高效液相色谱法测定敛肺止咳丸中吗啡含量

张群芳

敛肺止咳丸是以罂粟壳为主药制成的医院制剂，具敛肺、降气、止咳功效，临床用于急慢性支气管炎，疗效确切。因标准中无含量测定项，故参阅2010年版《中国药典(一部)》中高效液相色谱法测定罂粟壳中吗啡的含量[1]346，笔者建立了高效液相色谱法测定样品中吗啡的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Dionex UltiMate 3000泵，Dionex UltiMate 3000二极管阵列检测器。吗啡对照品(批号为171201－200822，105℃干燥1 h后使用，含量为99.8%，中国药品生物制品检定所);敛肺止咳丸(批号分别为100610，100915，100828，荆门市第一人民医院);水为纯化水，乙腈、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Kromasil C8柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈－0.01 mol/L磷酸氢二钾溶液－0.005 mol/L庚烷磺酸钠(24∶38 ∶38);检测波长:220 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:30 ℃;进样量:10μL。

2.2 溶液制备

精密称取吗啡对照品12.64 mg，置100 mL棕色量瓶中，加甲醇约30 mL，超声15 min，冷却，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为吗啡贮备溶液;精密吸取贮备溶液3 mL，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取本品(批号为100610)适量，研细，精密称取供试品2.0 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定质量，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，即得供试品溶液。按处方制备工艺制得不含罂粟壳的阴性样品，同供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验:精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各10μL，分别注入高效液相色谱仪测定。结果阴性对照品溶液色谱图中，未出现与吗啡对照品保留时间相同的色谱峰，表明阴性样品对测定无干扰(图1)。

线性关系考察:取 2.2 项下吗啡贮备溶液 1，2，3，5 mL，置 10 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液1，2，3，4。取对照品溶液 1，2，3，4和吗啡贮备溶液各 10μL，进样。以峰面积(Y)为纵坐标、吗啡对照品进样量(X)为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程 Y=45.107X －0.339 5，r=0.999 9(n=5)。结果表明，吗啡进样量在0.126 1～1.261μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液10μL，重复进样6次，记录色谱图。结果吗啡峰面积的 RSD为 0.4%(n=6)。

稳定性试验:取同一供试品溶液，避光放置，分别在0，2，4，6，8，10，16，20，24 h 时测定。结果峰面积的 RSD为1.0%(n=9)，表明供试品溶液避光条件下在24 h内稳定。

重现性试验:取同一批样品6份，按供试品溶液制备方法制备，依法测定。结果吗啡含量的 RSD为 1.6%(n=6)，表明方法重现性良好。

加样回收试验:取已知含量(1.40 mg/g，批号为100610)的样品适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，共9份，分别精密加入2.2项下吗啡贮备溶液 3.0，3.0，3.0，4.0，4.0，4.0，5.0，5.0，5.0 mL，按供试品溶液制备方法处理，并依法测定含量，计算回收率。结果见表1。

图1 高效液相色谱图

2.4 样品含量测定

取样品3批，按拟订的方法分别制备供试品溶液。取供试品溶液、对照品溶液各10μL，在拟订的色谱条件下进行测定，外标法计算含量。结果批号分别为100610，100915，100828的敛肺止咳丸中，吗啡的含量分别为 1.40，1.65，1.07 mg/g。

表1 吗啡加样回收试验结果(n=9)

3 讨论

敛肺止咳丸是医院制剂，临床试验证明其安全、有效。方中罂粟壳敛肺、涩肠、止痛，为君药。笔者以罂粟壳中吗啡为质量控制指标，采用高效液相色谱法测定制剂中吗啡含量。曾比较了样品分别超声处理20，30，40 min，结果30 min与40 min超声处理结果无明显差异，故选用超声处理30 min;分别试验了采用C18柱，以0.05 mol/L 磷酸二氢钾溶液 － 乙腈(90 ∶10)[2]，乙腈 －0.1%磷酸溶液(15∶85，每100 mL中加庚烷磺酸钠0.1 g)[1]411为流动相，结果不对称因子较大。而采用C8柱，乙腈－0.01 mol/L磷酸氢二钾溶液－0.005 mol/L庚烷磺酸钠(24∶38∶38)为流动相，分离效果良好且保留时间也相宜，可用于控制敛肺止咳丸的质量。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010.

[2]WS3－393(Z－049)－2004(Z)，国家药品标准·新药转正标准第63册[S].