联合检测妊娠相关蛋白A在化学发光法检测血清人绒毛膜促性腺激素中的应用

张文霞，王玉新

（河北省衡水市第四人民医院检验科，河北衡水 053000）

联合检测妊娠相关蛋白A在化学发光法检测血清人绒毛膜促性腺激素中的应用

张文霞，王玉新

（河北省衡水市第四人民医院检验科，河北衡水 053000）

目的探讨在化学发光法检测血清人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotrophin，HCG）中，联合检测妊娠相关蛋白A（pregnancy associated p1asma protein-A PAPP-A），以避免假阳性及假阴性的价值。方法收集胶体金早早孕试验为弱阳性的89例患者血清，用化学发光法测定未稀释及1∶500倍稀释的HCG水平；用酶联免疫吸附试验（enzyme-1inked immunosorbentassay，ELISA）检测PAPP-A。结果化学发光法未稀释及稀释500倍后的结果，在检测值高于试剂检测限时差异有统计学意义（P＜0.05）；有1例因后带效应产生了假阴性，PAPP-A检测结果验证阳性；4例HCG结果为阳性的标本，PAPP-A检测结果为阴性，加入中和试剂后，HCG结果变为阴性，为嗜异性抗体的干扰。结论对于胶体金早早孕试纸初筛为弱阳性的标本，可采用PAPP-A与HCG联合检测的方法，避免漏诊及误诊。

绒毛膜促性腺激素；胎盘催乳激素；化学发光测定法

化学发光法检测血清人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotrophin，HCG）是大多数实验室常用的血清学实验。在临床检验工作中，经常在用化学发光法测定HCG前，先用胶体金早早孕试纸初筛，以判断是否需要稀释及大致稀释倍数。而对于胶体金早早孕试纸筛选为弱阳性的标本，化学发光法容易存在假阳性及假阴性的问题。采用妊娠相关蛋白A（pregnancy associated p1asma protein-A，PAPP-A）与HCG联合检测的方法，可提高HCG检测的灵敏度，避免漏诊及误诊。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选择2007年7月—2010年12月门诊和住院孕妇的血液标本，且用早孕试纸初筛为弱阳性的血清标本89例，年龄18～41岁，平均36岁。

1.2 试剂与方法

1.2.1 胶体金早早孕试验：空腹抽取3mL血液，离心后取血清。将试纸有箭头一端插入血清中，5s后取出平放，5min之内观察结果。检测线出现红色，且较对照线位置红色反应线颜色淡为弱阳性。检测早早孕试纸由蓝十字生物药业（北京）有限公司提供。

1.2.2 化学发光免疫分析法测定HCG：仪器为德国Lumino化学发光免疫分析仪，试剂盒购自深圳新产业生物医学工程公司。检测限为2 000U/L。我室化学发光免疫法正常参考范围为＜5U/L，测定结果＜5U/L判为阴性、≥5U/L判为阳性。本试剂采用单克隆抗体标记，抗体血清来源为小鼠，能同时检测血清中的全分子HCG及游离的β-HCG，且不与促黄体生成素、卵泡刺激素、促甲状腺激素发生交叉反应。将收集到的血清同时检测未稀释及稀释500倍时的HCG水平，稀释后血清检测值需乘稀释倍数500，得到检测值。

1.2.3 酶联免疫吸附法检测PAPP-A：PAPP-A的检测使用荷兰-雷勃MK-3酶联检测仪，试剂盒购自美国Association Gene公司。

1.3 统计学方法：应用SPSS11.5统计软件进行分析，计量资料以±s表示，均数间比较采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

未稀释血清HCG阴性8例，稀释500倍后，阴性结果为7例，另1例为高检测值（7 435～7 648U/ L），是因后带效应产生了假阴性。PAPP-A验证了这一结果，即阴性结果7例，另1例为强阳性（18.49U/L）。未稀释血清HCG阳性81例，未稀释及稀释500倍后的结果在高于检测限组差异有统计学意义（P＜0.05），低于检测限组差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

未稀释血清HCG阳性81例，PAPP-A结果阴性4例，其余均为阳性。4例PAPP-A阴性的标本，加入本试剂所来源的小鼠血清（中和试剂）后，重新检测HCG，结果变为阴性。证明为嗜异性抗体引起的假阳性。

表1 未稀释及稀释500倍后血清HCG阳性检测结果Table 1 Positive Results of HCG for undiluted and 1∶500 diluted serum

3 讨 论

HCG主要是在妊娠期由胎盘滋养细胞分泌的糖蛋白，在滋养细胞疾病时因滋养细胞高度增生，也可产生大量的HCG。在人的血液中存在多种形式，除包括同时含有一分子α亚基和一分子β亚基的完整的HCG分子（称为全分子HCG又称为整分子HCG、规则HCG）外，还有其他几种不同形式的HCG分子，如糖基化HCG、缺刻HCG、β-亚基C末端肽缺失HCG、游离-β亚单位、游离-α亚单位等。不同的试剂由于使用的抗体和结合位点不同，故对不同HCG分子检测的侧重不一样［1］。金标试纸条法操作简便、快速，在临床检验工作中，经常是在用化学发光法测定HCG前，先用胶体金早早孕试纸初筛，以判断是否需要稀释及大致稀释倍数。对于金标试纸条检测为弱阳性的标本，可能会因本身方法学原因，受到非HCG分子的影响，或因为某些原因检测到其他无活性的HCG分子造成假阳性。另外，金标试纸条初筛为弱阳性的标本，化学发光法更容易出现假阳性及假阴性的问题。当血清中HCG浓度过高时，会出现高浓度后带现象（“钩状效应”），此时免疫反应被明显抑制，测定结果偏低，甚至出现假阴性。要消除此干扰，只有对样本进行适当稀释后重新测定［2］。本研究中有1例在未稀释时HCG表现为阴性，稀释500倍后为强阳性；另外，在检测值高于试剂检测限时，未稀释及稀释后的检测值差异有统计学意义，正是印证了这一说法。同时，因受嗜异性抗体及交叉污染的影响，结果可呈假阳性。人嗜异性抗体是指源于其他种类动物的蛋白产生反应的人类抗体。据报道［3］经常与动物密切接触的人群，其血中存在嗜异性抗体的可能性比较大。而要判断是假阳性或者是假阴性，或者对样本进行稀释，或者加入中和试剂后重新进行检测，既费时又浪费试剂。PAPP-A是一种与妊娠相关联的大分子糖蛋白，是由胎盘合体滋养细胞和蜕膜细胞产生的巨球蛋白，从妊娠第5周即可检测到，且随孕周的增加，其含量逐渐升高，孕末期达高峰，产后下降。PAPP-A在早期配子的发育、孕卵的着床、妊娠的维持以及胎儿和胎盘的生长、发育等诸方面均起着至关重要的作用［4］。同时，有研究发现［5］，PAPPA检测可能早期诊断良、恶性葡萄胎，并有助于早期预测葡萄胎恶变。ELISA法检测PAPP-A快速（1h左右）、简单，试剂、设备价格低廉，可在基层推广。本研究表明，ELISA法检测PAPP-A与化学发光法检测HCG联合使用，可提高HCG检测的灵敏度和特异性，避免漏诊及误诊，是一种值得推广的方法。

［1］朱亚飞，刘丝荪，易为民，等.血清HCG假阳性的问题［J］.中国妇产科临床杂志，2005，6（1）：76-77.

［2］吴健民.影响肿瘤标志物检测的因素［J］.中华检验医学杂志，2005，28（4）：352-354.

［3］林敏，农天雷.人绒毛膜促性腺激素检测及临床应用［J］.检验医学与临床，2009，6（4）：281-282.

［4］杨萍，王英红.妊娠相关血浆蛋白-A、孕激素水平在异位妊娠和稽留流产早期诊断中的价值［J］.中国妇幼保健，2010，25（34）：5051-5053.

［5］方静，苟文丽.妊娠相关血浆蛋白A对妊娠滋养细胞疾病诊断及预后价值的探讨［J］.中国实用妇科与产科杂志，2007，23（2）：129-130.

（本文编辑：赵丽洁）

STUDY ON APPLICATION OF DETECTING PREGNANCY ASSOCIATED PLASMA PROTEIN-A IN CHEM ILUM INESCENCE DETECTION OF HUMAN CHORIONIC GONADOTROPH IN

ZHANGWenxia，WANG Yuxin
（Department of Laboratory，the Fourth People’s Hospital of Hengshui City，Hebei Province，Hengshui053000，China）

Ob jective To exp1ore the va1ue of detecting pregnancy associated p1asma protein-A（PAPP-A）in chemi1uminescence detection of human chorionic gonadotrophin（HCG）.MethodsEighty-nine weak positive serum caseswith ear1y pregnancy test paperwere co11ected to detect the va1ue of HCG for undi1uted and 1∶500 di1uted serum particu1ar1y by chemi1uminescence，and the va1ue of PAPP -A by enzyme-1inked immunosorbent assay（ELISA）.ResultsThe resu1ts of HCG for undi1uted and 1：500 di1uted serum were apparent1y differentwhen the va1ueswere outside of the test1imit（P＜0.05）；One fa1se negative case occurred because of the post banding effect，which was verified by the resu1t of PAPP-A；For the 4 HCG positive cases，the resu1ts of PAPP-A were negative.After putting neutra1ization reagent in the serum，the resu1ts of HCG appeared to be negative.ConclusionFor the weak positive caseswith ear1y pregnancy test paper，combined detection of PAPP-A and HCG can avoid missed diagnosis and misdiagnosis.

chorionic gonadotrophin；p1acenta11actogen；1uminescence

R446.62

A

1007-3205（2011）10-1169-03

2011-04-08；

2011-06-04

张文霞（1973-），女，河北衡水人，河北省衡水市第四人民医院主管技师，医学学士，从事化学发光免疫学研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2011.10.020