东莞地区妇女人乳头状瘤病毒感染情况的分析

马秋林 郭义红 刘彦慧

20世纪90年代中期，大量的流行病学和分子生物学研究发现，人乳头状瘤病毒（Human papilloma virus，HPV）与宫颈癌的发生有密切的关系。现已研究证实HPV是一种嗜人体皮肤和黏膜组织细胞的DNA病毒，可广泛感染人类皮肤及生殖道、呼吸道上皮组织，目前已知有100多个基因型，大部分亚型对人体无害，少部分亚型对人体致病，根据其致病性危险程度分为高危型和低危型，同时，高危型HPV和低危型HPV感染对人类的影响也存在明显不同，前者与90%以上的宫颈癌有关，而后者则主要引起尖锐湿疣[1]。且有报道HPV病毒阳性孕妇可以垂直传播给胎儿[2]。另外，不同年龄阶段的人群对HPV敏感性也存在差异。而宫颈癌是少数几个明确病因并且早期发现治愈率极高的肿瘤，所以进行HPV分型检测对预防与早期发现治疗宫颈癌非常有必要，同时对于流行病学调查以及以后疫苗应用都有非常重要的意义，本文即探讨东莞地区HPV亚型分布情况以及各年段感染率情况。

1 对象和方法

1.1 对象

本医院作为专科医院，妇科门诊量大，有着丰富的调查对象，包含各个年龄段，对本院2010年5月～2011年6月间1193例进行HPV分型检测的标本进行统计分析，年龄分布为15～57岁，分成≤20岁、21～30岁、31～40岁、41～50岁、≥51岁5个年龄段，由于时间跨度大，调查对象丰富，年龄分布合理，统计结果具有代表性。

1.2 仪器与试剂

采用ABI9700基因扩增仪，奥盛K30b恒温金属浴，Eppendorf离心机等，试剂由广州达安基因公司提供。

1.3 检测方法

采RDB(反向点杂交)技术，具有简便快速、灵敏度高的特点，本试剂盒能检测19个亚型，包括16个高危型（16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68，亚型CP8304型）和3个低危型（6，11，43型）。用专用的标本采集拭子，由熟练的妇产科医生采集。采集来的标本在PCR室作下如下处理：将棉拭子上的细胞或组织洗脱于1mL生理盐水中，挤干棉拭子，将洗脱液置于1.5mL离心管中，12000rpm离心10min，吸去上清液，重复以上步骤（洗去杂质），在离心管的沉淀中加50μLDNA提取液充分混匀，放在金属浴上100℃保温10min，随后离心5min，取5μL模板加入到试剂盒提供的反应体系中，6000rpm瞬时离心3s，试剂附带的阴阳质控品同标本处理，进行质量控制。最后放到扩仪上，按以以下程序扩增：93℃ 3min预变性，然后按93℃ 40s→55℃ 40s →72℃ 40s扩增，共40个循环，最后72℃延伸7min，随后对扩增产物严格按照标准操作程序进行杂交、洗膜，显色。

1.4 统计学处理

应用SPSS13.0统计软件处理数据，计数资料用x2检验。

2 结果

根据膜条上预先设置的探针点，当检测出某个亚型，即在相应的探针位点显示紫蓝色的圆点。

2.1 HPV感染率及亚型分布情况

在1193例送检样本中，检出HPV阳性病例296例，阳性率为24.8%，而HPV感染有地区差异，据报道，沈阳地区HPV阳性检出率为21.63%，贵州地区为25.9%，这两个地区检出的主要亚型按顺序为16、52、58、11、51 5种，与报道的检出亚型一致[3-4]，见表1，而且检出了试剂合能检测全部亚型。因我们是妇幼专科医院的关系，只做女性HPV检测，对性男性感染率，本文并没有作统计。在296例阳性标本中，发现多重阳性标本46阳性，占阳性标本15.5%，且主要是二重感染，296例阳性标本中检验亚型366例，排在前5位的亚型如下分别为16、52、58、11、51，阳性例数分别为60、44、36、34、32例，分别占16.3%、12.0%、9.8%、9.2%、8.7%。

2.2 HPV感染与年龄的关系

检出296例阳性标本，统计各年龄段阳性检出率，本文统计年龄的跨度为16～57岁，把年龄段分为5个档次，各年龄段HPV感染率差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 各年龄组HPV阳性检出情况

2.3 各年龄段亚型分布情况

对于各年龄段HPV亚型分布情况，分别统计各年龄段每个亚型的检出例数，发现各年龄段HPV亚型分布差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 各年龄段亚型的分布情况

3 讨论

HPV是一种诱发女性宫颈癌及生殖器病变的主要病原体，HPV致病作用与HPV DNA的整合有关，病毒核酸整合到宿主细胞内，使宿主细胞内染色体发生突变，导致肿瘤的发生，主要是HPV转录翻译成的E6、E7蛋白，蛋白与细胞内肿瘤抑癌基因P53与Rb基因结合，从而干扰细胞周期的调节，使细胞永生化，而E6、E7蛋白主要由高危型HPV表达，所以十分有必要对HPV进行分型[4-5]。对各年龄段的感染率统计发现≤20岁和≥51岁两个年龄段感染率明显高于其它年龄段，HPV感染有年轻化的趋势，跟婚前性行为有关，须引起重视，在≥51岁偏高跟妇女年龄增高身体免疫力以及更年期后身体激素变化相关，更应该在这两个年龄段加强预防HPV感染和宫颈癌筛查知识的宣传[6]。

本文也对各年龄段感染亚型进行统计整理发现≤20岁年龄段51型为主要亚型，41～50岁年龄段33型为主要亚型，其余几个年龄段，差异不大，16型依然占主要亚型，这提示我们以后区别对待各年龄段的HPV防治。

HPV疫苗也在进行二期临床阶段，而疫苗也主要针对E6、E7作为靶抗原，这种疫苗不是针对所有的亚型，所以有必要普查各地区亚型分布情况，优先接种感染率高亚型，不同地区根据亚型分布情况，以及各年龄段亚型分布情况，区别对待，接种相应亚型疫苗，对于预防HPV感染意义重大。2006年6月，美国食品与药品管理局(FDA)正式批准Gardasil宫颈癌预防性疫苗上市，是世界上第一个肿瘤疫苗，标志着宫颈癌防治已进入了一级预防。此疫苗为二价疫苗，主要针对HPV16、18型，而HPV型别分布存在明显的地区差异，在我国尚缺乏系统的、全面的、科学的HPV型别地区分布情况数据，HPV型别检测可为中国的HPV疫苗研究提供数据资料，HPV感染有地区性差异，我国及亚州其他国家52、58占据次要位置，所以针对这种情况，要着力研究在中国出现比较多的亚型、以及多重疫苗。就东莞地区来说，将来如果有多种疫苗上市选择，应优先接种16、52、58型疫苗，如果是≤20岁和41～50岁年龄段可以分别优先接种51、33亚型。

在296例检出标本中，发现46例多重感染病例，其中发现有16亚型的40例，占86.9%，二重感染38例，占86.2%，这些使临床治疗更为复杂。由于不同亚型HPV其编码外壳蛋白的基因变异很大。不同亚型HPV之间基本上没有交叉保护抗体，容易造成不同高危型 HPV多重感染或者交叉感染。而Lee等[7]进一步研究了多重HPV感染与宫颈癌的关系，结果发现单一HPV感染使宫颈癌的患病风险增加19.9倍，而多重HPV感染使该风险增加到31.8倍，对多种感染患者在物理治疗和药物治疗方面采取相应的措施，效果会更好。综上所述，对HPV基因分型的检测在宫颈癌的早期诊断和防治有重要意义。

[1]Helay S.human papilloma virus:beware the infection you can not see[J].Aust Fam Physician，2003，32(5):311-315.

[2]Burd EM.human papillmoma virus and cervical cancer[J].Clin Microbiol Rev，2003，16(1):1-7.

[3]李彦，肖瑜.导流杂交法检测人乳头状瘤病毒的结果分析[J].遵义科技，2009，32(4):36-39.

[4]刘立鸿，江凯，张富春.人乳头瘤病毒（HPV）致癌机制研究进展[J].生命科学，2008，20(2):295-299.

[5]郑华生，郑迪楠，李剑民，等.2663例普通女性HPV感染调查及其亚型分布[J].当代医学，2011，17（21）：20-21.

[6]高玉华，高岩.2104名体检妇女高危型HPV-DNA检测情况的分析[J].医药与保健，2010，18(1):124-125.

[7]Lee SA，Kang D，Seo SS，et al.Multple HPV infection in cervical cancer screened by HPV DNA chip[J].Cancer Lett，2003，198(2):187-192.