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广西壮族非小细胞肺癌患者EGFR基因突变的研究

2011-08-01利基林林书瀚唐艳萍谭晓玉黎远冬容敏华沈筱芸张力图

中国癌症防治杂志 2011年3期
关键词:广西壮族吉非酪氨酸

利基林 林书瀚 唐艳萍 谭晓玉 黎远冬 邓 伟 欧 超 容敏华 沈筱芸 张力图

肺癌是威胁人类健康最主要的恶性肿瘤之一,其生存率低。近年来,以表皮生长因子受体(EGFR)为靶标的肺癌分子靶向治疗已引起普遍关注。EGFR是一种受体型酪氨酸激酶,在许多肿瘤中过表达和(或)发生突变,通过信号转导控制肿瘤生长,并与新生血管生成、肿瘤侵袭和转移等有密切的关系。EGFR酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKI)的药物,以吉非替尼(gefitinib)为代表,在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)特别是在肺腺癌的治疗中显示出很好的抗肿瘤疗效。有研究[1]表明:ECFR基因外显子19~21突变与肺癌患者对吉非替尼的敏感性有关。因此,依据EGFR基因检测结果选择治疗对象,通过筛选最适合的患者,进行有针对性地靶向治疗,从而可显著提高药物疗效。目前已有肺癌EGFR基因突变的研究,但尚未有广西壮族人群的相关报道。本研究检测163例广西壮族NSCLC患者的EGFR突变情况,并与国内8个省市地区进行比较,现报道如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选取广西医科大学附属肿瘤医院收治的广西籍壮族NSCLC患者163例,其中男性111例,女性52例;年龄27~83岁,中位56.5岁。病理组织学分型:腺癌95例,鳞癌26例,腺鳞癌14例,其他28例。

1.2 标本采集

1.2.1 收集新鲜肿瘤组织:肺癌组织手术切除后快速放入液氮中冻存,然后置于-80℃低温冰箱保存。

1.2.2 肿瘤组织病理石蜡切片:厚度为6μm,切片不少于10片,直接用干净的镊子将组织切片转移至干净的1.5ml离心管。

1.3 DNA提取

1.3.1 取新鲜肿瘤组织约50mg,用QIAGEN公司的DNeasy Blood&Tissue Kit(商品序列号:69504)提取DNA,紫外分光光度计测定DNA纯度及浓度。

1.3.2 肿瘤组织行病理切片10片,用QIAGEN公司的 QIAamp DNA FFPE Tissue Kit(商品序列号:56404)提取DNA,以紫外分光光度计测定DNA纯度及浓度。

1.4 实时荧光定量PCR扩增

采用扩增耐突变系统 (amplification refractory mutation system,ARMS-PCR)法扩增 EGFR基因18、19、20及21外显子。具体操作方法参照人类EGFR基因29种突变检测试剂盒(荧光PCR法)(厦门艾德生物医药科技有限公司)说明书进行,反应循环参数:95℃ 5min;95℃ 25s,64℃ 20s,72℃ 20s,循环 15 次;93℃ 25s,60℃ 35s,72℃ 20s,循环 31 次。

1.5 统计学分析

采用SPSS 13.0软件进行χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EGFR基因突变的检出率

163例NSCLC标本中共检出EGFR基因突变73例,总检出率为44.8%。其中外显子18突变7例,占9.6%;外显子19突变28例,占38.4%;外显子20突变10例,占13.7%;外显子21突变28例,占38.4%。以外显子19及21突变较为多见。

2.2 EGFR基因突变与患者性别及组织类型的关系

本组男性患者(n=111)和女性患者(n=52)的EGFR基因突变率分别为38.7%(43/111)、57.7%(30/52),女性患者的突变率明显高于男性(P<0.05)。95例腺癌中48例(50.5%)发生突变,26例鳞癌中8例(30.8%)突变;14例腺鳞癌中11例(78.6%)突变,其他组织类型的28例标本中发生EGFR突变6例(21.4%)。

2.3 我国肺癌EGFR基因突变发生率的情况

本研究收集、整理近几年我国台湾和广东、云南、湖南、上海、天津、北京、吉林等8个省市关于EGFR基因突变的报道资料,并与广西壮族NSCLC患者EGFR基因突变进行统计分析和比较。检测全国8个省市总计737例肺癌病例,结果有221例NSCLC EGFR 基因发生突变,突变率为 30.0%[2~8]。见表 1。本研究EGFR基因突变检出率为44.8%,显著高于文献报道国内8个省市的总体水平(30.0%)(χ2=13.29,P <0.05)。

表1 我国8个省、市肺癌EGFR基因突变情况

3 讨论

临床上使用较多的吉非替尼是一种新型的EGFR受体酪氨酸激酶口服抑制剂,作为分子靶向药物,目前已成为治疗非小细胞肺癌患者的一种有效措施,在NSCLC治疗中有显著的抗肿瘤作用。然而,国际多中心、随机化临床试验的结果显示,吉非替尼的总体有效率仅为10% ~30%[9],提示此类药并非对所有肺癌患者都具有疗效。有研究表明吉非替尼的疗效与EGFR基因外显子18、19、20和21(编码胞内酪氨酸激酶活性区域)的突变有关。基因突变位于EGFR酪氨酸激酶活性区域的ATP结合位点,这些位点的突变可以使活化信号更加强烈和持久,这也是EGFR受体酪氨酸激酶抑制剂对EGFR基因突变的肺癌有效的原因[10],并且还证明了EGFR突变与肿瘤的组织学类型、人种、性别等临床特征有关。由此提示EGFR突变可作为预测对酪氨酸激酶抑制剂疗效敏感的指标,EGFR基因突变检测对于临床肺癌患者的个体化治疗具有重要的参考价值。

本研究163例NSCLC中共检测到EGFR基因突变73例,总突变率为44.8%。其中男性患者EGFR基因突变率为38.7%(43/111),女性患者EGFR基因突变率为57.7%(30/52)。女性患者EGFR基因突变率显著高于男性患者EGFR基因突变率(P<0.05)。这与文献报道的结果相同。EGFR突变具有性别差异,目前还没有明确的解释,其确切机制还需进一步阐明,推测与雌激素有关。在NSCLC细胞株和小鼠移植模型的实验中,发现雌激素受体拮抗剂和吉非替尼间具有协同效应,从而推测EGFR通路和雌激素受体间存在相互作用。本研究的突变主要发生在外显子19和21,两者均为28例突变,各占突变总数38.4%,这与我国EGFR基因突变的主要形式一致[9]。本研究还发现广西壮族NSCLC患者EGFR基因突变主要以腺型(包括腺癌和腺鳞癌)为主,其突变发生率占该组织类型病例数的54.1%及突变总数的80.8%(59/73),这与国内外的相关报道相似。

本研究受试对象均为广西壮族NSCLC患者,为了进一步探讨EGFR基因突变与民族的差异性,我们将本实验结果与国内部分的相关报道(包括台湾、广东、云南、湖南、上海、天津、北京、吉林等)进行了比较,并对这些省市共737例肺癌EGFR突变进行综合分析,结果该8个省、市肺癌 EGFR基因突变率为30.0%,与之前有学者[9]于2005年对北京、上海、云南、广东及台湾等5个省、市地区统计的突变率(34.0%)相近。本实验显示,广西壮族肺癌患者EGFR基因突变率(44.8%),显著高于我国8个省市地区肺癌EGFR基因突变的水平(P<0.05)。我国民族众多,各地肺癌EGFR基因突变存在差异,广西壮族NSCLC患者EGFR基因突变率比我国部份地区EGFR基因突变水平相对较高,这可能与民族种类、遗传背景、地域差异等因素相关,有关方面仍需深入探讨和研究。

综上,广西壮族NSCLC患者的EGFR基因突变率显著高于中国部份地区总体水平,且与患者性别、病理类型有关,主要见于女性、腺癌和腺鳞癌,这些是选用EGFR酪氨酸激酶抑制剂的优势人群。由于NSCLC中EGFR基因突变与EGFR酪氨酸激酶抑制剂的药物治疗敏感性显著相关,临床上应根据EGFR突变情况来选择用药,发挥分子靶向药物的疗效,使广大肺癌患者受益。

[1] Gazdar AF,Minna JD.Inhibition of EGFR signaling:all mtations are not created equal[J].PLoS Med,2005,2(11)∶1085-1087.

[2] Huang SF,Liu HP,Li LH,et al.High frequency of epidermal growth factor receptor mutations with complex patterns in non-small cell lung cancers related to gefitinib responsiveness in Taiwan [J].Clin Cancer Res,2004,10(24)∶8195-8203.

[3] Qin BM,Chen X,Zhu JD,et al.Identification of EGFR kinase domain mutations among lung cancer patients in China:implication for targeted cancer therapy[J].Cell Research,2005,15(3)∶212-217.

[4] 奉水东,谭红专,胡国斌,等.PCR-SSCP检测非小细胞肺癌EGFR基因突变的敏感性分析[J].实用肿瘤杂志,2008,23(4)∶307-310.

[5] 姜 斌,朱冠山,刘 峰,等.中国人非小细胞肺癌EGFR基因突变的研究[J].上海第二医科大学学报,2005,25(11)∶1148-1150.

[6] 刘红雨,李 颖,陈 钢,等.187例非小细胞肺癌中EGFR基因突变和扩增的检测及其临床意义[J].中国肺癌杂志,2009,12(12)∶1219-1228.

[7] Mu XL,Li LY,Zhang XT,et al.Gefitinib-sensitive mutations of the epidermal growth factor receptor tyrosine kinase domain in chinese patients with non-small cell lung cancer[J].Clin Cancer Res,2005,11(12)∶4289-4294.

[8] 尹光浩,刘 伟,刘国津,等.非小细胞肺癌的EGFR表达与EGFR基因突变的比较[J].中国实验诊断学,2009,13(2)∶200-202.

[9] 董强刚.肺癌靶向治疗研究进展与我国肺癌的EGFR基因突变概况[J].肿瘤,2005,25(6)∶625-628.

[10] Shigematsu H,Lin L,Takahashi T,et al.Clinical and biological features associated with epidermal growth factor receptor gene mutations in lung cancers[J].J Natl Cancer Inst,2005,97(5)∶339-346.

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