不同检测方法对低水平乙型肝炎表面抗原的测定及其临床评估

费春荣，叶爱青，张 钧

(浙江大学医学院附属邵逸夫医院检验科，浙江杭州310016)

乙型肝炎是一种严重危害人类健康的世界性传染病，部分患者可转为慢性感染，甚至发展为肝硬化或肝癌，其危害远远大于其他类型肝癌。HBsAg是乙型肝炎病毒感染和疗效观察的主要标志物之一。有资料显示，低水平HBsAg携带者在人群中占有不小的比例，正常人群HBsAg水平在5ng/ml以下者占2.34%［1］。有人进一步对 HBsAg阳性人群进行研究发现，HBsAg质量浓度在5 ng/ml以下者占阳性人群的13.5%，其中HBsAg质量浓度在1 ng/ml以下者占阳性人群的8.4%，占低水平感染者的 61.9%［2］。因此，对低水平的HBsAg有效检测，在临床诊断、治疗以及流行病学调查中具有重要意义。也因为如此，选择合适的方法来检测HBsAg显得十分重要。我们选择已在国内应用较多的三种方法:①美国雅培公司Architect i2000自动化免疫发光分析仪(CMIA法)，②德国罗氏公司模块电化学发光免疫分析系统 MODULAR〈E〉170(ECLIA法)，③ELISA法，对临床70例标本进行测定，并进行比较和评价。

1 材料和方法

1.1 标本来源 收集2009年5月-2009年12月本院门诊和病房患者血清标本，检测0.05 IU/ml＜HBsAg＜50 IU/ml病例共70例，分离血清，-20℃冷冻保存待检。此70例标本的测定值均为雅培Architect i2000的测定结果，且重复测定两次值均0.05 IU/ml＜HBsAg＜50 IU/ml。同时收集HBsAg＜0.05 IU/ml血清标本50例，即雅培Architect i2000测定为阴性的标本50例，分离血清，-20℃冷冻保存待检。

1.2 试剂

1.2.1 Architect i2000检测血清HBsAg试剂

为美国雅培Architect i2000自动化免疫发光分析仪随机试剂及标准品和质控品。

1.2.2 MODULAR〈E〉170检测血清HBsAg试剂 为德国罗氏公司模块电化学发光免疫分析系统MODULAR〈E〉170随机试剂及标准品和质控品。

1.2.3 ELISA检测方法试剂 由上海科华实业技术有限公司生产。

1.2.4 1 ng/ml、5 ng/ml HBsAg 定值参比血清

由卫生部临检中心提供，批号为0912。

1.3 仪器 Architect i2000自动化免疫发光分析仪(美国 ABBOTT 公司)，MODULAR〈E〉170模块电化学发光免疫分析系统(德国罗氏公司)，酶标仪(Elx 800)，洗板机(Elx 50)。

1.4 方法

1.4.1 Architect i2000采用化学发光微粒子免役分析(CMIA)技术，测定血清中HBsAg。结果报告方式:HBsAg为定量分析，并以浓度≥0.05 IU/ml为阳性。所有阳性标本用中和试验证实。

1.4.2 MODULAR〈E〉170采用电化学发光免疫分析(ECLIA)技术，测定血清中HBsAg。结果报告方式:HBsAg以标本相对光强度单位(RLU)与临界质控相对光强度单位之比(S/CO)≥1.0为阳性。

1.4.3 ELISA法检测血清HBsAg，采用双抗体夹心法。结果报告方式:HBsAg以样本OD值与阴性对照OD值之比≥2.1为阳性。

以上三种方法的详细操作方法和原理参照各自的说明书。

1.5 结果比较和数据处理 我们在实验中以雅培Architect i2000测定结果为参照，并设置1 ng/ml、5 ng/ml定值血清的对照，分别测定三次，取平均值。在Architect i2000上1 ng/ml定值血清测定平均值为0.72 IU/ml，5 ng/ml定值血清测定平均值为4.77 IU/ml。我们将低水平HBsAg分为两个级别，第一级别为＜1 ng/ml，第二级别为1 ng/ml到5 ng/ml之间。因此，70例Architect i2000测定结果为0.05 IU/ml＜HBsAg＜50 IU/ml的标本被分成三组，低水平的两组以及＞5 ng/ml的一组，再用MODULAR〈E〉170和ELISA法进行测定。同样，Architect i2000测定为阴性(即HBsAg＜0.05 IU/ml)的50例标本，也用 MODULAR〈E〉170和 ELISA法进行测定。统计分析采用SPSS 13.0统计软件进行配对χ2检验。

2 结果

2.1 以雅培Architect i2000测定结果为参照，MODULAR〈E〉170测定各组结果见表1。

2.2 以雅培Architect i2000测定结果为参照，ELISA方法测定各组结果如表2。

2.3 鉴于表1、2，有必要对 Architect i2000和MODULAR〈E〉170在总120例标本与＜1 ng/ml组24例标本两种方法测定结果做四格表配对χ2检验。同样，对 Architect i2000和 ELISA方法在总120例标本与1～5 ng/ml组22例标本两种方法测定结果作四格表配对χ2检验。结果见表3。

表1 MODULAR〈E〉170测定各组结果Table 1 Coincidence analysis of HbsAg results between MODULAR〈E〉170 and Architect i2000

表2 ELISA方法测定各组结果Table 2 Coincidence analysis of HbsAg results between Architect i2000 and ELISA

表3 三种不同检测方法的配对χ2检验结果Table 3 Correlation analysis between the three different methodology

3 讨论

目前，对HBsAg弱阳性的研究报道较少，这应引起临床的重视［3-4］。有报道［5-7］认为，HBsAg低值弱阳性的HBV感染，可能与HBsAg低水平表达、HBV的整合、含HBV循环免疫复合物的形成等有关，并与来自宿主方面的诸多因素有关。低浓度的HBsAg的出现，可作为乙肝的早期感染的标志。因此，检测并报告低浓度的HBsAg，具有重要的流行病学和临床意义。

我们以美国雅培Architect i2000自动化免疫发光分析仪的测定结果(≥0.05 IU/ml的血清标本经中和试验证实)为参考，与电化学免疫发光测定Roche MODULAR〈E〉170和ELISA方法进行比较分析。结果显示免疫发光测定Architect i2000与电化学免疫发光MODULAR〈E〉170在测定低水平HBsAg上无显著差别，在＜1 ng/ml组，两者符合率为79.2%(P﹥0.05);1～5 ng/ml组和≥5 ng/ml组符合率都为100%。Architect i2000与ELISA法在测定低水平HBsAg有显著差别(P＜0.05)，两种方法在＜1 ng/ml组符合率为0%，1～5 ng/ml组符合率为 45.5%;≥5 ng/ml组符合率为100%。研究初步表明，在高浓度HBsAg，即≥5 ng/ml时，这三种方法有很高的符合率，结果一致。而在低水平HBsAg检测时，Architect i2000与MODULAR〈E〉170显示了很高的灵敏度，且两种方法之间的符合率也很高。ELISA方法检测灵敏度相对较低，在HBsAg＜1 ng/ml时，很难检出，1～5 ng/ml之间的HbsAg也有54.5%的漏检率。

筛选试验是传染病(例如艾滋病、乙肝等)控制的重要措施，特别强调灵敏度。乙肝是我国第一大传染病，提高筛选灵敏度，对有效切断通过输血、手术等途径传播、蔓延意义重大。最近国家权威部门调查显示，我国成年人群乙肝感染率下降不明显，主要原因是对传播途径控制不严所至。我们认为，临床对HBsAg的筛选，特别是低水平HBsAg检测，采用免疫发光测定或者电化学免疫发光定量方法为佳。

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