龙岩市规模化猪场猪肠道菌耐药性调查及分析

2011-08-16李晓华杨小燕戴爱玲

中国动物检疫 2011年11期

李晓华，杨小燕，戴爱玲

（福建龙岩学院生命科学学院预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心，福建龙岩 364000）

腹泻性疾病、呼吸道疾病、繁殖障碍性疾病以及高热病并称为当今养猪业四大疾病[1]。2006年以来，龙岩市规模化猪场仔猪持续性和顽固性腹泻呈逐年上升趋势。怀疑与肠道细菌混合感染以及耐药性的产生有较大的关系。为此，我们对2006—2010年龙岩市规模化猪场的仔猪细菌性腹泻进行了肠道菌的检测及耐药性分析，希望能够对其他猪场的疾病预防和药物治疗提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料牛肉膏蛋白胨固体培养基、麦康凯培养基、微生物生化试剂购自杭州天和微生物科技有限公司。

1.2 菌株分离、鉴定

用灭菌棉拭子取腹泻仔猪病例直肠内粪便或肠内容物，按文献方法[2]，接种于麦康凯培养基，37℃培养18~24h后，对可疑菌株作进一步生化鉴定。

1.3 药敏试验

药敏试验采用标准Kirby-Bauer纸片法，根据美国临床试验室标准委员会（CLSI/NCCLS）2009版执行标准判定结果。

2 结果与分析

2.1 肠道菌流行情况

在送检的腹泻仔猪粪便或肠内容物中分离到多种细菌，细菌分离率为89.5%（221/247），大部分仔猪粪便或肠内容物中都可分离到不止一种细菌，其中以大肠杆菌分离率最高为76.2%，其次为沙门氏菌为35.2%，除了这两种主要细菌外，少部分的肠内容物还分离到副嗜血杆菌为1.2%。

2.2 肠道菌药敏情况

2.2.1 常用药物的耐药情况

对以上所选猪场粪便及肠内容物分离培养的大肠杆菌和沙门氏菌进行了耐药性检测，所选的药物主要是临床上常用的一些药物，主要有氟苯尼考、乙酰甲喹、磺胺对甲氧嘧啶、利福霉素、林可霉素、恩诺沙星、氧氟沙星、庆大霉素、泰乐菌素、壮观霉素、头孢噻呋钠、泰妙菌素、甲砜霉素、硫酸多黏菌素、阿莫西林、环丙沙星、复方治菌磺、链霉素、诺氟沙星、土霉素和青霉素等21种药物。细菌产生耐药性严重的药物依次为青霉素、土霉素、利福霉素、磺胺对甲氧嘧啶、阿莫西林、甲砜霉素，耐药率均高于80%。细菌耐药率在50%~80%的药物依次为壮观霉素、诺氟沙星、林可霉素、泰乐菌素、环丙沙星、庆大霉素、氟苯尼考、乙酰甲喹；最敏感的药物主要是硫酸多黏菌素、链霉素、头孢噻呋钠，其敏感率＞30%（见表1）。

表1 肠道菌药敏试验情况

2.2.2 多重耐药情况

247例肠道菌对21种抗生素监测结果见表2，所有受检菌株均表现出不同程度的耐药性，247例中对全部抗生素耐药的有3例（1.21%），其它都对1种或多种抗生素有耐药性，多数为7耐以上的菌株，共有172株（69.64%）；其中12耐最高，共 34株（13.77%）（见表2）。

表2 肠道菌耐药性统计

2.2.3 不同年份耐药情况

根据2006—2010年统计数据来看，大部分药物的耐药率都有不同程度地上升。变化较大的是氟苯尼考的耐药率45.16%→65.63%，泰妙菌素的耐药率42.86%→54.55%，硫酸多黏菌素的耐药率 0→18.97%，阿莫西林的耐药率69.80%→82.86%，其中也有药物的耐药率出现了下降趋势，林可霉素的耐药率76.47%→55.10%，庆大霉素的耐药率100%→64.81%，泰乐菌素的耐药率90.48%→43.75%，头孢噻呋钠的耐药率100%→88.57%，环丙沙星的耐药率70.37%→57.14%，复方治菌磺的耐药率65.52%→29.27%，链霉素的耐药率64，29%→33.30%，土霉素的耐药率88.00%→74.56%，青霉素的耐药率100%→66.70%（见表 3）。

3 小结与讨论

3.1 仔猪腹泻长期困扰着养猪业的发展。通过对送检猪场的问诊调查（病猪日龄、临床症状、发病率、死亡率等指标），结果发现仔猪大肠杆菌性腹泻相当普遍，有的猪场几乎每头猪在仔猪阶段均出现过腹泻症状等，死亡率较高，经治疗未死亡的猪也常导致病畜生长发育迟缓、生产能力低下，给畜牧业造成的损失相当严重，应该引起重视[3-4]。

3.2 在送检的腹泻仔猪粪便或肠内容物中分离到多种细菌，细菌分离率为89.5%（221/247），分离率很高。这说明肠道细菌在各规模化猪场发生频率仍较高，大部分猪场粪便或肠内容物中都可分离到不止一种细菌，其中最主要的是大肠杆菌和沙门氏菌，这是临床上发生仔猪黄白痢、副伤寒疾病的病原菌，除了这两种主要细菌外，肠内容物中少部分还分离到副嗜血杆菌（1.2%）。这一结果与刘秀丽等报道一致[1]。副嗜血杆菌是条件致病菌，近年来，随着免疫抑制性疾病如猪瘟、蓝耳病、伪狂犬等发病严重，猪机体免疫力的下降，条件致病菌趁虚而入导致发病愈加严重。

3.3 药敏试验结果表明，所有分离菌株存在广泛的耐药性，以多重耐药性为主，最多耐药12种，以12耐、7耐、9耐、10耐、8耐、11耐为主，耐药率分别为13.77%、13.36%、12.55%、10.12%、10.12%、9.72%，共占69.64%。最为敏感的药物是硫酸多黏菌素、头孢噻呋钠，敏感率在30%以上；而甲砜霉素、阿莫西林、磺胺对甲氧嘧啶、利福霉素、土霉素、青霉素等均不敏感，耐药率均在80%以上，这些耐药性较高的抗生素经调查发现临床使用频率均较高，这可能与猪场长期应用某种抗菌药物而诱导耐药菌株的形成有关，也说明长时间使用单一抗生素是细菌产生耐药性的重要原因[5]。因此，应重视用药前的药物敏感性监测，以筛选出几种有效抗菌药物交替用于大肠杆菌病的防治。

3.4 本次试验结果表明，耐药率从2006年到2010年呈逐年上升趋势，其中变化较大的是阿莫西林的耐药率69.80%→82.86%；氟苯尼考的耐药率45.16%→65.63%；泰妙菌素的耐药率42.86%→54.55%；硫酸多黏菌素的耐药率0→18.97%。应引起重视的是：兽医临床使用时间较短的头孢类药物在本次检测中也发现已经存在耐药的趋势。表明肠道细菌对其适应性产生速度之快，也提示兽医临床抗生素药物的选择并非越新的药物效果越好，而是与该种药物的使用频率有关[6-7]。