原发性肝细胞癌患者组织中瘦素及其受体表达与临床病理特征的关系

蔡 俊，王宏升

(北华大学附属医院，吉林吉林132011)

近年研究发现，瘦素(leptin)及其特异性瘦素受体(OB-R)在多种肿瘤中均有异常表达，提示其表达可能与肿瘤的发生、发展关系密切［1，2］。关于 leptin及其受体在原发性肝细胞癌(HCC)中表达情况的研究不多，并且结果报道不一［3～6］。2010年 11月～2011年4月，我们通过RT-PCR和Western blot方法检测HCC及癌旁组织中leptin及OB-R mRNA和蛋白的表达，并分析其与临床病理特征之间的关系，旨在为进一步研究leptin及其受体与HCC的关系奠定基础。

1 材料与方法

1．1 材料 HCC标本33例，癌组织及癌旁组织标本均取自术中，先切取癌旁组织(距肿瘤边缘5 cm)，再切取癌组织。将取下的标本迅速切成0．3 cm×0．3 cm×0．3 cm大小装入冻存管中，经液氮速冻后保存于液氮罐中。标本均经病理证实，并记录临床资料，包括年龄、性别、HBV感染、血清AFP水平、肿瘤大小、TNM分期等。其中男30例、女3例，年龄22 ～70(48．5 ±12．9)岁。

1．2 方法

1．2．1 RT-PCR检测mRNA表达 取肝癌及癌旁组织 30 mg，用 RNeasy Mini kit(Qiagen，Valencia，CA)提取组织总RNA并用紫外分光光度计方法定量，用High Capacity RNA-to-cDNA Kit进行cDNA合成(Applied Biosystems，USA)。取 cDNA 200 ng，用AmpliTaq Gold DNA聚合酶(Applied Biosystems，USA)进行目的基因的PCR扩增。引物序列及产物大小如下:leptin上游引物5'-TTCTTGTGGCTTTGGCCCTA-3'，下游引物 5'-GGAGACTGACTGCGTGTGTGAAA-3'，132 bp;OB-R上游引物 5'-TGTTGTGAATGTCTTGTGCC-3'，下游引物 5'-TACTCCAGTCACTCCAGATTCC-3'，394 bp。β-actin 为内参照检测cDNA合成质量。

1．2．2 Western blot检测蛋白表达 肝癌及癌旁组织匀浆，裂解液裂解后蛋白定量。取50 μg总蛋白进行SDS-PAGE电泳分离，用电转仪将蛋白电转至硝酸纤维素膜上，5%脱脂奶粉封闭1 h，一抗4℃孵育过夜，二抗孵育1 h，ECL化学发光法显色，压片曝光、显影。leptin、OB-R和 β-actin抗体均购自Santa Cruz公司，通过预实验确定一抗浓度。

1．2．3 统计学方法 应用SPSS13．0软件包进行统计学处理，采用χ2检验，以P≤0．05为有统计学差异。

2 结果

2．1 leptin及 OB-R mRNA表达 见图 1。leptin mRNA在癌和癌旁组织中的阳性率分别为66．7%(22/33)和87．9%(29/33);OB-R mRNA 在癌和癌旁组织中的阳性率分别为57．6%(19/33)和84．8%(28/33)。leptin及OB-R mRNA在癌旁组织中的阳性表达率均高于癌组织(P＜0．05)。

图1 leptin和OB-R mRNA在HCC中的表达

2．2 leptin及OB-R蛋白表达 见图2。leptin蛋白在癌和癌旁组织中的阳性率分别为63．6%(21/33)和81．8%(27/33);OB-R蛋白在癌和癌旁组织中的阳性率分别为 48．5%(16/33)和 75．8%(25/33)。leptin和OB-R蛋白在癌旁组织中的阳性表达率均高于癌组织(P ＜0．05)。

图2 leptin和OB-R蛋白在HCC中的表达

2．3 与临床病理特征的关系 对leptin和OB-R在肝癌中的表达与临床病理参数，包括年龄、性别、HBV感染、血清AFP水平、肿瘤大小、临床分期等进行了统计学分析，结果显示leptin和OB-R的表达与临床病理特征无显著相关性(P＞0．05)。

3 讨论

leptin主要通过与外周组织器官表达的OB-R相结合发挥其生物学效应。以往研究显示，leptin与肿瘤的发生和发展相关，但是其作用是促进还是抑制肿瘤仍然存在分歧。有研究认为leptin、OB-R可促进细胞增殖与分化，可能在肿瘤的发生发展过程中起促进作用;也有研究者认为，leptin、OB-R在肿瘤免疫中发挥抗肿瘤效应。因此，leptin可能对于不同组织类型的肿瘤细胞具有不同的生物学作用。

leptin和OB-R在生物学功能方面的双重作用已经越来越多的引起学者们的关注，对于leptin和OB-R在HCC中的表达情况报道不一。为明确leptin和OB-R在HCC患者癌和癌旁组织中的表达情况，我们采用更为灵敏的RT-PCR和Western blot方法分别检测leptin和OB-R mRNA和蛋白的表达，研究结果发现，leptin和OB-R在癌旁组织中表达率均高于癌组织，两者有显著性差异，这与Wang等［3］应用免疫组化方法对leptin和OB-R在HCC癌和癌旁组织中的表达研究结果一致。我们还对leptin和OB-R的表达与患者年龄、性别、HBV感染、血清AFP水平、肿瘤大小和TNM分期等临床病理参数的关系进行了分析，统计学分析结果未见显著性差异。

综上所述，HCC及癌旁组织中均存在着leptin以及OB-R的双重表达。其对于肝癌发生发展过程中可能的机制还需要我们在未来的研究中继续深入探讨。

［1］Somasundar P，Yu AK，Vona-Davis L，et al．Differential effects of leptin on cancer in vitro［J］．J Surg Res，2003，113(1):50-55．

［2］Hardwick JC，Van Den Brink GR，Offerhaus GJ，et al．Leptin is a growth factor for colonic epithelial cells［J］．Gastroenterology，2001，121(1):79-90．

［3］Wang XJ，Yuan SL，Lu Q，et al．Potential involvement of leptin in carcinogenesis of hepatocellular carcinoma［J］．World J Gastroenterol，2004，10(17):2478-2481．

［4］Wang SN，Yeh YT，Yang SF，et al．Potential role of leptin expression in hepatocellular carcinoma［J］．J Clin Pathol，2006，59(9):930-934．

［5］沈磊，周晶，雷伟，等．瘦素及其受体与原发性肝癌关系的初步研究［J］．中华肝脏病杂志，2006，14(10):777-779．

［6］陈丽，石燕，蒋成英，等．瘦素和瘦素受体在肝癌中的表达与临床意义［J］．南方医科大学学报，2011，31(5):830-833．