血浆骨桥蛋白水平与冠状动脉病变狭窄程度的关系研究

李晓涛，夏岳，郭喜朝，魏立业，戚国庆

冠心病是一种常见的临床疾病，其发病有多种因素参与。骨桥蛋白是一种分泌型的糖基化磷蛋白，它在细胞外基质中具有重要的功能。研究表明动脉粥样硬化病变部位存在骨桥蛋白信使核糖核酸(mRNA)呈高表达状态，而且细胞外基质中的骨桥蛋白含量也明显升高。本研究通过观察冠心病患者和非冠心病患者血浆骨桥蛋白的水平，探讨血浆骨桥蛋白水平与冠状动脉病变狭窄程度的关系。

1 资料和方法

研究对象:选取2008-10至2009-10我院住院经冠状动脉造影证实的冠心病患者70例(冠心病组)，男39，女31，平均年龄(63±8)岁;另选同期冠状动脉造影阴性的非冠心病患者30例(对照组)，男13，女17，平均年龄(62±7)岁。排除标准:有明确的细菌、病毒感染者;急、慢性炎症性和免疫性疾病、慢性结缔组织病患者;恶性肿瘤者、血液病患者;1个月内有手术或创伤史者;已知的血栓性疾病患者;严重贫血、出血性疾病患者;严重肝、肾功能不全者;急性心肌梗死患者。

研究方法:所有患者均详细记录临床病史和一般资料，包括性别、年龄、身高、体重、吸烟史、血压等情况。包括血常规、生化及免疫学检查。血浆骨桥蛋白的测定:于入院后次日晨空腹抽取静脉血5ml，置于10ml肝素抗凝管。标本采集后以3000 r/min速度离心10 min，取上清液血浆分装于EP管，置于－70℃低温保存以备日后统一检测。血浆骨桥蛋白的检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA)，试剂盒由深圳晶美生物工程有限公司代理，具体操作严格按说明书操作。应用Judkins方法进行选择性冠状动脉造影，每支血管选择最佳多体位投照，造影结果由2名有经验的医师分析完成。冠状动脉病变狭窄程度采用累积记分法进行狭窄程度积分。并根据其冠状动脉血管病变支数又将冠心病组分为1支病变亚组(n=24)、2支病变亚组(n=21)和3支病变亚组(n=25)，分别比较3亚组之间血浆骨桥蛋白的水平。

统计学方法:首先进行组间均衡性检验;正态分布或轻度偏态分布的计量资料以表示，两组比较应用t检验分析。明显偏态分布的计量资料以中位数(第25百分位数，第75百分位数)表示，两组比较应用Mann-Whitney检验。三组间计量资料服从正态分布且方差齐的成组设计采用方差分析，组间比较采用SNK-q检验;非正态分布的计量资料采用Kruskal-Wallis法进行成组设计的多样本比较，组间的两两比较采用Neminyie法进行检验。在单因素分析的基础上采用多元线性回归分析。计数资料以百分率表示，采用χ2检验。数据间相关性采用相关分析;冠状动脉病变狭窄程度积分与各参数的关系采用多元线性回归分析。P＜0.05为差异有统计学意义，以上所有数据处理均用SPSS17.0软件。

2 结果

冠心病组较对照组血浆骨桥蛋白水平、甘油三脂、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、所服用阿司匹林、服用β受体阻滞剂比例升高，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)降低，差异均有统计学意义(P均＜0.05)。两组之间其它临床资料比较，差异均无统计学意义(P均＞0.05)。见表1。

表1 两组一般临床资料比较()

表1 两组一般临床资料比较()

注:与对照组比*P＜0.05。△明显偏态分布的计量资料以中位数(第25百分位数，第75百分位数)表示。HDL-C:高密度脂蛋白胆固醇;LDL-C:低密度脂蛋白胆固醇;ACEI:血管紧张素转换酶抑制剂;ARB:血管紧张素受体拮抗剂

对照组(n=30) 冠心病组(n=70)62±7 63±8男性［例(%)］13(43) 39(56)吸烟史［例(%)］11(37) 33(47)高血压病［例(%)］17(57) 43(61)服用ACEI或ARB［例(%)］9(30) 32(46)服用阿司匹林［例(%)］5(17) 53(76*)服用β受体阻滞剂［例(%)］6(20) 42(60*)服用他汀类药物［例(%)］10(33) 35(50)体重指数△(kg/m2) 23.50(21.75，25.83) 24.40(22.38，26.15)血糖△(mmol/L) 5.73(4.91，7.32) 6.32(5.33，7.82)甘油三脂△(mmol/L) 1.61(1.28，2.11) 1.93(1.53，2.63)*总胆固醇(mmol/L) 4.7±1.3 5.2±1.4 HDL-C△(mmol/L) 1.14(1.02，1.34) 0.99(0.80，1.19)*LDL-C(mmol/L) 2.04±0.83 2.45±0.91*血浆骨桥蛋白△(ng/L) 391(287，537) 537(372，725)年龄(岁)*

冠心病组不同冠状动脉病变支数亚组间两两比较，血浆骨桥蛋白水平、甘油三酯、总胆固醇、HDL-C、LDL-C差异均有统计学意义(P＜0.05，表2)。在经协变量进行协方差分析后，甘油三酯、总胆固醇、LDL-C在三组间分布差异仍有统计学意义(P分别为0.003、0.046、0.000)。采用多元线性回归分析均衡了年龄、性别、吸烟史、高血压病、血糖、所服用药物、血脂等影响后，不同冠状动脉病变支数亚组间的血浆骨桥蛋白水平差异仍具有统计学意义(P＜0.05)。

冠状动脉病变狭窄程度积分、病变血管支数与各变量的偏相关分析:将年龄、吸烟史、高血压病、性别作为控制变量，冠状动脉病变狭窄程度积分、病变血管支数与各变量进行偏相关分析可知，冠状动脉病变狭窄程度积分与骨桥蛋白(r=0.416，P＜0.01)、甘油三酯(r=0.434，P＜0.001)、LDL-C(r=0.402，P＜0.01)呈显著性正相关;病变血管数与骨桥蛋白水平(r=0.372，P＜0.01)、甘油三酯(r=0.415，P＜0.001)、总胆固醇(r=0.262，P＜0.05)、LDL-C(r=0.489，P＜0.001)呈显著性正相关。

从冠状动脉病变狭窄程度积分与各参数的多元线性回归分析:以冠状动脉病变狭窄程度积分为应变量，以年龄、性别、吸烟史、高血压病、体质量指数、甘油三酯、总胆固醇、HDL-C、LDL-C、血糖、骨桥蛋白、所服用药物为自变量，进行多元逐步线性回归分析可知，冠状动脉病变狭窄程度积分与骨桥蛋白(β=0.295，P＜0.05)、甘油三酯(β=0.308，P＜0.05)、LDL-c(β=0.296，P＜0.05)独立正相关。见表3。

表2 不同冠状动脉病变支数亚组间临床特征的比较()

表2 不同冠状动脉病变支数亚组间临床特征的比较()

注:不同冠状动脉病变支数亚组间两两比较▲P＜0.05。△明显偏态分布的计量资料以中位数(第25百分位数，第75百分位数)表示。英文缩略语注见表1。

冠状动脉病变支数1支病变亚组(n=24)2支病变亚组(n=21)3支病变亚组(n=25)年龄(岁) 65±7 63±8 63±9男性［例(%)］13(54) 9(43) 17(68)吸烟史［例(%)］11(46) 9(43) 13(52)高血压病［例(%)］13(54) 10(48) 15(60)服用ACE I或ARB［例(%)］11(46) 7(33) 14(56)服用阿司匹林［例(%)］18(75) 15(71) 20(80)服用β受体阻滞剂［例(%)］15(63) 12(57) 15(60)服用他汀类药物［例(%)］10(42) 10(48) 15(60)体重指数△(kg/m2) 24.45(22.55，26.25) 23.70(21.95，26.45) 24.90(22.40，26.00)血糖(mmol/L) 6.30±1.32 6.62±1.62 6.77±1.55甘油三酯△(mmol/L) 1.65(1.30，2.00)▲ 1.93(1.46，2.52)▲ 2.15(1.93，2.75)▲总胆固醇(mmol/L) 4.58±1.45▲ 5.49±1.33▲ 5.43±1.17▲HDL-C△(mmol/L) 1.09(0.79，1.20)▲ 1.12(0.90，1.24)▲ 0.83(0.71，1.02)▲LDL-C(mmol/L) 1.99±0.83▲ 2.31±0.91▲ 3.02±0.67▲血浆骨桥蛋白△(ng/L) 455(295，667)▲ 519(323，591)▲ 678(492，911)▲冠状动脉病变狭窄程度积分△ 5.0(4.0，5.0)▲ 9.0(7.5，9.5)▲ 12.0(10.0，13.5)▲

表3 冠状动脉病变狭窄程度积分与各参数的多元线性回归分析

3 讨论

骨桥蛋白是细胞外基质中一种重要的功能性蛋白，其相对分子质量约为44 kDa，是一种分泌型糖基化磷蛋白，因其介导骨组织细胞与骨基质的连接、参与骨基质矿化和重吸收过程而得名［1］。作为一种基质功能性非胶原蛋白，骨桥蛋白主要通过激活细胞内特异性信号传导系统而介导细胞粘附、迁移和增殖。在心血管系统中，一系列参与动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄的活性因子，如血小板衍生因子、碱性成纤维生长因子、表皮细胞生长因子、转化生长因子-β、血管紧张素Ⅱ等能够刺激血管内皮细胞和平滑肌细胞表达骨桥蛋白分子。

在正常的动脉壁骨桥蛋白表达甚微或几乎不表达，但是Dhore等［2］人用免疫组织化学染色发现在动脉粥样斑块处的泡沫细胞中或者钙化的部位骨桥蛋白表达明显增加，人主动脉粥样硬化斑块中的巨噬细胞、平滑肌细胞、内皮细胞都可以表达骨桥蛋白mRNA及合成骨桥蛋白。此外，不仅动脉粥样硬化病变部位的内皮细胞和平滑肌细胞内骨桥蛋白mRNA呈高表达状态［3］，而且细胞外基质中的骨桥蛋白含量也明显升高。研究表明，骨桥蛋白可以通过促进血管平滑肌细胞的增殖和迁移、对巨噬细胞趋化作用以及促进外膜成纤维细胞向内膜迁移而参与冠状动脉动脉粥样硬化的发生和发展。近来研究表明，骨桥蛋白作为一个细胞因子调节细胞功能而参与组织修复和炎症过程［4］，研究发现在疾病和组织损伤引起的炎症部位骨桥蛋白的水平增高。临床研究表明稳定性心绞痛患者中骨桥蛋白水平较正常对照组升高［5］。

本研究发现，冠心病患者中血浆骨桥蛋白明显升高，相关分析显示冠状动脉病变狭窄程度积分与骨桥蛋白、甘油三酯、LDL-C呈显著性正相关;病变血管数与骨桥蛋白、甘油三酯、总胆固醇和LDL-C水平呈显著性正相关。在经过多因素线性回归分析均衡了年龄、性别、吸烟史、高血压病等影响后显示，骨桥蛋白、甘油三酯、LDL-C水平仍与冠状动脉病变狭窄程度相关。表明血浆骨桥蛋白与冠状动脉病变狭窄程度有关，与相关研究结果一致［6］。

本研究显示血浆骨桥蛋白在冠心病患者中明显升高，并且血浆骨桥蛋白水平在冠状动脉病变血管数分组中的存在显著性差异，并与其冠状动脉病变狭窄程度呈正相关，表明冠心病患者血浆骨桥蛋白水平可能在一定程度上反映了冠状动脉病变的狭窄程度。

［1］Oldberg A，Franzen A，Heinegard D.Cloning and sequence analysis of rat bone sialoprotein(osteopontin)cDNA reveals an Arg-Gly-Asp cell-binding sequence .Proc Natl Acad Sci USA，1986，83(23):8819-8823.

［2］Dhore CR，Cleutjens JP，Lutgens E，et al.Differential expression of bone matrix regulatory proteins in human atherosclerotic plaques.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2001，21(12):1998-2003.

［3］Panda D，Kundu GC，Lee BI，et al.Potential roles of osteopontin and alphaVbeta3 integrin in the development of coronary artery restenosis after angioplasty.Proc Natl Acad Sci USA，1997，94 (17):9308-9313.

［4］O’Regan A，Berman JS.Osteopontin:A key cytokine in cell-mediated and granulomatous inflammation.Int J EXP Pathol，2000，81(6):373-390.

［5］Coskun S，Atalar E，Ozturk E，et al.Plasma osteopontin levels are elevated in non-ST-segment elevation acute coronary syndromes.J Natl Med Assoc，2006，98(11):1746 – 1750.

［6］Momiyama Y，Ohmori R，Fayad ZA，et al.Associations between plasma osteopontin levels and the severities of coronary and aortic atherosclerosis.Atherosclerosis，2010，210(2):668-670.