老年早期糖尿病肾病患者血清炎症因子、外周血 NF-κB活性变化及阿托伐他汀的治疗作用

李建英，路文盛，颜晓东，郭 进，刘 斐，陈 健，叶伟林

(广西壮族自治区人民医院，南宁 530021)

随着人们对糖尿病肾病(DN)发病机制的进一步认识，证实了炎症反应在 DN进展中具有重要作用。DN时肾脏的固有细胞、炎症细胞合成和分泌多种炎症介质 (如 NF-κB、IL-6、IL-8、TNF-α、单核细胞趋化因子-1等)参与炎症反应，炎症因子(如TNF-α、IL-1β、IL-6)又可通过 IKK/NF-κB[1]、C-Jun氨基末端激酶通路、细胞因子信号抑制物通路等系统的活化，干扰胰岛素的信号传导，引起和加速肾脏疾病的发生和发展。而多种他汀类药物具有不依赖于调脂作用的潜在抗炎活性[2]，为此我们观察了老年早期 DN患者血清高敏 C反应蛋白(hs-CRP)、TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症因子水平和外周血 NF-κB p65的磷酸化水平，并探讨了阿托伐他汀的治疗作用。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择 1997年 8月 ～2010年 8月在我院住院的老年 T2DM患者 96例，均符合 1999年 WHO制定的糖尿病诊断标准，并排除:①伴有高血压、高脂血症、糖尿病急性并发症、慢性肾功能衰竭等患者;②伴有明确的心、脑、肝、肺等重要器官疾病及肿瘤、外伤、风湿免疫性疾病患者;③血肌酸激酶≥正常上限的 3倍，丙氨酸氨基转移酶或门冬氨酸氨基转移酶≥正常上限的 1.5倍;④2周内使用维生素、阿司匹林、调脂药、ACEI、ARB类药物、胰岛素、胰岛素增敏剂及抗氧化药物。根据是否伴有 DN分为糖尿病组(DM组)、DN组。其中，DM组 30例，男 16例、女 14例，年龄(64.9±6.8)岁;DN组 66例，男 36例、女 30例，年龄(65.3±6.8)岁;DN组随机分为糖尿病常规治疗组(DN1组)31例[男 17例、女 14例，年龄(65.4±7.1)岁]、糖尿病常规治疗加阿托伐他汀(立普妥，辉瑞制药，20 mg/片，每晚 1片)干预组(DN2组)35例 [男 19例、女 16例，年龄(65.3 ±6.7)岁]。同期选择我院健康体检者 30例作为正常对照组(NC组)，男 16例、女 14例，年龄 (64.3±7.3)岁。各组性别、年龄具有可比性。

1.2 方法 所有患者先给予糖尿病常规治疗，包括糖尿病饮食、低盐低脂饮食、口服降糖药。待血糖稳定[空腹血糖(FPG)≤7 mmol/L，餐后 2 h血糖(2 h PG)≤10 mmol/L)]1个月后，观察各组血清 hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-1β 水平 。 hs-CRP采用免疫荧光分析法检测;TNF-α、IL-6、IL-1β采用 ELISA法检测，试剂盒购自上海船夫生物科技有限公司。同时，分别从各组中随机抽取 10名患者，应用免疫印迹分析法检测外周血 NF-κB p65磷酸化水平。结果以Alphaimager 2200多功能凝胶成像仪定量扫描条带灰度，以 p65蛋白条带/β-actin蛋白条带的比值反映 NF-κB p65的磷酸化水平(抗 NF-κB p65抗体购自碧云天生物技术研究所)。

1.3 统计学方法 采用 SPSS13.0统计软件，数据以±s表示，组间均数比较采用独立样本t检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组血清炎症因子水平比较 见表1、2。

2.2 各组 NF-κB p65磷酸化水平比较 NC组、DM组、DN1、DN2组治疗前 NF-κB p65的磷酸化水平逐渐升高，分别为0.47±0.15、0.76±0.13、0.95±0.18、0.95±0.17，差异均有统计学意义 (P＜0.05)。DN2组治疗后为 0.81±0.14，较治疗前0.95±0.17显著下降(P＜0.0);DN1治疗后为0.94±0.32，较治疗前 0.95±0.18变化不大(P＞0.05)。见图1。

表1 各组炎症因子水平比较(±s)

表1 各组炎症因子水平比较(±s)

注:与 NC组比较，*P＜0.01;与 DM组比较，△P＜0.01

NC组 30 1.12±0.39 10.61±1.45 10.61±1.26 6.24±0.89 DM组 30 4.57±1.14* 20.38±2.66*16.01±1.55*10.61±1.65*DN组 66 7.75±2.81*△35.80±8.15*△20.00±2.35*△15.96±1.90*△

表2 不同治疗方案治疗前后血清炎症因子水平比较(±s)

表2 不同治疗方案治疗前后血清炎症因子水平比较(±s)

注:与同组治疗前比较，#P＜0.01

DN1 31治疗前 7.75±2.80 35.80±7.65 20.00±2.55 15.91±1.89治疗后 7.74±2.79 34.59±2.55 20.10±2.57 15.90±1.78 DN2 35治疗前 7.74±2.83 35.78±8.34 20.01±2.42 16.09±1.95治疗后 5.65±2.07#24.88±7.86#17.15±2.14#11.45±1.71#

图1 NC组、DM组、DN1组、DN 2组治疗前后NK-κB磷酸化水平比较

3 讨论

研究表明，炎症是促进糖尿病血管病变的关键[3]，炎症因子(如细胞间黏附分子-1、血管细胞黏附分子-1、IL-6)参与了 DN的发生发展。NF-κB是炎症启动、调节的关键核因子，不仅参与了多种炎症因子转录的调控，其活化后还能诱导许多因子的转录。炎症因子(如 IL-6、TNF-α)能够上调其活性，形成一种正反馈调节机制，增强炎性反应的程度[4]。hs-CRP是由肝脏合成的，主要受血循环中 IL-6、TNF-α调节，反过来也可以刺激单核细胞释放 IL-6、IL-1β、TNF-α，介导内皮细胞产生单核细胞趋化蛋白-1和内皮细胞黏附分子等，发挥致炎作用。TNF-α、IL-6是具有多种功能的细胞因子，可直接作用于胰岛 β细胞，造成胰岛 β细胞损伤，诱发胰岛素抵抗，是 DN独立危险因素[5]，同时在 DN形成过程中，IL-6、IL-1β、TNF-α、hs-CRP升高 ，又可导致 NF-κB激活，导致炎症状态放大，形成恶性循环[6]。本研究结果表明，外周血 NF-κB p65的磷酸化水平以及血清 hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-1β水平，DN组比DM组升高(P＜0.05或 ＜0.01)，且均高于 NC组(P＜0.05或 ＜0.01)，表明 DM外周血 NF-κB p65的磷酸化水平以及血清 hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-1β水平高低与 DM的病变阶段、病变严重程度密切相关，与近年研究结果[7]一致。

近年研究表明[2]，阿托伐他汀具有改善内皮细胞功能、抗炎、抗增殖、抗氧化作用。其作用机制可能是通过抑制HMG-CoA还原酶，减少甲羟戊酸途径而启动IκB的基因转录，IκB增多时可与 NF-κB重新合成 NF-κB/IκB复合物，使得 NF-κB失活[8]。本研究结果显示，DN2组治疗后 NF-κB p65的磷酸化水平以及血清hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-1β水平明显降低，表明阿托伐他汀可以抑制 DN患者炎症水平;DN1组对炎症指标影响不明显，提示仅控制血糖不能完全改善 DM患者的炎症反应，与 He等[9]研究结果一致。

综上所述，我们认为阿托伐他汀可抑制老年早期 DN患者外周血 NF-κB活性及炎症因子 hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-1β水平，显著改善患者炎症状态。

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