宫颈上皮内瘤病变及宫颈鳞癌HPV与P16表达相关性研究

滕彦玲

宫颈鳞癌宫颈癌的发生是一个由癌前病变演变为癌的连续性病理过程。许多研究己经提示，高危型人类乳头瘤病毒(HPV)是导致宫颈癌的主要原因［1］。我们应用抑制基因蛋白(P16)来检测不同的HPV感染性宫颈病变中，为提高早期诊断率寻找更为客观、可靠的指标及监测病变的进展。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集我院活检或手术切除的子宫颈组织标本，分为2组:①实验组:共105例，其中子宫颈鳞癌15例，子宫颈上皮内瘤变89例CINⅠ组39例，CINⅡ组18例，CINⅢ组32例;②对照组:20例为非子宫颈病变手术切除正常子宫颈组织标本。

1.2 检测方法

1.2.1 HPV检测 石蜡常规包埋切片，水化，枸橼酸盐缓冲液微波修复抗原15 min，免疫组化。HPV阳性物质定位于细胞膜和细胞质，阳性标准以细胞膜和(或)细胞质出现棕色颗粒为阳性表达，阳性细胞 ＞5%者为阳性。

1.2.2 P16检测 所有标本均经10%福尔马林液固定，石蜡包埋，切片厚0.4 μm，常规HE染色，光镜下行细胞形态学观察，以确定病理诊断及分组。免疫组化染色采用S-P法，按说明书操作。阳性对照片为已知宫颈癌阳性片，PBS代替一抗为阴性对照片。免疫组化结果:P16蛋白阳性表达可见细胞质和细胞核棕黄着色，连续观察10个高倍视野，以免疫组化反应阳性细胞数超过25%作为阳性的诊断标准。

1.3 计数资料采用χ2检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

表1 HPV与P16在宫颈上皮内瘤病变中表达的相关性

2 结果

HPV与P16在宫颈上皮内瘤病变中表达的相关性，HPV16、P16在颈上皮内瘤病变和癌组织中均有较高表达，在HPV阳性表达的癌组织中，Ki267表达多在“++”以上，而12例HPV阴性癌组织中，P16亦为高表达。经等级相关性分析，HPV和P16在颈上皮内瘤病变和癌组织中的表达呈显着正相关(χ2=20.11，P＜0.05)。见表1。

3 讨论

人类肿瘤中的细胞增殖失控是发生恶性病变的重要原因，P16是近年来发现的与细胞周期调控密切相关的抑癌基因，它定位于人类染色体9P21，全长8.skb，由2个内含子和3个外显子组成。P16是细胞周期蛋白依赖激酶CDK4/6的抑制因子，P16基因转录抑制必然导致P16表达减少甚至消失，cyclin D失去竞争对象，大量与CDK4结合，激发Rb的磷酸化，细胞大量由G1期进入S期开始增殖，在无限制增殖过程中发生表型变化导致肿瘤形成。随病变进展，P16蛋白以浆表达→浆核共表达→核表达依次推进，推测浆内可能作为肿瘤抑制基因的静止状态存在，需要时进入核内发挥作用。何慧仪等［2］发现，宫颈癌与癌前病变中P16的表达升高与HPV的感染有关，所以推测肿瘤细胞中P16的强阳性表达即意味着HPV在细胞中的整合。本研究发现P16的阳性率及阳性细胞的分布、着色强度在HPV感染的不同病变中均有不同，并随着病变程度的加重P16阳性率明显增高，阳性细胞的数量明显增加，着色明显增强。对于P16蛋白在宫颈鳞癌中高表达可能与Rb基因的失活有关［3］。Rb可抑制P16基因的表达，提示在Rb基因失活的肿瘤中，失活的Rb蛋白一方面失去对细胞周期的调节作用，使细胞生长失控，导致肿瘤发生;另一方面解除了对P16的抑制作用，使P16转录反馈性表达增强，导致P16蛋白表达升高［4］。综上所述，P16缺失可能导致宫颈癌的发生，其抑制作用可能是通过抑制宫颈癌的细胞周期实现的。因此P16基因在宫颈癌的诊治中发挥重要作用，可成为基因治疗宫颈癌的靶基因。

［1］车雅敏，王家璧.HPV在宫颈癌发病中的作用机制研究.国外医学·肿瘤学分册，2004，31(4):306-309.

［2］何慧仪，卢丽娜，杜洪，等.Ki-67、Survivin、P16表达在宫颈癌和宫颈癌前病变诊断中的意义.中国妇幼保健，2006，21(13):1825-1827.

［3］董建新，韩萍，侯灵彤.宫颈上皮内瘤变与基因表达.中国妇幼保健，2009，24(18):2591-2593.

［4］张亚静，拉莱，苏祖克，等.P16、Ki-67在子宫颈上皮内瘤变及子宫颈鳞癌中的表达及意义.新疆医科大学学报，2007，30(4):372-374.