自备质控品对不规则抗体筛查试验中筛选细胞的质量监控

周桂艳

在输血前对受者血清进行抗体筛查的目的是及时发现临床意义的不规则抗体，以便为受血者准备不含有相应抗原的血液，确保受血者输血安全。用微胶凝注法做不规则抗体筛查试验的关键之一是筛选细胞，有作者曾用各种方法对抗筛试验监测，但没有监测筛选细胞[1]。如何知道筛选细胞是否出现变化？本课题尝试寻找一种可以观察筛选细胞是否达到要求的质控血清，并将在每次实验中随同质控血清检测，以观察筛选细胞的稳定性。

1 材料与方法

1.1 检测对象

2010年1 月～2010年2月在本院住院需要输血的患者30例，年龄1～78岁。

1.2 检测仪器与试剂

微胶凝柱卡（LISS/Coombs），微胶凝柱孔内为中性凝胶，并含有低离子介质及抗人球蛋白试剂，专用卡GRIFOLS离心机和GRIFOLS37℃孵育器。O型抗体筛查细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号（批号：20105624，20105626）购自上海血液生物医药有限公司。抗D（IgM+IgG）血型定型试剂（批号NDMG05302），购自美国美德声科学技术公司。普通冰冻AB型血浆购自广州血液中心。以上试剂都在有效期内使用。

1.3 检测方法

1.3.1 采用微胶凝柱法对受者血清进行抗体筛查 抽取受者血2～4mL，1500r/min离心5min，分离血清与红细胞，在微胶凝柱卡上标记受者姓名及抗体筛查细胞的编号，分别吸取抗体筛查细胞悬液50μL和受者血清25μL加入微胶凝柱管腔上端，阴性和阳性对照组只需加入相应血清即可，置37℃孵育15min，1500r/min离心9min，肉眼观察结果。结果判断：-：100%的红细胞沉在微管底部；+/-：100%的红细胞沉在微管下端1/3以内；+：80%的红细胞沉在微管下端2/3以内；++：80%的红细胞沉在微管上端2/3以内；+++：80%的红细胞沉在微管1/3以内；++++：凝集的红细胞全部处于微管的顶部。

1.3.2 阴阳性对照血清的制备 阳性质控血清的制备：用人抗D血清配制+++的浓度为初始浓度。阴性质控血清的制备：取AB型血浆一袋，用无抗凝剂的小管分装。阴阳性血清都置于4℃条件下保存。

2 结果

2.1 阴、阳性血清对照组的结果

用自备的阴性和阳性血清检测不规则抗体筛查试验中筛选细胞结果如表1。

表1 不规则抗体筛查试验中阳性血清和阴性血清检测结果

2.2 受者血清不规则抗体筛查结果

在30例受者血清中检测出不规则抗体阳性有4例（占13.3%），见表2，以上4例自身抗体对照结果均为阴性。

表2 不规则抗体阳性结果及临床资料

3 讨论

微胶凝柱实验是红细胞抗原与相应抗体在凝胶介质中发生的凝集反应，本实验用抗D（IgM+IgG）血型定型试剂作为阳性对照，以+++的浓度作为初始观察，AB血浆因不含有抗A抗B抗原，不会与筛选细胞（O型红细胞）发生凝集反应，所以作为阴性对照结果。此外，本试验抗体抗原反应过程中始终保持在37℃，可以排除冷凝集素反应产生的影响。从阳性和阴性结果可以看出，如果使用新鲜的筛选细胞悬液，筛选细胞阳性结果都为+++，其稳定性非常好，当同一筛选细胞悬液加盖放置24h，阳性对照组结果由+++下降到++，说明筛查细胞随着时间久置，其质量会下降，对不规则抗体的结果会产生影响，所以新配置的筛查细胞悬液应尽快使用，加盖放置不超过24h。

本次试验用了两个不同批号的筛查细胞，结果显示不同批号会有不同结果。前9次都是用批号为（20105624）的筛选细胞，启用新批号（20105626）做阳性对照组初始标记浓度，结果在++～+++。质量对不规则抗体筛查的试验结果影响很大。

本试验用自备的质控品进行了2个月的检测，可认为其稳定性较好。抗体筛选试验不一定能检出所有具有临床意义的抗体，一些抗低频率抗原的抗体或有剂量效应的抗体可能被漏检，此时需要抗原性更完全和特异性更强的筛选细胞做试验或用更敏感的技术做检测[2]。

本实验用微胶凝注法对30例输血患者进行不规则抗体筛查，共检测出不规则抗体阳性的有4例，以上4例已用自身血清和自身红细胞做做试验，结果均为阴性，可确认待测血清中确实存在不规则抗体，4例中只有Ⅰ号筛选细胞阳性2例，根据抗体鉴定谱为P1型，只有Ⅰ、Ⅱ号筛选细胞阳性1例，为Kidd（M）型，只有Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞阳性1例，可能为Rh-hrC或Rh-hrE型。4例中男的1例有输血史，女的3例曾经有输血史或妊娠史，说明反复输血或多次妊娠易使患者受到免疫刺激而产生不规则抗体。因此，临床对有输血史，妊娠史和RhD阴性患者输血前进行不规则抗体筛查非常有必要，通过检测及时发现不规则抗体。但人种的差异，对输血产生的影响的抗体也有所不同，Kell系统的抗-K抗体对白种人很重要，但中国汉族人群中K抗原几乎全部阴性，而抗-Dia、抗-Mur抗体对黄种人相对重要[2]。

[1]杨世明，崔颖，张勇萍，等.微柱凝胶法在抗体筛查中的应用及其影响因素的探讨[J].现代检验医学杂志，2006，21（4）:55-56.

[2]胡丽华.临床输血检验[M].2版.北京：中国医药科技出版社，2010：52-53.