HPLC法测定健脾丸(浓缩丸)中柚皮苷和橙皮苷

袁 杰， 于江泳

(1.安徽省食品药品检验所，安徽合肥 230051;2.国家药典委员会，北京 100061)

健脾丸(浓缩丸)是由党参、枳实、陈皮等六味中药组成的复方制剂，具有健脾开胃的功效，用于脾胃虚弱，脘腹胀满，食少便溏等病症。本方收载于卫生部药品标准中药成方制剂第七册［1］，标准中，只有一个显微鉴别，无定量项目。枳实、陈皮作为主药对疗效起到重要作用，因此建立测定枳实，陈皮中柚皮苷和橙皮苷的方法［2-8］，控制样品内在质量。

1 仪器与试药

岛津LC-20A高效液相色谱仪(日本岛津公司)，solution色谱工作站(日本岛津公司)。HS10260D超声波清洗器;柚皮苷、橙皮苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号:110722-200610和110721-200512，均为定量测定用);甲醇为色谱纯，水为纯化水，其它试剂为分析纯;健脾丸(浓缩丸)样品(批号:070906，宁夏启元国药有限公司;批号:080503，080701，北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件和系统适用性试验 色谱柱Shimpack ODS(4.6 mm ×150 mm，5 μm)，柱温 30 ℃，流动相 甲醇 －0.4%冰醋酸(30∶70)，体积流量1.0 mL/min，检测波长 284 nm，进样量 10 μL。理论板数按橙皮苷峰计算为8 964。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取柚皮苷对照品11.36 mg和橙皮苷对照品14.65 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，备用。

2.2.2 供试品溶液 取本品，研细，精密称取0.5 g，置具塞三角烧瓶中，精密加入甲醇50 mL，超声处理30 min，放冷，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液 按处方量制成缺枳实、陈皮的阴性样品，同2.2.2项下方法操作，即得。

2.3 专属性试验 分别精密吸取2.2项下的对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10μL，注入液相色谱仪中，记录色谱图，结果显示供试品溶液色谱中，呈现与对照品保留时间相同的色谱峰，阴性对照未呈现相应的色谱峰，阴性对照无干扰物质。见图1。

图1 HPLC色谱图

2.4 线性关系 精密称取柚皮苷对照品11.65 mg、橙皮苷对照品13.43 mg，分别置与25 mL量瓶中，加甲醇制成每1 mL分别含柚皮苷0.466 0 mg、橙皮苷0.537 2 mg的混合溶液，分别精密吸取1、2、3、5、10mL混合对照品溶液置25 mL量瓶中加甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取10μL，以上述2.1项液相色谱条件进行测定，峰面积Y对进样量进行线性回归，得回归方程:柚皮苷Y=1.345 3×106X+2.536，r=0.999 8，线性范围:0.186 4 ～1.864μg;橙皮苷Y=1.254 62 × 107X+25.468，r=0.999 9，线性范围:0.214 9 ～2.149μg。

2.5 仪器精密度试验 对照品溶液连续进样5次，测定峰面积，柚皮苷RSD为0.53%和橙皮苷RSD为 0.41%。

2.6 重复性试验 精密称取同一样品(批号:070906)6份，依上述2.2.2项下方法制备供试品溶液，按上述2.1项测定方法测定，柚皮苷平均质量分数为7.15 mg/g，RSD 为 0.9%;橙皮苷平均质量分数为 5.95 mg/g，RSD 为 0.6%。

2.7 稳定性试验 精密称取同一样品(批号:070906)1份，依上述2.2.2项下方法制备供试品溶液，分别在 0、1、2、4、8、16、24 h 进样 10μL，测定峰面积，柚皮苷峰面积RSD为0.4%和橙皮苷峰面积RSD为0.8%，结果表明供试品溶液在24 h内稳定。2.8 回收率试验 精密称取已测定的供试品(批号:070906，含柚皮苷 7.15 mg/g，橙皮苷 5.95 mg/g)适量(约0.25 g)6份，置锥形瓶中，分别加柚皮苷对照品1mL(18.23 mg/10mL=1.823 mg/mL)和橙皮苷对照品1mL(15.48 mg/10mL=1.548 mg/mL)，按2.2.2项下制备供试品溶液，测定柚皮苷和橙皮苷量，计算回收率，结果见表1、2。

2.9 样品测定 取不同批次样品，按供试液制备项下方法操作，得供试品溶液，按2.1项色谱条件分析测定，结果见表3。

3 讨论

3.1 本品提取比较了加热回流、超声提取两种方法，结果表明两种方法没有显著差异。因此采用简单方便的超声提取的方法［9-10］。

表1 柚皮苷回收率试验

表2 橙皮苷回收率试验

表3 样品测定结果

3.2 分别对供试品提取的溶剂量和超声时间进行考察，分别进行用30、50、100mL溶剂和超声20、30、50 min进行考察，结果证明用溶剂50 mL、超声30 min时提取完全。

3.3 橙皮苷和柚皮苷的液相色谱峰相邻［11-12］，柚皮苷色谱峰的保留时间为9.381，橙皮苷色谱峰的保留时间为10.506。如果液相色谱条件不好，两峰分离度很难达到1.5，难以准确定量。运用本实验液相条件分离度能达到2.5，能满足定量的要求。耐用性试验，运用依利特 C18(250 min×4.6 mm，5μm)和 Kromsail C18(150 mm ×4.6 mm，5μm)进行试验分离度均能达到1.5以上。

［1］中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第七册［S］.北京:人民卫生出版社，1993:147

［2］梁远园，冯 彪，倪 晨，等.HPLC法测枳实药材中橙皮苷与柚皮苷的含量［J］.中药新药与临床药理，2006，17(5):359-361

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［8］国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版一部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:230，176.

［9］游见明，兰江涛.柑橘类柚皮苷提取工艺研究［J］.现代食品科技，2006，22(2):160-161.

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