牛蒡根化学成分的提取、分离和鉴定

马鲁豫，马振环

(1山东中医药大学，济南 250011;2阳谷县中医院)

牛蒡又名白肌人参，属菊科，目前的研究大多集中于牛蒡子和牛蒡叶的化学成分和药理活性上，关于牛蒡根化学成分的研究较少报道。2008年 10月，我们对牛蒡根的化学成分进行了系统研究，分离并鉴定了 6个化合物，分别为丁二酸(Ⅰ )、β-D-果糖乙苷(Ⅱ)、齐墩果酸(Ⅲ )、熊果酸(Ⅳ)，β-谷甾醇(Ⅴ)和胡萝卜苷(Ⅵ)，其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ目前鲜见相关报道。

仪器与材料:Stuart smp3型熔点测定仪(未校正);NICOLET AVATAR-330型红外光谱仪;Bruker advanced 400型核磁共振仪(内标TMS);Varian INOVA-600型核磁共振仪(内标TMS);Agilent Trap VL型质谱仪;色谱用硅胶为青岛海洋化工厂产品;所用试剂均为分析纯。牛蒡根药材购自山东济南，经鉴定为菊科牛蒡属植物牛蒡的根。

牛蒡根成分提取与分离:取牛蒡根药材 15 kg，用乙醇加热回流提取 2遍，每次 1 h，合并乙醇提取液，回收乙醇至无醇味，得浸膏，水混悬后依次用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到 4个不同极性部位，其中石油醚部位 60 g、乙醚部位 70g、乙酸乙酯部位 50 g、正丁醇部位 200 g。乙酸乙酯部位用氯仿—甲醇系统梯度洗脱，经反复硅胶柱层析，结晶、重结晶等得到化合物Ⅰ～Ⅵ。

牛蒡根分离化合物结构鉴定:①化合物Ⅰ:为无色颗粒状结晶。负 ESI-MSm/z:116.7([M-H]-，准分子离子峰)，98.7([M-H-H2O]-。正 ESI-MSm/z:140.8([M+Na]+，准分子离子峰)，101.2[M+H-H2O]+。在1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)图谱中，有 2组质子单峰信号，δ:2.45(4H，s)和12.16(2H，s)，质子数比例为 1∶2;13C NMR(DMSO-d6，100 MHz)图谱数据可看到一个羧基碳和脂肪族碳，初步推断为丁二酸。与丁二酸对照品共薄层，两者比移值(Rf值)相同。以上理化性质、波谱数据与文献报道基本一致，故鉴定其为丁二酸。②化合物Ⅱ:无色粒状结晶。Molish反应阳性，茴香醛—硫酸反应阳性。负 ESI-MS m/z:116.7([M-H]-，准分子离子峰)，98.7([M-H-H2O]-。正 ESI-MSm/z:439.8([M+M+Na]+，准分子离子峰)，230.7([M+Na]+，准分子离子峰)，208.9([M+H]+，准分子离子峰)，179.8[M-C2H5]+。1H NMR(D2O，400MHz)图谱中出现两组相互偶合的质子信号，δ1.08(3H，t，J=7.2 Hz，H-2′)和 δ3.69(2H，q，J=7.2 Hz，H-1′)，故化 合物含有乙 氧基片段;13C NMR(D2O，100 MHz)图谱数据可看到 14.8(C-2′)和 56.7(C-1′)，进一步证实化合物中有乙氧基片段。碳谱中还观察到5个连氧碳信号和一个缩酮碳信号:61.3(C-1)，100.7(C-2)，69.6(C-3)，69.3(C-4)，68.3(C-5)，63.8(C-6)。以上理化性质及波谱数据与文献报道基本一致，故鉴定其为 β-D-果糖乙苷。③化合物Ⅲ:为白色无定形粉末。Liebermann-Burchard反应阳性，依据1H NMR和13C NMR的图谱特征初步推测为齐墩果烷型五环三萜类化合物。正ESI-MSm/z:479.2([M+Na]+，准分子离子峰)，457.1([M+H]+，准分子离 子峰)，439.1[M-H2O+H]+。在1HNMR(C5D5N，600MHz)图谱中，可以观察到 7个甲基质子信号，均为单峰。13C NMR数据与齐墩果酸数据基本一致。与齐墩果酸对照品共薄层两者 Rf值完全相同。以上理化性质、波谱数据与文献报道基本一致，故鉴定其为齐墩果酸。④化合物Ⅳ:为白色无定形粉末。Liebermann-Burchard反应阳性，依据其1HNMR和13CNMR图谱特征初步推测为乌苏烷型五环三萜类化合物。正 ESI-MS m/z:479.3[M+Na]+，准分子离子峰)，457.3([M+H]+，准分子离子峰)，439.3([M-H2O+H]+。在1H NMR(C5D5N，600 MHz)图谱中，可以看到 7个甲基质子信号，其中 5个为单峰，2个裂分为双峰。13CNMR数据与熊果酸的数据基本一致;与熊果酸对照品共薄层两者Rf值完全相同。以上理化性质、波谱数据与文献报道基本一致，故鉴定其为熊果酸。⑤化合物Ⅴ:无色针晶。Liebermann-Burchard反应阳性，推测该化合物可能为甾体类;与 β-谷甾醇对照品共薄层 Rf值一致，且混合熔点不下降。以上理化性质、波谱数据与文献报道基本一致，故鉴定为 β-谷甾醇。⑥化合物Ⅵ:白色粉末。Liebermann-Burchard反应阳性，用10%的硫酸乙醇溶液显色为紫红色，与胡萝卜苷的红外光谱(IR)数值基本相同;与胡萝卜苷对照品共薄层 Rf值一致，且混合熔点不下降。以上理化性质、波谱数据与文献报道基本一致，由此鉴定为胡萝卜苷。