气相色谱法测定卵磷脂络合碘片在人体中的血药浓度

于忠辉，范 青，张 宁，张 策，吕慧怡

沃丽汀是卵磷脂络合碘片剂，临床用于治疗血管痉挛性视网膜炎、出血性视网膜炎、缺碘性甲状腺肿、缺碘性甲状腺机能减退等［1］。本实验原理为酸性条件下血样中的碘与重铬酸钾发生氧化还原反应析出碘单质，碘与丁酮1∶1络合生成碘丁酮，碘丁酮被环己烷有机溶剂萃取，用气相色谱法测定碘丁酮的浓度即为碘的浓度，适用于沃丽汀药代动力学的研究。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 气相色谱仪:GC-17A气相色谱仪;检测器:火焰离子化检测器(日本岛津公司);色谱柱类型:CV-1701;载气:氮气;燃气:氢气;助燃气:空气;METTLER万分之一分析天平(日本)。

1.2 药品 卵磷脂络合碘片(日本第一株式会社，规格:1.5 mg，批号:200803)。

1.3 试剂 硫酸、硫代硫酸钠、丁酮、重铬酸钾、环己烷，均为分析纯。

2 方法

2.1 对象的选择 6位健康受试者均为男性，年龄(23±4)岁，身高(175±5)cm，体重(75±5)kg。受试者体格检查肝肾功能、血常规、心电图、血压和脉搏均属正常;试验前2周及试验前期未服用其他药物，每位受试者均签署知情同意书。

2.2 方法 试验前随机编号，禁食12 h后，清晨空腹口服沃丽汀片剂，用温开水200 mL送服。受试者采血期间禁烟酒，采血后4 h给予低碘饮食。自给药后 0、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、8、10、15、24 h取上肢静脉血1.5 mL，并立即移入肝素化试管中。离心30 min(1 000 r/min)分离血浆。于-20℃冰箱中保存待分析。

2.3 血药浓度的测定

2.3.1 色谱条件的建立 采用CV-1701型色谱柱(50 mm×0.53 mm)，柱温105℃，氮气流速10 mL/min，汽化室温度230℃。检测器温度260℃，进样量1.0 μL。在选定的色谱条件下，血浆中的碘与内源性物质分离良好，保留时间为1.708 min，峰形尖锐。1号峰与2号峰分离度为1.51。见图1。

图1 碘的色谱图注:1.卵磷脂络合碘，2.内源性物质

2.3.2 血浆样品的预处理 取血浆样品0.5 mL，加水至5 mL，混匀。加入硫酸0.1 mL，摇匀后加入0.1 mol/L硫代硫酸钠溶液0.2 mL，再次混匀，加入丁酮0.5 mL，混匀后加入0.25 mol/L重铬酸钾溶液1 mL，混匀后放置10 min，加入环己烷。轻轻正反倒置30次，待其静置分层，提取上清液。进样，进样量1.0 μL，记录峰面积，求出血药浓度。

2.3.3 标准曲线的制备 预先将KI粉末在110℃烘干至恒重，精称KI粉末0.013 8 g用水定容至100 mL。临使用前将KI储备液稀释1 000倍。取储备液0.1 mL，用水定容至100 mL。分别取KI标准液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 于 5 支 10 mL带塞比色管中，并加入空白(未服药)血浆0.5 mL混匀。加入水至5 mL。按血浆样品处理项下的方法操作，取1.0 μL上清液进样，记录峰面积(A)，以浓度(C)对应峰面积(A)进行线性回归。得标准曲线方程:A=106 977.319C+5 499 093.095，r=0.999 2。由此可见，在 2 ～10 μg/dL的血药浓度范围内，血浆中的碘与其峰面积成良好的线性关系。

2.4 方法学考察

2.4.1 精密度试验 取5 mL的刻度试管，分别加入空白血浆，然后加入高、中、低3个浓度的标准碘液。使混匀配成含碘2、5、10 μg/dL的血浆样品，按“血浆样品的处理”项下的方法操作，取上清液进样，记录峰面积，处理后的样品置于冰箱中保存，于同一天内进样，每个浓度各进5针，计算日内精密度。连续5 d，每天每个浓度进一次样，计算日间精密度。日间精密度(3.26% ±7.21%)，日内精密度(2.43% ±6.31%)。

2.4.2 稳定性试验 取碘化钾标准液配制的5 μg/dL血浆溶液，按“血浆样品的处理”项下的方法操作，处理后的样品置于冰箱中保存。分别0、2.0、4.0、8.0、15、24.5 h 取上清液进样，记录峰面积，实验结果表明，在24 h内碘化钾标准溶液配制的血浆溶液的峰面积稳定，RSD值为0.725%。

2.4.3 回收率试验 取健康人血浆，加入KI标准液配成浓度2.0、5.0、10.0 μg/dL的溶液，各 6份，按“血浆样品的处理”项下的方法操作，用回归方程求得碘浓度，计算回收率，分别为101.11%、98.4%、97.96%，RSD为1.72%。

2.5 数据的处理 将测得的数据代入标准曲线得出血浆药物浓度。

3 结果

应用3P97进行数据处理，得到结果:tmax=(1.625 ±0.25)h，t1/2=(3.932 ±0.941)h，Cmax=(57.9±1.651)μg/L。血药浓度时间曲线见图2。

图2 血药浓度时间曲线

4 讨论

4.1 本实验结果沃丽汀血药浓度在1.6 h达峰，至24 h已基本代谢完全。表明气相色谱法适用于卵磷脂络合碘片(沃丽汀片)血浆药物浓度的测定，为进一步提供药物代谢动力学监测提供了依据。其结果准确、可靠、简便。

4.2 由于人体甲状腺摄取碘，在饥饿等状态下可能释放碘。人体自身碘值的影响会干扰实验结果。所以在实验过程中特别注意饮食和饮水平衡，给予低碘饮食，使得人体内基础碘值处于相对恒定的水平［4］。

4.3 本实验存在样本少的缺点，可为进一步临床试验提供依据，温度对本实验影响不大，室温放置与置于冰箱中保存后测定结果相差微小，所以本实验中对温度要求不很严格。

［1］ 王晓通，姚金瑞.沃丽汀联合肠溶阿司匹林治疗视网膜静脉阻塞［J］.实用医学杂志，2007，23(13):2114-2115.

［2］ 蔡克波.卵磷脂络合碘片对非缺血型视网膜分支静脉阻塞的疗效［J］.实用医学杂志，2007，23(7):1051-1052.

［3］ 陈永信，张承芬，谭柯.卵磷脂络合碘片(沃丽汀)临床应用的安全性和有效性验证［J］.临床眼科杂志，2007，3(15):251-253.

［4］ 许启荣，龙敏，曹民，等.离子色谱法测定尿碘浓度［J］.中国药房，2006，17(23):1794.