗凝管的制备过程及用量是正确的。

对三种抗凝管抗凝血推制血片用瑞氏染液进行染色，在光学显微镜下观察其细胞形态变化，三种抗凝管的抗凝血的血片均有一定比例的血细胞形态变化。在镜下可见粒细胞的细胞核分叶不见或细胞肿胀，甚至可见少量白细胞裂解、血小板凝集等现象。但用购买烘干抗凝管抗凝的血标本，其血细胞形态变化的比例高一点，可能是烘干抗凝的蒸镏水被蒸发采用相同比例的血液，因其抗凝浓度较高，这是根据国际血液标准化委员会认为抗凝剂浓度越大对血细胞形态影响越大，所以致血细胞形态变化较大一点。

表1 三种抗凝管抗凝血5项血液指标检测结果(n＝40)

3 讨 论

在现在临床医学实验室中，自动化仪器的广泛应用大大提高了工作效率，为了满足快速、方便、减少负担的需要，购买现成的抗凝管抗凝血标本进行血细胞分析，也成为临床实验室发展的必然结果。本文实验结果表明：购买的两种抗凝管与自制抗凝管进行抗凝血液标本检测的5个项目的配对t检验差异无统计学意义(P＞0.05)。购买烘干抗凝管抗凝的血标本对血细胞形态影响较大，且烘干的抗凝管有部分出现裂开的现象，在采血的过程中发现有漏血的，购买烘干抗凝管的管壁较厚不宜采血。自制抗凝管对检测结果经过比较差异无统计学意义，且自制抗凝管成本低廉，价格不及其他两种购买抗凝管的十分之一，原料来源广泛，制作简单，虽然需要人力来制作，但发现有问题也易改进；购买液体真空采血抗凝管抗凝的血标本，结果准确，血细胞形态变化较小，快速、方便，但较昂贵且需血量多(1.8 ml血液)，不适合新生儿和婴儿采血。

综上所述，笔者自制的抗凝管对血细胞形态及PLT的影响较小，对检验结果无影响，原料来源广泛，制备也较简单，成本低廉，可适合各种人群(包括新生儿、婴幼儿、未成年人、成年人)采血进行血细胞计数分析，具有较高的使用或推广价值。

[1]蒋廷武.加强检验与临床沟通以促进标本采集质量的提高[J].临床和实验医学杂志,2006,5(7):128-129.

[2]叶应妩,王毓三,申小瑜.全国临床检验操作规程[M].3版.南京:东南大学出版社,2006:780-781.