宫颈癌中AIB1蛋白的表达及其临床意义*

许静洪，庞秋霞，王爱红

(延安大学医学院生物化学与分子生物学教研室，陕西延安716000)

妇科恶性肿瘤主要以子宫及卵巢多见，严重危害着妇女的身心健康。宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，占女性生殖系统恶性肿瘤半数以上。核受体作为转录因子的重要成员，在调节生物体的生长发育和保持体内稳态等诸多方面有十分重要的作用。AIB1基因(amplified in breast cancer 1，AIB1)属于细胞核激素受体共激活剂P160家族的成员，是近年来新发现的一种原癌基因，其表达的蛋白是一种核激素受体的转录共激活因子，该基因异常已被证实与乳腺癌、肝癌、宫颈癌、卵巢癌等多种恶性肿瘤的细胞增殖、转移和预后密切相关，但其在恶性肿瘤发生、发展中机制的研究很少。本实验拟使用已经研制成功的生物素化的抗AIB1单克隆抗体，检测33例宫颈癌组织中AIB1的表达水平，探讨AIB1蛋白在不同分期宫颈癌中的表达情况，将为宫颈癌的诊断及治疗提供一种新的思路。

1 材料与方法

1.1 标本取材

宫颈组织标本均来自延安大学医学院附属医院2007～2009年妇科手术病人，临床资料完整，组织由病理科石蜡包埋，由我校病理教研室制作切片。宫颈癌组织共33例，经病理学检查诊断，其中宫颈鳞癌23例，宫颈腺癌10例，患者术前均未接受放化疗治疗。按照WHO组织分化标准:高、中、低分化组织各8、11、14例;同时选取同期因其他原因行宫颈切除的正常宫颈组织15例做为对照。选用乳腺癌细胞T47D制作细胞爬片，作为AIB1表达的阳性对照。

1.2 免疫组化检测

采用免疫组化法分别检测实验组和对照组AIB1蛋白的表达情况。所有组织切片经二甲苯脱蜡，酒精脱水，3%过氧化氢封闭内源性过氧化物酶，微波煮沸法抗原修复，3%BSA封闭非特异性位点后，实验组滴加生物素化抗AIB1单克隆抗体［1］(工作浓度1:100)，对照组滴加PBS代替一抗，湿盒内37℃1 h，PBS冲洗后，滴加 AVIDIN －HRP，37℃1h，PBS冲洗后，DAB显色，显微镜下观察并适时终止，苏木素复染后，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

1.3 结果判定

阳性结果为胞浆或胞核出现棕黄色颗粒即判断为阳性细胞，无显色则为阴性结果。以阳性信号所占的面积比例分级，＜5%为(－)，5% ～25%为(+)，25% ～50%为(++)，＞50%为(+++)。

1.4 统计学分析

实验结果采用SPSS11.0及秩和检验分析

2 结果

2.1 正常宫颈组织和宫颈癌中AIB1蛋白的表达情况

AIB1蛋白染色以胞浆为主，少数出现核染色，呈弥漫性黄褐色分布(见图1)。15例正常宫颈组织中，2例AIB1蛋白表达阳性，阳性率13.3%，33例宫颈癌组织中，11例AIB1蛋白阳性表达，阳性率33.3%，两者比较，差异无统计学意义。

2.2 不同分化程度宫颈癌中AIB1蛋白表达情况

AIB1蛋白表达水平与肿瘤分化程度似乎有相关性。随着分化程度的降低，AIB1蛋白的表达有升高趋势。不同分化程度宫颈癌组织中AIB1蛋白表达差异有统计学意义(P＜0.05)。8例高分化宫颈癌中，1例表达阳性，表达水平(+)，11例中分化宫颈癌中2例阳性表达，表达水平为1例(+)、1例(++)，14例低分化宫颈癌中，8例阳性表达，其中2例(+)、4例(++)、2例(+++)(结果见表1)。

表1 不同分化程度宫颈癌中AIB1的表达情况Tab.1 AIB1 expression in cervical cancer with different differentiations

图1 宫颈癌组织中AIB1表达的免疫组织化学检测(×200)Fig 1 .Detection of AIB1 expression in cervical cancer by Immunohistochemistry

3 讨论

AIB1是一种重要的核激素受体的转录共激活因子，定位于人类染色体20q12，最早是在寻找乳腺癌中频繁扩增的基因时发现的。已经证实AIB1可以通过增强靶基因的转录和表达而促进肿瘤的形成。研究表明AIB1过表达可能是促发组织癌变的因素之一［2，3］，其异常表达与激素依赖性肿瘤的发生有关，还与此类病人内分泌治疗的敏感性和预后相关。体外转染实验显示AIB1能增强细胞核受体(nuclear receptor，NR)的活性，通过补充组蛋白乙酰转移酶和组蛋白甲基转移酶发挥重要作用［4］。组蛋白的乙酰化和DNA的甲基化及染色质高级结构中其他成分的修饰可以改变染色质构型，导致基因转录调节发生变化，基因转录失调可导致细胞增殖失常，从而致癌。

Glaeser［5］等在研究宫颈癌细胞株Hela(ER和PR阳性)中AIB1的表达时发现3倍的AIB1基因扩增和2倍的AIB1mRNA过表达。Hirai［6］等研究宫颈癌AIB1的表达时发现:16例宫颈腺癌中，7例存在高频率AIB1基因扩增，其中4例伴淋巴结转移，故认为AIB1基因的扩增与宫颈癌淋巴结转移密切相关。近年来的研究发现AIB1的作用已不仅仅局限于核激素受体途径，在非激素依赖的肿瘤:如胃癌［7］、胰腺癌［8］、结直肠癌［9］中也发现了 AIB1蛋白或 AIB1mRNA 的过表达，提示AIB1可能也通过非激素依赖途径引起细胞生长、增殖乃至恶变。

本实验应用免疫组织化学法测定的AIB1基因在宫颈癌中的表达率为33.3%，明显高于文献报道的乳腺癌中AIB1的阳性表达率10.0%［10］，可能与样本量太少及实验条件不同有关，也可能AIB1基因的过表达在宫颈癌中有更重要的意义。实验结果经统计学方法检验，正常宫颈组织中AIB1蛋白表达(阳性率13.3%)与宫颈癌组织中AIB1蛋白表达(阳性率33.3%)，两者之间差异无统计学意义;而在不同分化级别的宫颈癌组织中，差异有统计学意义，随着肿瘤分化程度的逐渐降低，AIB1蛋白的表达有升高趋势。通过AIB1蛋白免疫组化结果分析，AIB1蛋白表达强度和阳性率在低分化宫颈癌组织中明显高于高分化宫颈癌，在正常组织中为阴性表达或弱表达。由此可以认为，AIB1的表达与宫颈癌的恶性度有一定联系，AIB1表达的异常可能在癌变发生过程中发挥促进作用。由于本实验样本较少，AIB1的表达与宫颈癌恶性度的相关性及其在宫颈癌发病中的作用，有待于大样本实验进一步证实。

［1］庞秋霞，屈艺，魏大鹏，等，生物素化抗AIB1单克隆抗体的制备及应用研究［J］.四川大学学报(医学版)，2009;40(4):727－729.

［2］Hudelist G，Czerwenka K，Kubista E，et al.Expression of sex steroid receptor and their cofactors in normal and malignant breast tissue:AIB1 is a carcinoma specific coactivator［J］.Breast Cancer Res Treat，2003，78(2):193 －204.

［3］Anzick SL，Kononen J，Walker RL，et al.AIB1，a steroid receptor coactivator amplified in breast and ovarian cancer［J］.Science，1997，277(5328):965 －968.

［4］Chen D，Ma H，Hong H，et al.Regulation of transcription by a protein methyltransferase.Science 1999，284(5423):2174 －2177.

［5］Glaeser M，Floetotto T，Hanstein B，etal.Gene amplification and Expression of the steroid receptor coactivator SRC3(AIB1)in sporadic breast and endometrial carcinomas［J］.Horm Metab Res，2001，33(3):121－126.

［6］Hirai－ Y，Utsugi K，Takeshima N，etal.Putative gene lociassociated with carcinogenesis and metastasis of endocervical Adenocarcinom as of uterus determined by conventional and array－based CGH.Am J Obstet Gynecol，2004，191(4):1173 －1182.

［7］Sakakura C，Hagiwara A，Yasuoka R，et al.Amplification and over－expression of the AIB1 nuclear receptor co－activator gene in primary gastric cancers.Int J Cancer，2000，89(3):217 －223.

［8］Ralf TH，Bassem RH，Sung EK，et al.Overexpression of the nuclear receptor coactivator AIB1(SRC－3)during progression of pancreatic adenocarcinoma.Clin Cancer Res，2004，10(18):6134 －6142.

［9］Xie D，Sham JS，Zeng WF，et al.Correlation of AIB1 overexpression with advanced clinical stage of human colorectal carcinoma.Hum Pathol，2005，36(7):777 －783.

［10］Anzick SL，Kononen J，Walker RL，et al.AIB1，a steroid receptor coactivator amplified in breast and ovarian cancer［J］.Science，1997，277:965 －968