p53和c-erbB-2的表达与胃癌浸润的多因素分析

沈长兵,喻 钢

(扬州大学医学院附属姜堰市人民医院普外科,江苏姜堰,225500)

胃癌的发生和发展牵涉许多肿瘤抑制基因和肿瘤相关基因,其中较为引人注目的是p53和c-erbB-2。大量研究表明,p53和c-erbB-2与胃癌的生物学行为密切相关,但对其在胃癌发展过程中的作用则尚未完全明了。浸润性生长是胃癌最具特征性的生物学行为之一,我们采用免疫组化的方法对不同浸润深度的胃癌手术切除标本进行研究,初步探讨p53和c-erbB-2的表达与胃癌浸润的关系。

1 材料和方法

收集姜堰市人民医院普外科2005年5月至2008年5月行手术切除的胃癌病例139例,均经病理证实,包括黏膜内癌23例、浸润至黏膜下层31例、浸润至肌层47例、浸润至浆膜38例。其中男性78例,女性61例,年龄最大 77岁,最小38岁。胃癌病例术前均未经放疗、化疗。

p53和c-erbB-2鼠抗人单克隆抗体(Santa Cruz公司),免疫组化SP试剂盒和DAB显色试剂盒(北京中山生物技术有限公司)。

标本常规福尔马林固定,石蜡包埋切片,分别作苏木精-伊红(HE)和免疫组化染色。采用免疫组化SP试剂盒检测,操作按说明书进行。用已知阳性切片作阳性对照,PBS代替一抗作阴性对照,光镜观察。

p53、c-erbB-2均以细胞核或细胞核伴有胞浆出现棕黄色颗粒作为阳性细胞,只有胞浆阳性视为非特异染色。按阳性细胞率分:阳性细胞数无或<10%为(-),阳性细胞数≥10%为弱阳性(Ⅰ),阳性细胞数≥25%为阳性(Ⅱ),阳性细胞数≥50%为强阳性(Ⅲ)[1]。

2 结 果

2.1 不同浸润深度的胃癌中p53的表达阳性率及强度比较(表1)

表1 不同浸润深度的胃癌中p53的表达阳性率及强度比较

2.2 不同浸润深度的胃癌中c-erbB-2的表达阳性率及强度比较(表2)

表2 不同浸润深度的胃癌中c-erbB-2的表达阳性率及强度比较

2.3 p53和c-erbB-2的阳性表达与胃癌浸润深度的关系(表3)

表3 p53和c-erbB-2的阳性表达与胃癌浸润深度的关系

多分类有序反应变量logistic回归分析,将p53和c-erbB-2的表达强度与胃癌浸润深度进行累计 Logit回归模型多因素分析(Ordinal过程)。以胃癌浸润深度为有序分类应变量。似然比检验,χ2=47.134,P=0.000<0.05,模型拟合有统计学意义;适合优度检验,Pearson检验,χ2=6.179,P=0.519,Deviance检验,χ2=8.330,P=0.304,模型拟合良好;平行性检验,χ2=6.513,P=0.164,平行性成立。

2.4 p53和c-erbB-2的表达强度与胃癌浸润深度的关系(表4)

表4 p53和c-erbB-2的表达强度与胃癌浸润深度的关系

多分类有序反应变量logistic回归分析,将p53和c-erbB-2的表达强度与胃癌浸润深度进行累计 Logit回归模型多因素分析(Ordinal过程)。以胃癌浸润深度为有序分类应变量。似然比检验,χ2=67.120,P=0.000<0.05,模型拟合有统计学意义;适合优度检验,Pearson检验,χ2=24.845,P=0.962,Deviance检验,χ2=29.358,P=0.869,模型拟合良好;平行性检验,χ2=14.784,P=0.253,平行性成立。

3 讨 论

p53基因是抑癌基因,位于人类17号染色体17p13.1[2],编码相对分子质量为530 00的磷酸化蛋白,可分为野生型和突变型。正常的p53基因又称野生型p53基因,是肿瘤抑制基因,通过产生p53蛋白参与细胞周期和细胞增殖的调节,防止细胞癌变。因为正常细胞中p53蛋白含量较低,半衰期短,所以正常组织测不到p53蛋白表达。当p53基因发生突变时,所表达的p53蛋白构型发生变化,稳定性增加,在细胞内半衰期延长,这种构型发生变化的蛋白具有促进正常细胞恶性转化,导致细胞恶性增殖的功能,此时恶变组织中可检测出p53蛋白,p53蛋白积聚意味着其抑癌功能丧失[3]。

c-erbB-2基因(又称HER2/neu)是癌基因,定位于人类染色体17q21,编码产物为185 000的糖蛋白[4],即c-erbB-2蛋白(ERBB2)。它和表皮生长因子受体(EGFR)具有高度同源性,同属于受体酪氨酸激酶(RTK)Ⅰ家族,该家族包括 ERBB1(EGFR)、ERBB2、ERBB3和ERBB4。ERBB受体家族成员间形成异源二聚体是ERBB受体家族介导细胞信息传递的普遍方式,在形成异源二聚体的过程中,ERBB2是其他家族成员优先选择的对象[5]。在生理条件下,ERBB2与其他RTKⅠ受体形成异二聚体而被激活,参与细胞关键功能的调控,涉及细胞生存、增殖、凋亡、迁移和分化。当某些因素导致ERBB2过表达时,将导致异常的ERBB2同型二聚体形成以及通过包含ERBB2的异二聚体增强信号传递,导致RTKⅠ调控网络瓦解,并具有肿瘤转化活性[6]。

作者用免疫组化的方法对139例胃癌标本进行了研究,结果显示p53的阳性率为48.9%,而c-erbB-2的阳性率则为44.6%(表1、2)。在不同浸润深度的胃癌中,p53和c-erbB-2的阳性率并不相同,随着浸润深度的增加,p53和 cerbB-2的阳性率都显示出一种上升的趋势(分别P<0.05、P<0.01),与张志强等[7]的研究结果基本一致。但p53的表达强度在不同的浸润深度没有显著差别;而c-erbB-2则随着胃癌浸润深度的增加,其表达强度也随之增强,在胃癌浸润至浆膜或浆膜外时,其表达强度最高。

本研究结果显示:p53及c-erbB-2的阳性表达对胃癌的浸润均有促进作用,OR值分别为1.972和8.256。进一步分析p53和c-erbB-2的表达强度的影响,结果显示:c-erbB-2在任何表达强度对胃癌浸润深度均有影响,且OR值随着表达强度的增加而逐步上升;p53只有在达到较大的表达强度时,才对胃癌浸润深度有影响。

作者还发现,p53和c-erbB-2表达的时机也不相同。在胃癌发生最初的黏膜内癌阶段就已经出现p53过表达的现象(阳性率达30.4%),此时并没有出现c-erbB-2过表达,在胃癌进展到黏膜下癌阶段开始浸润发展时c-erbB-2过表达的现象才开始出现,2者都伴随着胃癌浸润发展的全过程。实际上,p53的表达并不是从黏膜内癌阶段才开始的。有研究发现[8],在幽门螺旋杆菌相关慢性胃炎的病例中就已经有p53蛋白的阳性表达,并且阳性率与胃黏膜萎缩及化生等癌前病变密切相关。Zhang等[9]在对转基因小鼠的研究中发现,在已经发生p53基因突变的小鼠中,p53依赖的细胞凋亡减少可以促进口腔癌与胃食管癌的生长和演化。而 Lee等[10]则发现,ERBB2过表达在进展期胃癌中存在,ERBB2突变导致ERBB2介导的信号途径的改变可能促成癌症的发展。在乳腺癌的研究中,认为p53基因功能的崩溃在致癌过程中发挥中枢作用[11],而在高分化的病例中c-erbB-2的扩增被认为是一个独立的预后因素[12]。推测p53的突变与胃癌的起源相关,并且在胃癌的发展过程中,由于突变的p53失去了抑癌功能,不能修复损伤的DNA,有利于癌基因激活并发挥作用。

[1] 任秋华,肖明明,侯慧,等.ER,PR,CerbB-2,p53和Ki67蛋白在乳腺癌中的表达及其意义[J].中国肿瘤临床与康复,2010,17(1):13.

[2] Fadare O,Zheng W.Insights into endometrial serous carcinogene-sis and progression[J].Int J Clin Exp Pathol,2009,2(5):411.

[3] 王宏波,纪常生,张军.p53和c-erbB-2与胃癌关系的研究进展[J].中国普外基础与临床杂志,2010,17(8):880.

[4] 陈斌,罗荣城,崔斐,等.胃癌HER/neu基因表达与预后的相关性[J].南方医科大学学报,2006,26(3):344.

[5] 黄健,郑莉萍,李芳,等.原癌基因c-erbB2在原始卵泡启动生长中的作用[J].中国应用生理学杂志,2010,26(2):165.

[6] Gilbertson RJ.ERBB2 in pediatric cancer:innocent until proven guilty[J].Oncologist,2005,10(7):508.

[7] 张志强,姜林,李斌,等.P53、C-erbB-2和 VEGF在胃癌中的表达及其临床意义[J].武警医学院学报,2010,19(7):513.

[8] Kodama M,Murakami K,Okimoto T,et al.Expression of mutant type-p53 products in H pylori-associated chronic gastritis[J].World J Gastroenterol,2007,13(10):1541.

[9] Zhang QZ,Yian W,Yao RS,et al.p53 T ransgenic Mice Are Hi-ghly Susceptible to 4-Nitroquinoline-1-Oxide-Induced Oral Cancer[J].Mol Cancer Res,2006,4(6):401.

[10] Lee JW,Soung YH,Seo SH,et al.SomaticMutations of E-RBB2 kinase domain in gastric,colorectal,and breast carcinomas[J].Clin Cancer Res,2006,12(1):57.

[11] Thomas E R,Li SQ,Robert H,et al.p53 alterations and prote-in accumulation in benign breast tissue and breast cancer risk:a cohort study[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2006,15(7):1316.

[12] Zagouri F,Sergentanis TN,Zografos GC.Precursors and preinvasive lesions of the breast:the role of molecular prognostic markers in the diagnostic and therapeutic dilemma[J].World J Sur Oncol,2007,5:57.