盐酸昂丹司琼口崩片在健康人体内的药动学及生物等效性研究

邸东华，刘 茜，赵 辉，王 茜

昂丹司琼(Ondansetron)是一种高度选择性的5-羟色胺(5-HT3)受体拮抗剂，能抑制由化疗和放疗引起的恶心呕吐［1-3］。本文参考国内外文献方法［4-5］，应用HPLC-UV法测定20名健康男性志愿者口服盐酸昂丹司琼口腔崩解片后各时间点的血药浓度，计算药物动力学参数，以普通片作为参比制剂，计算相对生物利用度，并判断是否生物等效。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC-10ATvp泵，SPD-6AV紫外可见检测器(日本岛津公司);TGL-16G型离心沉淀机(上海安亭科学仪器厂);XW-80型涡旋混合器(上海手术器械厂)。

1.2 受试制剂 盐酸昂丹司琼口崩片(北京双吉制药有限公司，规格:4 mg);参比制剂:枢丹(盐酸昂丹司琼片，宁波市天衡制药有限公司，规格:4 mg);对照品昂丹司琼(由北京双吉制药有限公司提供，含量:99.7%)、盐酸格拉司琼(Granisetron)、对照品格拉司琼(由江西弘益药业有限公司提供，含量99.6%)。乙腈为色谱纯，三乙胺、磷酸为分析纯，水为双重蒸馏水，空白血浆由沈阳军区总医院提供。

2 方法与结果

2.1 给药方案与样品采集［6］选择20名健康男性志愿受试者，年龄19～23岁，体重55～80 kg，经全面体检正常，血常规、肝肾功能及心电图检查均正常。受试者无继往病史和药物过敏史，不吸烟，不嗜酒，试验前2周内未用任何药物，试验前均签署知情同意书，并经伦理委员会审批同意。随机分为2组。试验前禁食10 h，试验当日清晨空腹给药8 mg。一组口服参比制剂，另一组口服受试制剂。参比制剂用200mL温开水送服;受试制剂口腔含化，并记录崩解时间。隔周交叉。于口服给药前(0 h)和给药后 0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、12、15 h，由肘正中静脉取血5mL，并立即移入经肝素处理的离心试管中，离心5min(3000 r/min)，分离血浆，于－20℃冰箱中保存待测。

2.2 色谱条件 色谱柱:DiamonsilTMC18柱(200mm ×4.6mm，5μm);流动相:磷酸缓冲液(pH 4.0)∶乙腈(80∶20);流速:1.0mL/min;检测波长:302 nm;柱温:35 ℃;进样量:20μL。

2.3 溶液配制

2.3.1 盐酸昂丹司琼对照品溶液 精密称取盐酸昂丹司琼对照品适量，加甲醇溶解并稀释，得昂丹司琼浓度为2000 ng/mL的对照品贮备液。精密量取适量，用甲醇稀释成浓度分别为20、50、100、200、400、800、1600 ng/mL 的系列浓度标准溶液。

2.3.2 盐酸格拉司琼内标溶液 精密称取盐酸格拉司琼对照品适量，加甲醇溶解并稀释，得昂丹司琼浓度为500 ng/mL的对照品贮备液。精密量取适量，用甲醇稀释为50 ng/mL的内标溶液。

2.4 血浆样品预处理 取血浆1.0mL，加入乙酸乙酯3mL，涡旋3min，离心5min(10000 r/min)，取上层有机相置另一试管中，氮气流下(30℃)吹干，残渣加甲醇50μL溶解，进样 20μL。

2.5 标准曲线制备 取人空白血浆500μL，各加入“2.4”项昂丹司琼标准系列溶液50μL，格拉司琼内标溶液50μL，制成相当于昂丹司琼浓度为2.0、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0、160.0 ng/mL 的模拟血浆样品。按“2.5”项下方法处理后，进样测定。以浓度C为横坐标、相应峰面积比值As/Ai为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归运算。得回归方程:Y=0.946 X+0.027，r=0.9952。表明在2.0～160 ng/mL浓度范围内，昂丹司琼浓度与其峰面积比值线性关系良好，定量下限为2.0 ng/mL。

空白血浆、空白血浆加盐酸昂丹司琼(10.0 ng/mL)、受试者服药1.5 h后血浆样品的色谱图见图1。图1显示，昂丹司琼、格拉司琼的保留时间分别为5.7、6.7min，血浆中内源性物质不干扰测定。

图1 色谱图

2.6 准确度与精密度 取空白血浆及对照品溶液，按“2.5”项下的方法配制低、中、高浓度的质量控制(QC)样品，分别进行6样本分析。根据标准曲线，计算QC样品的测得浓度，回收率分别为90.2%、106.2%和97.4%，日内、日间精密度为2.05%～13.5%。

2.7 提取回收率 按“2.6”项下方法配制低、中、高(5.0、20.0、120.0 ng/mL)浓度的质控样品，分别进行6样本分析。另取空白血浆按“2.5”项下操作，配制成相应浓度，进样分析。以提取后与未经提取直接进样获得的色谱图峰面积的比值，考察样品的提取回收率。得出提取回收率分别为64.5%、68.0%和 68.9%，内标提取回收率为68.5%。

2.8 稳定性考察 按“2.6”项下方法配制低、中、高(5.0、20.0和120.0 ng/mL)浓度的质控样品，分别于－20℃保存20 d，血浆样品经历2次冷冻-解冻循环处理后，样品室温放置24 h均稳定。

2.9 药动学研究 20名健康受试者口服受试制剂和参比制剂8 mg，平均血药浓度-时间曲线见图2。

图2 20名受试者口服受试制剂和参比制剂后的平均血药浓度-时间曲线

将主要药物动力学参数经对数转换后进行方差分析，结果受试制剂的AUC0-t和AUC0-∞均拒绝不等效假设，表明受试制剂与参比制剂在体内具有生物等效性。见表1。

表1 20名健康受试者口服2种制剂后的主要药动学参数

3 讨论

研究表明，昂丹司琼体内药物浓度较低，选择一种灵敏度高、干扰小的提取方法至关重要［1］。有研究者采用固相萃取，但方法繁琐［2-3］;另有学者采用蛋白沉淀法，但挥干速度较慢［2］。本文采用有机溶剂萃取法，用乙酸乙酯进行提取，效果良好。盐酸格拉司琼与昂丹司琼结构相近，二者在整个色谱分析中的行为具有可比性，且在本色谱条件下有较好的分离度。应用盐酸格拉司琼作为内标，使分析方法更精确、重现性更好。

本研究结果表明，昂丹司琼口服给药后，约1.5 h血药浓度达峰。两种制剂生物等效。给药期间，20名健康受试者口服盐酸昂丹司琼8 mg后，未见任何不良反应发生，且其药动学参数与文献报道［1］基本一致。本研究分析方法快速、准确、简单，分析时间适中，完全不受杂质干扰，且峰形良好，适合盐酸昂丹司琼制剂的药动学研究。

［1］汪杨，吴伟，黄敏，等.盐酸昂丹司琼口崩片与普通片的生物等效性研究［J］.复旦学报，2005，32(1):55-58.

［2］沈于兰，冯芳.大鼠体内恩丹西酮与氯丙嗪的药动学相互作用研究［J］.中国药学杂志，2008，43(10):771-775.

［3］沈于兰，冯芳，孙奇.HPLC-MS研究盐酸恩丹西酮缓释胶囊人体药动学及生物等效性［J］.中国药学杂志，2007，42(17):1333-1336.

［4］高洁.反相高效液相色谱法测定昂丹司琼的血药浓度药物研究［J］.药物研究，2009，18(15):17-18.

［5］吴燕，李华龙，米亚娴，等.盐酸昂丹司琼口服溶液的人体药代动力学和生物等效性研究［J］.药物分析杂志，2009，29(2):233-235.

［6］国家药典委员会.中国药典［S］.二部.北京:化学工业出版社，2005:附录 XIXB，173.