替硝唑螺内酯乳膏的急性毒性试验＊

唐志立，彭贤东，谭正怀，龙 凤，张浩玲

替硝唑螺内酯乳膏系四川省南充市中心医院自行研制的一种外用制剂，是以替硝唑、螺内酯为主要成分的水包油型乳膏剂[1]。替硝唑阴道泡腾片、复方替硝唑栓剂的急性毒性已有研究[2－3]，复方螺内酯乳膏治疗寻常痤疮的临床疗效也有报道[4]，但替硝唑、螺内酯联合外用治疗痤疮的毒性研究，国内外尚未见相关报道。为评价替硝唑螺内酯乳膏的用药安全性，笔者对其进行了急性毒性试验，现报道如下。

1 材料

1.1 药物

替硝唑原料药(浙江苏泊尔制药有限公司，批号为20091201);螺内酯原料药(浙江新华制药有限公司，批号为OT00N100610);替硝唑螺内酯乳膏(自制，为乳白色乳膏，每100 g乳膏含替硝唑2.0 g，螺内酯0.3 g，批号为100628);替硝唑螺内酯乳膏赋形剂(自制，批号为100628);替硝唑+螺内酯混合物(按替硝唑原药20%+螺内酯原药0.3%的比例配成所需浓度的混合液，备用);15倍临床浓度替硝唑螺内酯乳膏(浅黄色乳膏，每100 g乳膏含替硝唑30 g、螺内酯4.5 g，批号为100628);30倍临床浓度替硝唑螺内酯乳膏(浅黄色乳膏，每100 g乳膏含替硝唑60 g，螺内酯9.0 g，批号为100628)。

1.2 动物

昆明种小鼠，50只，雌雄各半，体重18～21 g，SPF级动物，生产合格证号为SCXK(川)2008－19号;SD大鼠70只，雌雄各半，体重180～330 g，SPF级动物，生产合格证号为 SCXK(川)2008－19号。均由四川省中医药科学院实验动物中心提供。

2 方法与结果

2.1 小鼠口服给药的急性毒性试验

2.1.1 方法

按替硝唑20%、螺内酯0.3%的比例制成替硝唑螺内酯混合物溶液备用。将动物随机分为5组，分别按每1 kg体重一次性灌胃给予替硝唑螺内酯混合物 1.12，1.49，1.98，2.64，3.50 g，观察给药后14 d内动物的中毒情况和死亡情况。

2.1.2 结果

给药后10 min左右，小鼠陆续出现运动减少，继而出现运动不协调、震颤，并出现呼吸急促、阵挛性抽搐，部分动物因咬伤口腔或舌而出现口角流血。多数动物在给药后出现趴伏、呼吸急促，严重者出现抽搐。给药后约半小时，逐渐有动物死亡，多数死亡动物在给药后4 h出现，存活动物则逐渐恢复。给药后14 d内动物的中毒情况和死亡情况见表1。解剖死亡动物尸体，观察其主要脏器，未见明显异常。运用Bliss法计算半数致死量(LD50)，采用回归方程 Y=1.563 8+14.625 log D，计算得小鼠口服混合物的 LD50为 1.717 7 g/kg。结果见表 2。

表1 口服替硝唑螺内酯混合物急性毒性试验小鼠死亡时间分布(只)

2.2 大鼠皮肤给药的急性毒性试验

2.2.1 分组

取健康SD大鼠70只，雌雄各半，试验前将大鼠背部脊柱两侧剪毛后，用8%硫化钡脱毛，每侧脱毛区大小约为5 cm×4 cm。脱毛后24 h禁食不禁水，16 h后随机将动物均分为7组，再随机选其中4组动物，脱毛区皮肤用消毒刀片做“井”字划破至轻度渗血为度，作为破损皮肤组，余下3组即为完整皮肤组。

表2 Bliss法计算的 LD50

2.2.2 给药

3个完整皮肤组分别在脱毛区涂敷0.115 g/kg替硝唑螺内酯乳膏、15倍临床浓度替硝唑螺内酯乳膏1.725 g/kg、30倍临床浓度替硝唑螺内酯乳膏3.45 g/kg;4个破损皮肤组同样在脱毛区涂敷替硝唑螺内酯乳膏0.115 g/kg、15倍临床浓度替硝唑螺内酯乳膏1.725 g/kg、30倍临床浓度替硝唑螺内酯乳膏3.45 g/kg和替硝唑螺内酯乳膏赋形剂每100 g体重0.5 mL。给药后用纱布固定以保持药物与皮肤接触，24 h后用温水洗去残留药物。

2.2.3 观察

逐日观察动物的全身反应情况，连续观察14 d，观察大鼠的行为活动、呼吸、毛发、食欲、体重、眼睛和黏膜等有无异常，记录毒性表现。若有死亡则记录各组死亡动物数，检查死亡动物各脏器，如有肉眼可见的病变则作病理学检查。试验结束时，放血处死动物，取心、肝、脾、肺、肾等主要脏器称湿重并计算其脏器指数。

2.2.4 结果

涂抹给药后，大鼠未见异常反应，饮食、大小便、活动均正常，无分泌物增加等表现。去除药物后，局部皮肤颜色正常，未见刺激反应，14 d内无动物死亡。各给药组动物未出现中毒反应。对完整皮肤和破损皮肤各剂量组用药前、用药后7 d和14 d称重，结果见表3。可见，各剂量替硝唑螺内酯乳膏对完整皮肤和破损皮肤大鼠的体重无明显影响，与赋形剂组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。大鼠用药后观察14 d处死，解剖肉眼观察各组动物的心、肝、脾、肺、肾，均无明显影响，与赋形剂组比较差异无统计学意义，结果见表4。

表3 替硝唑螺内酯乳膏对大鼠体重的影响(X ± s，n=10)

3 讨论

本试验结果表明，口服替硝唑螺内酯混合物对小鼠有一定的急性毒性作用，测得其 LD50为1.7177g/kg，但替硝唑螺内酯乳膏经皮肤给药对完整皮肤或破损皮肤大鼠均无明显急性毒性作用，提示用药浓度比相当于临床用浓度15倍低时是安全的。

表4 替硝唑螺内酯乳膏对大鼠脏器指数的影响(X ± s，n=10)

使用替硝唑会出现胃肠道反应、中枢神经系统反应、过敏反应、双硫仑样反应等不良反应，螺内酯常见有高钾血症、胃肠道反应等不良反应[5]，二者联合口服，会加重不良反应的发生。从小鼠口服替硝唑螺内酯混合物所观察到的症状与两药的不良反应基本一致，说明口服替硝唑螺内酯对小鼠有一定的急性毒性。

对于大鼠的完整皮肤和破损皮肤，使用替硝唑螺内酯乳膏不同剂量后逐日观察，均未出现中毒反应，说明皮肤给药是安全的。经皮给一次性予替硝唑螺内酯乳膏对完整皮肤和破损皮肤大鼠的心、肝、脾、肺以及肾脏的脏器指数均无明显影响，与赋形剂组比较差异无统计学意义，说明经皮给药对大鼠的内脏无影响。

综上所述，选择可抑制皮脂腺分泌的药物螺内酯和可杀灭痤疮丙酸杆菌、卵圆形糠秕孢子菌的替硝唑，将二者联合制成外用乳膏剂，通过动物实验，证明外用无明显急性毒性作用，为临床安全用药提供了依据。

[1]彭贤东，唐志立，龙 凤，等.替硝唑螺内酯乳膏的制备及质量控制[J].中国药业，2010，19(5):34 －36.

[2]张晓双，王文会.替硝唑阴道泡腾片急性毒性黏膜刺激与过敏性实验研究[J].西北药学杂志，2010，25(2):117 －118.

[3]王雪晴，王 震，朱兴平，等.复方替硝唑栓剂的毒理学研究[J].中国药业，2006，15(18):18.

[4]揣瑞梅，张玉珍，吴汝英.复方螺内酯乳膏治疗寻常痤疮86例[J].医药导报，2003，22(S1):24.

[5]卫生部合理用药专家委员会.中国医师药师临床用药指南[M].重庆:重庆出版社，2009:217，1 037.