小鼠颈部异位心脏移植手术的改良

陈文伟，杨亦荣，夏鹏，陈必成

（温州医学院附属第一医院，浙江 温州 325000，1.移植中心；2.外科实验室）

由于大量基因背景清楚的小鼠纯化品系的存在，小鼠心脏移植模型在移植免疫的基础研究中具有不可替代的地位。Chen[1]于1991年创建了小鼠颈部心脏移植模型。该模型的优点是受体存活率高，术后易于观察等，但对显微技术要求较高。笔者根据Chen氏术式建立了该模型，并将血管吻合技术的细节加以改进，以降低手术难度，报告如下。

1 材料和方法

1.1 实验动物 健康清洁级C57BL和BALB/C小鼠共240只，体重20～30 g，由华中科技大学同济医学院器官移植研究所小动物饲养中心提供。供体为BALB/C或C57BL/6小鼠，受体均为C57BL/6小鼠。

1.2 实验器材 显微手术器械一套（苏州六六视觉科技股份有限公司），10-0、11-0无损伤缝合针线。M501手术显微镜（德国Leica公司）。

1.3 手术方法 取供、受体（体重相当，或供体稍小），用戊巴比妥钠（60 mg/kg）腹腔内注射麻醉。将供、受体仰卧固定于手术板上。

1.3.1 受者准备：备皮，消毒手术野，自颌下至锁骨中点作一斜形切口，摘除颌下腺，游离颈外静脉根部，在外侧第一属支的近心侧经颈外静脉背侧穿1根5-0丝线，供打结阻断用（见图1）。切除右胸锁乳突肌，游离颈总动脉。结扎颈总动脉和颈外静脉远心端。湿棉片覆盖伤口，等待供心植入。

1.3.2 供者手术：作两侧腋前线切口，将腹壁上翻。自下腔静脉注入25 U/mL肝素生理盐水1 mL。1 min后剪断下腔静脉和腹主动脉放血。沿腋前线开胸，将胸腹壁上翻。冰屑覆盖心脏使之停搏。5-0丝线结扎右上腔静脉、右心耳。无名动脉起始处结扎剪断主动脉主干。游离无名动脉，远端切断。肺动脉在分叉处剪断。集束结扎肺静脉、左上腔静脉、左心耳及下腔静脉，剪断远心端。供心置于预冷的4 ℃林格氏液中。

图1

图2

1.3.3 供心植入：血管夹阻断颈总动脉近心端，剪断颈总动脉，肝素生理盐水冲洗。供心表面置冰水棉片保护。将供心无名动脉与颈总动脉采用“挂线法”间断缝合。具体方法为：将动脉两角各缝1针，但不打结（见图2）；接着在前面缝2～3针，打结；再将两角的“挂线”打结。将心脏向右翻转；在背面先缝1针，不打结（“挂线”）；然后再缝1～2针，打结；最后将“挂线”打结。动脉用11-0线共缝6～8针。颈外静脉根部用5-0丝线打结阻断（见图3）。外侧的第一属支可提示颈外静脉开口的外侧角，并可阻止线结滑脱。将颈外静脉和供心肺动脉开口的外侧角缝合并打结，先腔内缝合后壁（见图3），再缝合前壁，连续缝合一圈，最后不打结；用10-0线共缝合8～10针，吻合完毕，开放静脉吻合口。丝线阻断供心主动脉，试开放动脉吻合口，待吻合口不出血后再开放供心血流（见图4）。放置好供心，勿使动、静脉吻合口成角或受压迫。待供心复跳稳定，缝合切口，术毕。

图3

图4

1.4 术后处理及观察 置于37℃恒温箱保温至清醒，每天通过触摸或肉眼观察供心的搏动情况。移植心脏搏动200～300次/min，连续搏动3 d标志手术成功。术后7 d切取移植心脏，观察病理改变。

2 结果

行颈部异位心脏移植120例，同系移植和同种异体移植组各60例。手术时间为（75.0±12.5）min，供心冷缺血时间为（32.0±5.4）min。手术成功率为90.8%，静脉吻合成功率为98.3%，动脉吻合成功率为92.5%。手术失败的主要原因为动脉吻合口狭窄（4例）、出血或血栓形成（5例）。受体术后7 d存活率为100%。同系移植组移植心脏可长期存活（>100 d）；同种异体移植组心脏中位存活时间为7 d。术后7 d，病理检查示同系移植组移植心脏无损害表现；同种异体移植组移植心脏肿胀，质地变硬，显微镜下心肌有水肿、出血和坏死，伴大量的白细胞浸润。

3 讨论

小鼠腹部心脏移植模型由Corry等[2]于1973年建立，但腹部移植创伤大，对受体血液动力学影响较大。Chen氏小鼠颈部心脏移植模型对受体全身生理影响小，但对显微技术要求高。原因为小鼠的颈外静脉与供心肺动脉口径相差较大，颈总动脉直径为0.3～0.5 mm，吻合难度大，需在25倍显微镜下进行。

笔者对此模型进行了改进：①采用“挂线”法将供心无名动脉与受体颈总动脉行端端间断吻合。与经典的“两定点”法比较，该方法利用两侧“挂线”起相对固定作用，缝合前后壁时，因两血管断面是分离的，容易辨认血管腔，可避免缝合到对侧血管壁。无名动脉和颈总动脉直径相近，可直接作吻合；而颈总动脉和主动脉吻合时，因两者直径相差较大，需作血管断面成形。②颈外静脉根部采用丝线活结阻断，与使用血管夹阻断比较，使静脉断面更靠近血管根部，直径与供心肺动脉更接近，利于吻合；并且不使用血管夹，增加操作空间。另外利用颈外静脉外侧第一属支可防止线结滑脱（见图1）。③静脉采用“一点法”连续缝合，最后不打结。与经典的“两定点”法比较，用血管缝线连续缝合吻合口1周，因10-0血管缝线具有刚性，对吻合口有支撑作用；且最后不打结，无“荷包”效应，可避免吻合口狭窄。手术在显微镜放大16倍下完成，静脉吻合可在放大10倍下完成。心脏冷缺血时间由经典术式的45 min缩短至34 min。吻合方法改进后手术失败的主要原因为动脉吻合口狭窄、出血或血栓形成，发生率为7.5%。因此在手术过程中要求操作者动作轻柔；吻合血管时避免多次重复操作，损伤血管。改进后的模型血管吻合难度降低，利于初学者训练、掌握。

国内亦有将血管吻合进行改进，将供心主动脉与受体颈总动脉行端侧吻合[3]，笔者也进行了尝试。笔者认为端侧吻合不能降低血管吻合难度。理由：①颈总动脉与主动脉管壁厚度相差大，管腔很细，端侧吻合时容易误缝对侧血管壁。②端侧吻合增加了缝合针数，吻合时间增加。③动脉端侧吻合后，供心肺动脉开口方向与受体颈外静脉方向呈90°，静脉吻合难度增加，吻合口张力增加。

本实验在Chen氏术式的基础上，改进了血管吻合技术的细节，降低了手术难度，缩短了移植心脏的冷缺血时间，手术成功率高，使小鼠颈部心脏移植模型成为简单、可靠的动物模型。

[1]Chen ZH. A technique of cervical heterotopic heart transplantation in mice[J]. Transplantation,1991,52(6):1099-1101.

[2]Corrv RJ, Winn HJ, Russell PS. Primarily vascularized allografts of hearts in mice.The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection[J].Transplantation,1973,16(4):343-350.

[3]吴龙,孙宗全,柳祎,等.小鼠颈部异位心脏移植技术的改进[J].中华器官移植杂志,2004,25(6):375.