卡托普利和氯沙坦对血管性痴呆模型大鼠脑组织中TNF-α、IL-1β及AchE水平的影响研究Δ

黄新武，张红，李国春，李华，章卓，秦大莲(.泸州医学院药学院药理教研室，泸州市646000；.泸州医学院附属中医院药剂科，泸州市646000)

血管性痴呆(Vascular dementia，VD)是由一系列脑血管因素导致脑组织损害引起的痴呆综合征，其不仅严重损害患者的健康，影响患者的生命质量，也给其家庭和社会带来沉重的负担。VD占各类痴呆的首位，随着人类社会的老龄化，VD已是国内、外医学界研究的重要课题。由于对其发病机制尚不十分明确，亦缺少治疗VD的特效药物，因此，积极探寻防治VD的有效途径具有重要医学价值和社会意义。研究[1]表明，脑内具有独立的肾素-血管紧张素系统(RAS)，其在VD发病中起重要作用。卡托普利(Kaptopril)是最常用的一种血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)，可直接抑制ACE的活性，减少血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的生成；氯沙坦(Losartan)属AngⅡ受体1(AT1受体)阻滞药，通过阻滞AT1受体对抗AngⅡ的作用。本研究建立了VD大鼠模型，此前已通过Morris水迷宫法观察到卡托普利和氯沙坦对模型大鼠学习记忆能力有良好的改善作用[2]，现就二者对模型大鼠脑组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β及乙酰胆碱酯酶(AchE)水平的影响进行研究，进一步探讨其改善VD的作用机制。

1 仪器与材料

1.1 仪器

400R低温离心机(德国Heraeus公司)；722分光光度计(上海精密仪器有限公司仪器总厂)。

1.2 试药

卡托普利(片剂，汕头金石制药总厂，批号:080505，规格:每片25 mg)；氯沙坦(氯沙坦钾胶囊，北京万生药业有限责任公司，批号:20080903，规格:每片50 mg)；IL-1β、TNF-α放射免疫分析试剂盒(北京普尔伟业生物科技有限公司，批号均为090621)；AchE测定试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号:090511)。

1.3 动物

健康SD大鼠60只，♂，月龄:＞24个月，体重(320±20)g，由泸州医学院实验动物科提供，为一级合格动物，动物合格证号:川医动字第2401115号。

2 方法

2.1 建模与分组

随机取40只大鼠，采用不同时点分别结扎左、右颈总动脉建立VD模型[3]。术后4周通过Morris水迷宫对建模大鼠进行学习记忆能力测定，筛选出学习记忆能力明显障碍的大鼠为建模成功大鼠。将建模成功大鼠30只，随机分为3组，每组10只。根据药品说明书常用量按体重计算给药剂量:卡托普利组，灌胃卡托普利2.5 mg·kg－1，每天1次，持续4周；氯沙坦组，灌胃氯沙坦2.0 mg·kg－1，每天1次，持续4周；模型组，灌胃等量生理盐水。另设假手术组10只，双侧颈总动脉不结扎，其余操作同建模方法；正常对照组10只，不作任何处理，2组均灌胃等量生理盐水。

2.2 指标的检测

给药4周后，检测各组大鼠学习记忆能力。随后处死大鼠，断头取脑，分离大脑皮质和海马组织，各取0.5 g，置于5 mL生理盐水中，加入冰块碾磨，分别制备10%组织匀浆，3000 r·min－1低温离心10 min，取上清液置于－20℃冰箱保存待测。由泸州医学院附属医院核医学科采用放射免疫法测定各组大鼠脑组织匀浆中TNF-α和IL-1β含量。采用化学比色法测定各组大鼠海马组织中AchE活性，具体操作按试剂盒说明书进行。

2.3 统计学方法

所有数据以±s表示，应用SPSS 13.0软件进行单因素方差分析，P＜0.05表示差异具有显著性。

3 结果

3.1 学习记忆能力比较[2]

与模型组比较，卡托普利组与氯沙坦组大鼠逃避潜伏期明显缩短，穿越平台次数明显增加(P均＜0.05)，表明2组学习记忆能力有明显改善。

3.2 脑组织中TNF-α、IL-1β、AchE水平比较

与模型组比较，卡托普利组和氯沙坦组大鼠大脑皮质和海马组织中TNF-α、IL-1β含量明显降低，海马组织中AchE活性明显降低(P均＜0.05)，详见表1。

表1 各组大鼠大脑皮质和海马组织中TNF-α、IL-1β、AchE水平比较(±s，n＝10)Tab 1Comparison of TNF-α，IL-1β and AchE levels in cortex and hippocampus of vascular dementia rats among those group(s±s，n＝10)

表1 各组大鼠大脑皮质和海马组织中TNF-α、IL-1β、AchE水平比较(±s，n＝10)Tab 1Comparison of TNF-α，IL-1β and AchE levels in cortex and hippocampus of vascular dementia rats among those group(s±s，n＝10)

与模型组比较:＊P＜0.05vs.model group:＊P＜0.05

组别卡托普利组氯沙坦组模型组假手术组正常对照组AchE/U·mg－1prot海马组织0.444±0.117＊0.451±0.095＊0.692±0.2710.251±0.091＊0.248±0.035＊剂量/mg·kg－1 2.52.0 TNF-α/ng·mL－1大脑皮质2.210±0.324＊2.250±0.336＊3.477±0.4932.048±0.449＊1.983±0.317＊海马组织2.823±0.511＊3.083±0.469＊5.010±0.7972.502±0.625＊2.391±0.571＊IL-1β/ng·mL－1大脑皮质0.340±0.043＊0.276±0.048＊0.448±0.0380.202±0.055＊0.213±0.034＊海马组织0.278±0.046＊0.248±0.013＊0.447±0.0370.262±0.038＊0.241±0.029＊

4 讨论

VD发生常与大脑皮层病变，尤其是左侧大脑皮层及丘脑、海马组织的缺血缺氧密切相关。脑缺血后，以TNF-α及IL-1β为代表的细胞因子参与许多神经病理过程，TNF-α及IL-1β等细胞因子表达增加，从而介导神经毒性作用，导致神经元损伤[4]，引起与记忆有关的神经递质如乙酰胆碱(Ach)、儿茶酚胺、5-羟色胺等的减少，促使VD的发生。TNF-α是一种早期炎症因子，其作为炎症级联反应的启动者，从而引发继发性损伤，在VD模型术后1个月，TNF-α的表达还是明显增加[5]，其来源可能是多途径的。有研究[6，7]显示，卡托普利能抑制或减少TNF-α的分泌，避免或减轻其对缺血缺氧组织器官的进一步伤害，发挥保护作用。本研究也显示，模型组大鼠脑组织中TNF-α和IL-1β含量明显增加，而卡托普利组和氯沙坦组与模型组比较TNF-α和IL-1β含量明显降低，说明卡托普利和氯沙坦均能减少VD模型大鼠脑组织中TNF-α和IL-1β含量，对神经起保护作用。

VD患者脑内多种神经递质发生改变，其中胆碱能系统明显受损，而学习记忆与中枢胆碱能系统关系极为密切。中枢胆碱能通路是构成学习记忆的主要通路，乙酰胆碱(Ach)是其中的重要神经递质，其浓度升高有利于学习记忆能力的恢复，降低则促进痴呆的发生。Ach由胆碱乙酰化酶(ChAT)合成，AchE分解，通过Ach受体发挥生物学效应。脑缺血时胆碱能神经元退变，AchE释放过多，分解Ach增强，导致Ach浓度降低从而促进痴呆的发生[8]。本研究显示，卡托普利组和氯沙坦组大鼠海马组织中AchE活性与模型组比较明显降低，表明卡托普利和氯沙坦可能通过降低AchE活性减少Ach的降解，从而促进大鼠学习记忆能力的恢复。

[1]Ciobica A，Bild W，Hritcu L，et al.Brain renin-angiotensin system in cognitive function:pre-clinical findings and implications for prevention and treatment of dementia[J].Acta Neurol Belg，2009，109(3):171.

[2]黄新武，李华，秦大莲，等.卡托普利和氯沙坦对血管性痴呆模型大鼠学习记忆的影响[J].中华老年心脑血管病杂志，2010，12(6):497.

[3]黄新武，李华，秦大莲，等.不同时点分别结扎左、右颈总动脉建立大鼠血管性痴呆模型[J].中国老年学杂志，2010，30(14):2006.

[4]Anctil M，Poulain I，Pelletier C.Nitric oxide roodulates peristaltic muscle activity associated with fluid circulation in the sea pansy Renilla koellikeri[J].J Exp Biol，2005，208(10):2005.

[5]景玉宏，宋焱峰，王子仁.血管痴呆大鼠星形胶质细胞增生与TNF-α的表达[J].中华神经医学杂志，2004，3(6):418.

[6]张道友，吴仁胜，陈忠辉，等.卡托普利与洛伐他汀联用对阿霉素肾病大鼠血清TNF-α的影响[J].放射免疫学杂志，2007，20(6):488.

[7]陈玉东.卡托普利对兔心肌缺血再灌注血清TNF-α的影响[J].山东医药，2009，49(45):33.

[8]蔺心敬，胡长林，李吕力，等.血管性痴呆发生机制的研究[J].脑与神经疾病杂志，2003，11(4):235.