ELISA检测中全自动加样引起拖带污染现象的原因分析及对策

闫晓鹏 李雪英 王文莉

全自动加样系统具有加样精确度高、标本处理量大、加样速度快、不易出现人为差错事故等优点，进一步提高了血液检测的质量和水平，近年来在采供血系统的ELISA血液检测中得到了广泛应用［1］。但笔者在运用全自动加样系统进行血液标本加样检测过程中，发现有强阳性标本引起的拖带污染现象，给工作造成了一定的不利影响。经分析原因并制定相应整治措施，特别是更换使用一次性加样针后，完全杜绝了此类现象的发生。笔者以HIV检测为例报告如下。

1 材料与方法

1.1 血液标本 本站无偿献血者血液标本74215份(其中2008年10月至2008年12月6142份，2009年1月至2011年4月68073份)。每位献血者均留取2份血液标本，其中1份为献血者献血时由采血护士留取的试管标本，作初检用;另1份为留取的血袋导管标本，作复检用。所有血液标本均2000 r/min离心15 min备用。

1.2 试剂 初检用HIV抗原抗体诊断试剂盒(北京科卫临床诊断试剂有限公司);复检用HIV抗原抗体诊断试剂盒(法国BIO-RAD公司);2种试剂均通过中国药品生物制品检定所批检合格，并在有效期内使用。

1.3 仪器设备 STAR全自动样本处理系统(瑞士HAMILTON公司);FAME全自动酶免分析系统(瑞士HAMILTON公司);Sunrise酶标仪(奥地利TECAN公司);MK2洗板机(芬兰Thermo公司)。

1.4 方法 分别使用初检试剂检测初检标本，复检试剂检测复检标本，根据HIV检测试剂说明书的要求，在STAR全自动样本处理系统控制微机上编辑初检、复检2个加样程序。2008年使用永久性钢针，加样过程中，STAR全自动样本处理系统在吸取、分配不同的血液标本或液体试剂后，按设定程序需将加样探针清洗3次，在擦针纸上擦拭1次。2009年以后全部使用一次性加样针，设定程序也相应取消了洗涤环节。当加样程序完成后，将微板移至FAME全自动酶免分析系统，进行温育、洗板、显色及结果判读。

以大写字母A～H表示96孔酶标板的纵列;以阿乐伯数字1～12表示96孔酶标板的横列，标本在酶标板的位置可分别表示为A1～A12、B1～B12……H1～H12(见图1)。如发现ELISA微板上从A排至H排连续出现2孔或2孔以上阳性结果时，即怀疑是由拖带污染引起的假阳性。首先进行同一检测项目初、复检结果比对;然后重新取1份血袋导管标本，连同初、复检标本，分别用2种试剂进行3孔复试。

图1 酶标板标本位置图解

2 结果

在2008年10月至2008年12月的6142份血液标本的HIV检测中，由STAR全自动样本处理系统引起的强阳性标本拖带污染现象共2次，分别见表1、表2。2009年1月～2011年4月共68073份血液标本检测中未发现拖带污染现象。

表1 第1例拖带污染检测结果

本次拖带污染现象出现在初检中，实验的Cut off值为0.134，故6份标本中5份为阳性，1份为“灰区”。根据HIV检测规程，对6份标本分别进行了3孔复试，结果H2标本仍为强阳性，检测OD值分别为2.759、2.543和2.398;H3标本为弱阳性，检测OD值分别为0.596、0.603和0.628;其余4份标本均为阴性。遂将H2、H3标本送焦作市疾控中心的HIV确认实验室进行确认，结果H2标本仍为强阳性，H3标本为可疑，须3个月后进一步随访和复查。

表2 第2例拖带污染检测结果

本次拖带污染现象出现在复检中，实验的Cut off值为0.204，故4份标本均呈阳性。按HIV检测规程分别对4份标本进行3孔复试后，E9标本仍为强阳性，检测OD值分别为3.110、3.188和3.011，其他3份样本均为阴性。E9标本经焦作市疾控中心HIV确认实验室确认后，仍为强阳性。

3 讨论

由于全自动加样系统的诸多优点，使其在大部分血站得到推广应用。最初几年，推广使用的加样针均为永久性钢针，目前有部分血站仍在使用。因其在加完血液标本或试剂后，需按编好的加样程序进行冲洗、擦拭后重复使用，所以从理论上讲，随着加样运行方向从左→右各孔间的拖带污染是不可避免的［2］，尤其是一根加样针加完强阳性标本后，如果因标本存在纤维蛋白凝块等原因而使加样针未彻底冲洗干净，就会造成强阳性拖带污染情况的发生，本文中2例拖带污染现象经分析均为标本处理不当引起。同时由加样参数设置不当而引起的加样量不准确、加样针挂珠等情况以及洗针槽不洁净、溢液通道不通畅、针爪内外壁干燥密封不好、加样探针有内栓漏气等均可导致拖带污染现象发生。

针对产生拖带污染的原因，我们采取了以下对应措施:①根据不同厂家试剂的实际情况，设置科学合理的加样参数，避免液体试剂和标本之间的相互污染。②自2009年全面更换使用一次性加样针，由于没有了洗涤环节，在保持血液加样的高精确度和自动化的前提下，可完全杜绝拖带污染带来的影响［3］。③建立和实施仪器设备的维护、校准和持续监控管理制度，大型和关键仪器设备实行专人管理、专人使用，并按照仪器使用要求做好其日维护、月维护及日常保养工作，使仪器始终处在良好的工作状态。④对血液标本全过程进行管理，建立和实施标本采集程序、标本运送程序及标本的接收和处理程序，并严格执行，有效避免了标本出现溶血、污染、变质及存在悬浮颗粒等情况。

基于我们采取的综合整治措施，2009年至今，我站共检测献血者血液标本近7万人份，未发生1例拖带污染现象，更好地发挥了全自动检测设备的优势，进一步提高了检测结果的准确性及血液使用的安全性。

［1］李玉笑，郑优荣，肖韶英，等.FAME酶标分析系统在安全输血中的应用.广东医学，2002，23(5):461-463.

［2］徐树良，谈维，石斌，等.全自动加样仪引起抗-HIV拖带阳性分析.中国输血杂志，2003，16(2):106-107.

［3］申俊峰，陆蓉，王军，等.全自动加样仪一次性加样针在血液检测中的应用.贵州医药，2009，33(3):264-265.