RP-HPLC法测定小柴胡汤丸中黄芩苷的含量

2011-08-28肖林林温建东吴坚

中国现代药物应用 2011年22期

肖林林温建东吴坚

小柴胡汤丸(浓缩丸)是由柴胡、法半夏、黄芩等7味中药经提取分离后制成的中药复方制剂。其具有和表解里功效，主要用于寒热往来，胸胁苦满，心烦喜吐，口苦咽干，头晕目眩等的治疗。原标准中没有含量测定项。为更好地控制产品质量，现采用高效液相色谱(RP-HPLC)法测定方中黄芩的主要成分黄芩苷的含量，方法简便、测定准确、重复性好，可用于控制制剂的质量。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱仪(515泵、2487双波长紫外检测器);BS-110S电子天平;BP211D电子天平。黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110715-200212)。小柴胡汤丸(浓缩丸)样品(市售品)。甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇-水-磷酸(55∶45∶0.2);流速:1.0 ml/min;检测波长:280 nm;进样量:10.0 μl;柱温:30℃。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。在此色谱条件下，对照品及供试品溶液在相同的保留时间处有吸收峰，而阴性对照溶液无吸收峰，说明阴性对照对试验无干扰。色谱见图1。

2.2 对照品溶液的制备精密称取黄芩苷对照品适量，加70%乙醇[1]制成每1 ml含0.1 mg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液及阴性对照溶液的制备取本品，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加70%乙醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理(功率120W，频率58KHZ)30 min，取出，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，作为供试品溶液。取按处方及工艺制备的不含黄芩药材的样品，同法制备阴性对照溶液。

图1 高效液相色谱图

2.4 线性关系与考察取黄芩苷对照品约15 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，加70%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用 70%乙醇分别制成每 1 ml含 15.73 μg、31.46 μg、62.92 μg、125.85 μg、251.70 μg 的对照品溶液，精密吸取上述溶液各10.0 μl，注入液相色谱仪，在上述色谱条件下，分别进样5次，记录色谱图，以浓度(X)为横坐标，峰面积积分值(Y)为纵坐标，进行线性回归，得回归方程:Y=3887470.6X－5267.2(r=1.0000)结果表明，黄芩苷进样量在0.1573μg～2.517μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验精密吸取黄芩苷对照品溶液10.0 μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件，重复进样5次，测定其峰面积值，结果峰面积的RSD=0.1%(n=5)，表明测定方法的精密度良好。

2.6 稳定性试验取同一供试品溶液10.0 μl，按上述色谱条件，于配制后第 0、2、4、6、8 h 分别进样测定，记录峰面积，结果峰面积的RSD为0.8%(n=5)，表明供试品溶液在8 h内基本稳定。

2.7 重复性试验取同一批样品，照“2.3”供试液的制备项下方法，平行制备6份供试品溶液，按上述色谱条件，分别进样测定，记录峰面积，进样量为10.0 μl。结果含量的RSD为1.1%(n=6)，表明测定方法的重复性良好。

2.8 加样回收率试验精密称取已知含量的同一批样品6份，研细，取适量(含量为5.861 mg/g)，精密称定，分别精密加入定量的黄芩苷对照品溶液(浓度为503.4 μg/ml)。按“2.3”项下方法制备成供试品溶液，按上述色谱条件，分别进样测定，记录峰面积，进样量为10.0 μl，计算加样回收率。结果方法的加样回收率为98.0%，RSD=1.1%，表明方法准确度良好(表1)。