PCNA,MMP-2在PR阳性的乳腺癌组织中的表达及意义

刁岩 任宏涛 王西京 马小斌 代志军

乳腺癌是一种严重威胁妇女健康的常见病和多发病。近年来，我国乳腺癌的发病率呈逐年上升趋势，在大城市，乳腺癌已位居女性恶性肿瘤发病率之首，且年龄有明显提前趋势。乳腺癌导致死亡的主要原因是全身转移，如肝转移、肺转移、脑转移等。PCNA是增殖细胞合成DNA所必需的核蛋白，PCNA表达反映细胞增殖活性，一般增殖活性高的细胞由于细胞间张力增大，粘附性降低，更易于脱离原发灶向远处扩散、转移。MMP-2是一类与肿瘤的侵袭和转移密切相关的蛋白降解酶。通过降解基底膜及细胞外基质,为血管内皮的迁移和新生血管的延伸创造了必要条件。本试验通过免疫组化法检测PCNA、MMP-2在PR阳性的乳腺癌中的表达，分析它们之间及它们与其他临床病理参数的关系，探讨PCNA、MMP-2在乳腺癌中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

随机抽取西安交通大学医学院第二附属医院肿瘤外科2004年1月至2007年6月手术切除的存档蜡块40例。全部病例均经手术和病理证实,为孕激素受体阳性的乳腺浸润性导管癌。手术方式均为保留胸大肌和胸小肌的乳腺癌改良根治术。40例标本均取自女性。患者年龄37～71岁，平均52岁。临床TNM分期按第五版美国癌症联合委员会（AJCC）分期系统进行。TNM分期：Ⅰ期13例；Ⅱ期21例；Ⅲ期6例。40例浸润性导管癌中腋窝淋巴结转移情况：无淋巴结转移27例，淋巴结转移1～3个5例，≥4个8例。全部标本入选条件：①临床资料完整。②手术后病理确诊。③术前未行放化疗及内分泌治疗。④乳腺癌患者无其他恶性肿瘤病史。检测试剂盒购自武汉博士德公司，免疫组化（Streptavidin-Peroxidase）SP试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2 方法

免疫组织化学SP法（链霉素亲和生物素蛋白——过氧化物酶法）测定乳腺癌组织标本中PCNA、MMP-2的表达。染色步骤按试剂说明书，抗原修复采用微波修复法，孵育条件为37℃,用二氨基联苯胺和过氧化氢显色，苏木素复染。

1.3 结果判断

PCNA阳性细胞为细胞核染色，MMP-2为胞浆染色。(-):整个切片未见阳性染色，(+):细胞数≤25%，(++):细胞数为26%～50%，(+++):细胞数51%～75%，(++++):细胞数＞75%。(+～++)为低表达,(+++～++++)称为高表达或过度表达[1]。

1.4 统计学处理

所有试验数据采用SPSS13.0 for windows统计软件包进行统计学分析：x2检验及Fisher Exact Test将各组试验结果进行统计学检验，判定有无统计学意义。

2 结果

2.1 PCNA的表达结果

按肿瘤大小分组中：原发肿瘤大小≤2cm，PCNA阳性表达率为42.9%，＞2cm组为92.3%，其差异有统计学意义（x2=11.87，P＜0.01）。

按TNM分期中，PCNA的阳性表达率在Ⅰ期为46.2%，在Ⅱ、Ⅲ期为88.9%，其差异有显著统计学意义（x2=10.06，P＜0.02）。

表1 PCNA表达和临床病理指标的关系

腋窝淋巴结转移阴性组PCNA阳性表达率为70.4%，而腋窝淋巴结转移阳性组为84.6%，转移阳性组虽高于阴性组，但差异无统计学意义（x2=0.95，P＞0.05）。在腋窝淋巴结转移1～3个组，PCNA≥＋＋的表达率为62.5%，在腋窝淋巴结转移大于等于4个组，表达率为100%，其差异有统计学显著意义（P=0.04）（见表1）。

2.2 MMP-2的表达结果

按腋窝淋巴结状况分组中，腋窝淋巴结转移阴性组MMP-2阳性表达率为63.0%，而腋窝淋巴结转移阳性组为100.0%，差异有显著统计学意义（P=0.01）（见表2）。

表2 MMP-2表达和临床病理的关系

3 讨论

通常把乳腺癌腋窝淋巴结转移，肿瘤大小，雌、孕激素受体等因素看作是乳腺癌的预后标准，但是结果不是十分满意。近年来国外一些研究表明PCNA与多种肿瘤的预后关系密切，有关PCNA与乳腺癌预后关系的研究也有少量的报道，认为PCNA表达与乳腺癌淋巴结转移及预后有关。PCNA表达与淋巴结转移相关，提示乳腺癌中增殖活性高的癌细胞浸润性转移的可能性大，预后较差。Takashima[2]检测了112例有4枚以上淋巴结转移的乳腺癌标本，认为在有淋巴结转移的乳腺癌患者中，PCNA表达低者预后较好。PCNA与肿瘤的临床行为密切相关，瘤细胞增殖活性高者，PCNA高表达，就易发生淋巴结转移，说明PCNA过度表达增加了瘤细胞转移趋势的危险性[3]，故认为PCNA表达可以作为判断乳腺癌预后的可靠指标。

本研究发现PCNA在乳腺癌中存在高表达，且肿瘤越大，分期越晚，细胞增殖越活跃，恶性程度越高。PCNA阳性表达的高低能反映乳腺癌细胞的增殖状态和恶性程度，不直接反映肿瘤细胞的侵袭性。本研究发现PCNA的表达与淋巴结转移无关，但在腋窝淋巴结转移1～3个组，PCNA≥＋＋的表达率为62.5%，在腋窝淋巴结转移大于等于4个组，表达率为100%，其差异有统计学显著意义。而淋巴结转移与否是关系到患者预后的重要指标。关于PCNA表达与淋巴结转移之间的关系，各家报道不一[4]，本研究得出此结论，我们认为可能是因为PCNA与细胞增殖有关，而不直接表肿瘤组织的侵袭性，所以肿瘤体积越大PCNA表达越强，但不断的生长和增殖是肿瘤细胞侵袭和转移的前提，当多个腋窝淋巴结转移时，PCNA过表达较明显，因此仍可作为判断乳腺癌预后的重要指标。

乳腺癌组织的研究表明，MMP-2活性增强，基质水解蛋白酶增加，是乳腺癌细胞侵袭行为的生化机制。Nakopoulou[5]研究了135例浸润性乳腺癌，发现 MMP-2与肿瘤体积（Φ≥2cm）有明显相关性。Li HC[6]研究了270例淋巴结阴性的乳腺癌病人，发现MMP-2阳性表达与组织学分级显著相关（P＜0.001），与肿瘤体积相关（P＜0.05）。

本试验阳性表达率为75%。按腋窝淋巴结状况分组中，腋窝淋巴结转移阴性组MMP-2阳性表达率为63.0%，而腋窝淋巴结转移阳性组为100.0%，差异有显著统计学意义（F=0.01）。这与众多已知的实验结果吻合，说明MMP-2可能通过降解细胞外基质、破坏基底膜，使肿瘤细胞更易于浸润淋巴管，加速肿瘤向淋巴结转移。

此次实验数据表明在孕激素受体阳性的乳腺癌中，PCNA与MMP-2与一些相应的临床相关参数有关，而这些指标都对乳腺癌的治疗预后判断有指导意义，PCNA与MMP-2有希望成为指导乳腺癌治疗，评价乳腺癌预后的分子生物学指标。PCNA，MMP-2在乳腺癌浸润转移中的作用及其表达的意义，使其有望成为预测乳腺癌内分泌治疗效果和预后的指标，为乳腺癌的个体化治疗提供重要参考。

[1]牛昀,郎荣刚,傅西林,等.乳腺浸润性小叶癌中PCNA和P53蛋白表达及临床意义[J].中国肿瘤临床,1999,26(12):889-891.

[2]Takashima T,Onoda N,Ishikawa T,et al.Proliferating cell nuclear antigen labeling index and p53 expression predict outcome for breast cancer patients with four or more lymph node metastases[J].Int J Mol Med,2001,8(2):159－163.

[3]朱亚明,袁刚.结肠癌中p53蛋白、PCNA表达与预后的探讨[J].当代医学，2009，15(30):1-2.

[4]苏文利，熊斌.增殖细胞核抗原在大肠癌中的表达及其临床意义[J].中国肿瘤临床与康复，2004,11(6):501-502.

[5]Nakopoulou L,Tsirmpa I,Alexandrou P,et al.MMP-2 protein in invasive breast cancer and the impact of MMP-2/TIMP-2 phenotype on overall survival[J].BreastCancer Res Treat,2003 Jan,77(2):145-155.

[6]Li HC,Cao DC,Liu Y,et al.Prognostic value of matrix metalloproteinases(MMP-2 and MMP-9) in patients with lymph node negative breast carcinoma[J].Breast Cancer ResTreat,2004 Nov,88(1):75-78.