疏肝健脾饮对糖尿病性胃轻瘫大鼠的干预作用

张 媛，蔡 侃，朱容容

糖尿病性胃轻瘫（DGP）即糖尿病胃动力障碍，又称糖尿病胃麻痹，是一组以胃排空延缓为特征的临床症状群。以往由于诊断技术的落后，该病发病率较低，有报道此合并症发病率为22%，另有报道为0.08%[1]，故未引起临床医师的重视。自从开展核素胃排空测定后，近10年来研究发现患病率多在50%左右[2]。由此可见，糖尿病性胃轻瘫是糖尿病的常见合并症，应引起临床医师的注意。现代医学对糖尿病性胃轻瘫，主要是对症治疗，在控制血糖的基础上，加用胃动力药物，有一定效果，但疗效不理想。因此，寻求中医药治疗该病的有效方法是摆在中医药工作者面前的艰巨任务。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 动物 SPF级雄性Wistar大鼠40只，200～220 g/只，山东中医药大学动物中心提供。

1.1.2 药物 疏肝健脾饮（柴胡 9 g，白芍 15 g，枳实 9 g，党参 12 g，黄芪 30 g，白术 9 g，清半夏 9 g，黄连 9 g，干姜 6 g，厚朴 9 g，木香 9 g，当归 12 g）由山东省中医院中药房提供，上药煎煮30 min，2次过滤，浓缩为 2 g/ml。

1.1.3 试剂 链脲佐菌素及一氧化氮合酶免疫组化试剂盒：Sigma公司产品，北京博爱科贸有限责任公司；β2-肾上腺素能受体（β2-AR）试剂盒：北京北方伟业发展有限公司；5-羟色胺受体（5-HT4R）试剂盒 ：上海市史瑞可生物科技有限公司；胰岛素、C肽放射免疫分析药盒：北京东亚放免技术研究所。

1.1.4 仪器 罗氏血糖仪、试纸；AEL-160型电子天平：日本岛津；EG1160石腊包埋机、RM2135石腊切片机、HI1220烤片机：德国LEICA公司；BX40生物显微镜、BHB生物摄影显微镜：日本奥林巴斯；Image-pro plus 5.1多媒体图像分析仪：美国MediaCybemetics公司。

1.2 方法

1.2.1 造模及分组 大鼠购回后稳定饲养3 d。检测尿糖阴性，无阳性动物。称重后随机选出10只作为正常组，剩余30只禁食18 h后，2%链脲佐菌素（STZ）以50 mg/kg的剂量腹腔注射，正常组注射等体积生理盐水，注射后24、72 h各测定大鼠非空腹尾静脉血糖，将血糖持续>16.7 mmoL/L的大鼠随机分为模型组15只、中药组15只。各组大鼠给予标准鼠饲料喂养，均随意饮水。

1.2.2 给药方法 模型组和中药组在造模后开始给予不规则饮食，仅单日给食双日不给食，均自由饮水。4周后中药组给予中药灌胃，模型组给予等剂量生理盐水灌胃，1次/d，给药4周。给药剂量相当于成人临床常用剂量的2倍[3]。称重1次/周，按新体重重新计算给药量。

1.2.3 标本采集及检测 ①一般项目：大鼠的皮毛、饮食、活动、大小便情况；②每周测大鼠非空腹尾静脉血糖及体重；③给药8周后禁食24 h，测空腹血糖后，给予10%炭粉混悬液（其中活性炭和阿拉伯胶各占10%），按l ml/100 g灌胃，麻醉大鼠，30 min后打开大鼠腹腔，用镊子提取上端至幽门、下端至回盲部的肠管，置于托盘上，将小肠拉成直线，测量炭粉前端至幽门括约肌距离及幽门括约肌至小肠末端距离，计算胃肠推进指标 [胃肠推进指标=炭粉前端至幽门括约肌距离 （cm）/幽门括约肌至小肠末端距离（cm）×100%]；心脏取血 6 ml，4 ℃自然凝固，离心，取血清2 ml，-20℃冰箱保存；④取胃窦组织，4%多聚甲醛固定，测定nNOS、5-HTR、β2-AR等指标；方法：脱水、石蜡包埋、切片，按免疫组化试剂盒说明书的步骤染色，检测胃窦肌间神经丛中免疫反应阳性神经元及胃黏膜平均灰度值和积分光密度：用Image-pro plus多媒体图像分析仪， 以像素点 0.389 μm 长，4.306 μm×104 μm 测量窗下每张随机选取400倍镜下5个视野作图像分析，以5个视野的均值作为该样本的测量值；神经免疫组化染色以细胞质及细胞核内出现棕黄色着色者为阳性。

2 结 果

2.1 一般情况 正常组大鼠毛发光滑、好动机警、二便正常；模型组和中药组在造模2 d后出现多饮、多食、多尿、粪质变稀，1周后皮毛凌乱无光、精神萎靡、活动迟缓、大便量少，体重比正常组明显减轻，并逐渐出现死亡。给药终止时正常组10只、中药组12只、模型组10只。

2.2 血糖动态变化 造模前各组大鼠血糖无显著性差异（P＞0.05），造模8周后，正常组大鼠血糖与模型组、中药组大鼠相比有非常显著性差异（P<0.01），造模8周后血糖与造模7 d后比较无统计学差异（P＞0.05，表 1）。

表1 各组大鼠血糖水平（mmol/L）

2.3 胃肠推进指标比较 中药组、模型组大鼠的胃肠推进指标均低于正常组（P<0.01）。中药组大鼠的胃肠推进指标明显高于模型组（P<0.05）。见表2。

表2 各组大鼠的胃肠推进指标

2.4 免疫组化结果 nNOS：正常组与模型组比较P<0.01，正常组与中药组比较P＞0.05，中药组与模型组比P<0.01；5-HT4R：正常组与模型组比P<0.01，正常组与中药组比P＞0.05。中药组与模型组比P<0.05。 β2-AR：各组之间无显著性差异（P＞0.05）。见表3。

表3 各组大鼠的免疫组化结果（μmol/L）

2.5 各组大鼠血清胰岛素和C肽水平 中药组和模型组的血清胰岛素明显低于正常组 （P<0.05），C肽明显高于正常组（P<0.05）；中药组大鼠的血清胰岛素高于模型组 （P<0.05），C肽水平明显低于模型组（P<0.05）。 见表 4。

3 讨 论

造模3 d后，正常组大鼠血糖与造模后大鼠相比，均有非常显著性差异（P<0.01）；7 d后造模大鼠血糖稍有下降但与8 d后血糖值无显著性差异，说明造模1周后糖尿病大鼠的高血糖状态已经造成并趋于稳定。

表4 各组大鼠血清胰岛素和C肽水平

肠肌间神经丛nNOS阳性神经的显著改变是糖尿病性胃轻瘫较易出现的病理变化，通常作为糖尿病胃神经病变的标志。本实验模型组nNOS显著低于正常组（P<0.01）；并且模型组大鼠胃排空率显著低于正常组（P<0.01）。表明本实验观察的糖尿病大鼠存在神经病变，可作为糖尿病性胃轻瘫模型进行研究。NO可引起胃肠道平滑肌松弛并调节食管下括约肌活动，在胃排空的肠壁机械感受器和化学感受器的反馈调节中发挥重要作用[4]，nNOS为神经元型一氧化氮合酶，参与正常生理活动。本实验结果显示模型组nNOS与正常组相比有显著性差异。模型组nNOS表达明显增高，证明nNOS参与了糖尿病性胃轻瘫的致病过程。

研究显示：8周后大鼠的胃肠推进指标，正常组明显高于模型组，中药组明显高于模型组 （P<0.01）；说明实验大鼠存在胃肠动力障碍，同时说明健脾疏肝饮可改善糖尿病性胃轻瘫大鼠的胃肠功能，加速糖尿病性胃轻瘫大鼠的胃排空。

胃肠道至少存在四种5-羟色胺受体，其中5-HT3R和5-HT4R与胃肠运动和分泌功能最为密切。5-HT4R是一种G蛋白偶联受体，影响胃肠道动力及内脏感觉[5]。胃肠功能紊乱时，存在一定程度的5-HT4R的代谢紊乱。本实验结果显示5-HT4R在正常组和中药组中强表达，与模型组有非常显著性差异（P<0.01），表明5-HT4R的减少可能与糖尿病性胃轻瘫的发病机制有关，表明健脾疏肝饮在干预糖尿病性胃轻瘫大鼠模型的试验中有显著作用。

有研究显示糖尿病大鼠胃肠功能紊乱时β2-肾上腺素能受体减少[6]。本实验结果未证实其相关性意义。

糖尿病性胃轻瘫病机为脾气虚弱、运化无力，中焦气机不行逆于上，此其一。其二，肝主疏泄，气机不畅责之于肝；且土气不足，肝木逆乘脾土，脾气受伤，则食难停化，胃失和降，气逆于上而发生该病。笔者认为，糖尿病性胃轻瘫，病位在胃，病变脏腑除脾胃外，尚与肝脾有关。健脾疏肝饮取逍遥散、柴胡疏肝散、枳实消痞丸、枳术丸、半夏泻心汤、四君子汤之意，组合加减而成。全方补泻兼施、辛开苦降、寒温并用。实验结果亦证明健脾疏肝饮具有降糖和促进胃排空的功效，且干预糖尿病性胃轻瘫大鼠疗效显著。

[1]Clark D，Nowak T.Diabetic gastroparesis[J].Postgrad Med,1994,95(2):195.

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[3]孙瑞元.定量药理学[M].北京：人民卫生出版社，1987.243.

[4]Oribata.Nitric oxide mediates mechno-and chemo-receptor activated intestinal feedback control of gastric emptying[J].Dig Dis Sci，1996，41(12)：1303.

[5]李天津，余保平.5-羟色胺3、4受体与胃肠运动及临床意义[J].国外医学消化系疾病分册，2004，24（6）：354-357.

[6]张亚萍，石德红，张宽学，等.糖尿病大鼠胃肠功能紊乱时β2-肾上腺素能受体与5-羟色胺受体表达的变化[J].中华糖尿病杂志，2004，12（4）：297-299.