新疆北疆部分规模猪场支原体肺炎流行病学调查

杨俊杰 ，李 石 ，李 劼 ，吕新刚

（1.兵团农九师畜牧科学研究所，新疆额敏 834601；2.石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003）

猪支原体肺炎（Mps）亦称猪气喘病、猪地方性流行性肺炎，是由猪肺炎支原体（Mhp）感染引起的一种慢性呼吸道传染病，通常引起猪群生产性能显著下降，受感染猪群日增重下降、饲料报酬降低等，给猪场造成严重的经济损失[1]。

为了解新疆北疆部分规模猪场中Mhp的感染情况，降低该病对养猪业的危害，对13个规模猪场进行了流行病学调查，现将调查结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品来源 采于北疆地区13个规模猪场，血清364份，病变肺脏72份。

1.1.2 检测试剂与仪器 猪肺炎支原体（Mhp）抗体检测ELISA试剂盒购于北京IDEXX；10×Buffer，dNTPs，Taq 酶，DNAMarker，PCR 仪 （Techentc512），酶标仪（Biotek）等。

1.2 方法

1.2.1 流行病学调查 2010年11月—2011年5月，对北疆13个规模猪场进行现场调查和问卷调查，调查猪支原体肺炎在猪场的流行情况，包括发病的数量、年龄、病死率、发病季节、传染源、传播途径、诱发因素以及主要临床症状等内容，掌握猪支原体肺炎流行的基本情况。

1.2.2 样品采集 无菌采集13个规模猪场不同年龄段的猪血（均未接种过猪肺炎支原体疫苗），待凝固后，4000r/min离心10min，-20℃保存。

剖检可疑病猪，观察心、肺、脾等组织病理变化。按参考文献[2]方法无菌采集肺脏、脾脏等病料，-20℃保存；另取病变肺脏浸泡于10%甲醛溶液中。

1.2.3 Mhp血清学检测 按试剂盒说明书操作。

1.2.4 病变组织PCR检测 DNA的提取参照文献提取[3]。阳性对照为南京天邦生物科技有限公司生产的猪支原体肺炎活疫苗（168株）。

PCR引物参考文献[4]合成1对Mhpldh引物，上游引物 p1 为：5'-CCGTTGAAGCCTTGCTGTAT-3'，下游引物 p2 为：5'-CGGTTAGTGTCTCCCGTTATG-3'，扩增片段大小为287bp。引物由上海申工公司合成。

PCR 体系 （25 μL）：10×Buffer3 μL，10mM dNTPs0.6μL，上下引物各 1μL，模板 2μL，Taq酶0.3μL，补ddH2O至25μL。设定以下参数进行PCR反应：94℃预变性3min，94℃变性30S，54℃退火30S，72℃延伸40S，进行30个循环，72℃再延伸10min，4℃保存。取PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳。

1.2.5 病理组织学观察 将通过PCR鉴定为阳性的肺脏组织，做病理切片。

2 结果与分析

2.1 流行病学调查结果 规模猪场中Mps主要发生于秋冬季，各年龄段猪匀易感，发病率高（30%~90%），死亡率低（8%~20%），仔猪发病后死亡率高。

病猪和带菌猪是主要传染源，感染母猪垂直传染给小猪，猪群间主要通过接触传染。

临床症状表现为咳嗽、气喘，明显的腹式呼吸，精神沉郁，食欲减退，生长发育停滞，日渐消瘦，被毛粗乱，混合感染其它病原时常出现体温升高。以慢性病例多见，病程长达数月。使用药物治疗只能减轻临床症状，停药后很快复发。寒冷、潮湿、拥挤的环境会加剧本病的发生。

2.2 病理剖检结果 病肺呈现大面积肺炎以及不同程度的气肿；尖叶、心叶呈对称性实变，实变区大小不一，呈“肉样变”或“胰变”，硬度增强，病灶与非病变区有明显的界限（图1）。肺门淋巴结肿大、质硬，断面灰白色，呈髓样变。

2.3 Mhp血清抗体检测结果

2.3.1 各猪场血清抗体检测结果 Mhp抗体检测结果见表1

表1 Mhp抗体检测结果

结果显示：364份血清抗体阳性率为52.2%，13个规模猪场中阳性猪场有9个，猪场阳性率为69.23%；阳性率最高的猪场感染率达90%，说明部分规模猪场肺炎支原体感染情况比较普遍，个体感染情况比较严重。

2.3.2 不同年龄段Mhp抗体检测结果（见表2）

表2 不同年龄段Mhp抗体检测结果

由表2可知，不同年龄段猪Mhp的感染率不同，母猪感染率高达100%，仔猪感染率相对较低。原因可能是母猪呈隐性感染带菌或感染耐过后母猪在2~4胎后仍可携带此菌，哺育期仔猪与带菌母猪接触而被感染，此时仔猪从母乳获得了母源抗体的保护，但母源抗体不能保证新生仔猪免受感染。母源抗体从30天开始衰减，感染仔猪血清抗体逐渐转阳[5]；即使仔猪未被感染，在断奶混群后如果与病猪和带菌猪接触也易被感染，猪感染肺炎支原体后需2~4周才能检测到抗体；因此育肥猪和母猪阳性率高于仔猪。

2.4 组织PCR检测结果 72份病变肺脏进行PCR检测，结果42份阳性，阳性率为58.33%，阳性率高于血清学检测结果。部分病变肺脏PCR检测结果见图2。

2.5 病理组织学观察 肺支气管内有淋巴样细胞浸润，夹杂有单核细胞，中性粒细胞及脱落的肺泡上皮细胞（图3），支气管周围淋巴样细胞增生（图4），从而使肺泡之间的间隙增厚。

3 讨论

猪支原体肺炎是猪呼吸道疾病综合征（PRDC）的重要病原之一，广泛分布于世界各地，其死亡率虽然不高，但由于流行的广泛性、长期性和消耗性，可使饲料转化率降低，并引起猪的多种并发病，是造成养猪业经济损失最重要的疾病之一[6]。常呈隐性发病，多取慢性经过，一旦感染，便难以消除。

血清学诊断虽然可以检测出Mhp抗体的存在，作为诊断是否感染肺炎支原体的依据，但并没有直接检测其病原，由于个体血清转阳时间差异较大，因此仅仅依靠血清学诊断来确诊其感染支原体还不够。

利用PCR方法进行猪肺炎支原体的检测，为确定猪感染率提供了更加精确的方法[7]。本试验用于PCR检测病变肺脏的Mhpldh（乳酸脱氢酶）引物，具有种特异性，能与其它种类的支原体（如猪鼻支原体）相区分[8]，进一步提高了检测结果的准确性。因此，血清学方法和PCR方法结合可得到满意的诊断结果。

本研究首次系统地进行了新疆北疆部分规模猪场Mhp的流行病学调查，初步查明了Mhp的感染情况和流行规律，为该病的诊断和制定有效防控措施提供了科学依据。

[1]周绪斌，DanielT，李聪，等.规模化猪场肺炎支原体血清学动态监测与启示[J].猪业科学，2008（8）：90-94.

[2]农业部畜牧兽医局.NY/T541-2002动物疫病实验室检验采样方法[S].北京：中国标准出版社，2002.

[3]刘茂军，张映，邵国青，等.猪支原体肺炎可疑肺组织PCR检测方法的建立 [J].山西业大学学报：自然科学版，2009，29（5）：444-447.

[4]薛云，赵战勤，陈杨，等.多重PCR方法快速检测猪的5种呼吸道病原菌[J].畜牧兽医学报，2009，40（8）：1222-1228.

[5]嵇辛勤，段志强，华再东，等.香猪场肺炎支原体的血清学调查与分析[J].黑龙江畜牧兽医，2009（9）：92-93.

[6]李彦明，张映.猪肺炎支原体及其生物学研究进展[J].动物医学进展，2003，24（3）：25-27.

[7]Marina Sibila，Maria Pieters，Thomas Molitor，etal.有关猪肺炎支原体感染诊断方法和流行病学的最新观点[J].沈权，译.国外畜牧学 -猪与禽，2009，29（3）：4-10.

[8]Caron J，Ouardani M，Dea S.Diagnosis and differentiation ofmycoplasma hyopneumoniae and Mycoplasma hyorhinis infectionin pigs by PCR amplification of the p36 and p46 genes [J].JClin Microbiol，2000，38（4）：1390-1396.