应用EP7-A2方案评价循环酶法同型半胱氨酸试剂对其他生化检测项目的干扰

熊声贺 王琴琴 黄新城

（南昌大学第三附属医院 江西南昌330008）

高同型半胱氨酸（HCY）被认为是心脑血管疾病的独立危险因素[1]，其实验室检测和临床应用[2]日趋受到广大专家学者的关注。经典的HCY检测方法为荧光偏振法，因该法需要专用的仪器设备，限制了该项目的临床应用范围，近年来，随着循环酶法同型半胱氨酸试剂研制成功，实现了HCY在生化分析仪上的快速、方便检测。我们在引进该检测项目过程中，发现循环酶法同型半胱氨酸试剂对生化分析仪上部分检测项目存在不同程度的干扰，为此我们就HCY试剂对常见生化项目的干扰效应进行了评估。现报告如下：

1 材料与方法

1.1 仪器 日立7600-010全自动生化分析仪，仪器经过厂商校验评估，样本针携带污染率0.028%，小于0.5%；总携带污染率高→低为0.030%，低→高为-0.481%，小于2.0%；满足仪器厂商技术要求。

1.2 试剂 本实验室常用项目试剂ALT、AST、TBIL 、DBIL、BUN、CREA、UA、HDL-C 均来源于上海紫兴生物科技有限公司，其中ALT、AST、BUN均采用速率法检测，TBIL、DBIL采用钒酸盐氧化法检测，CREA、UA采用酶显色法检测，HDL-C采用单克隆抗体抑制-胆固醇氧化酶（一步法）法检测；TCHO、TG试剂来源于温州维日康科技有限公司，均采用氧化酶法检测；GSP试剂来源于浙江伊利康生物科技有限公司，采用NBT还原法检测；HbA1c试剂来源于日本积水医疗株式会社；以上项目使用的校准品分别来自瑞士罗氏公司及浙江伊利康、日本积水医疗等公司配套使用产品。同型半胱氨酸检测试剂来源于台湾台塑生医科技有限公司，批号：SP10C61，内含配套校准品和质控品。

1.3 方法

1.3.1 样本及准备 样本选自本实验室内当天分析检测剩余血清样本约100 mL，选用有适量胆红素（即黄疸）的样本，将选择的血清样本混合均匀，以3 000 rps速度离心，取上清液对半分为2份，密闭暂存备用。

1.3.2 样本基础数据检测 取上述处理好的样本1份分成20小份，在日立7600-010全自动生化分析仪上检测上述常用项目，检测项目均经过适当的校准并且质量控制合格，按检测项目的方式进行，即所有样本检测完一个项目后，再用同一样本检测其他项目，目的为避免不同项目间引入的交叉污染。

1.3.3 干扰试验 从另1份血清样本中取2份各5.0 mL，分别按0.5%的体积加入同型半胱氨酸试剂1（R1）和试剂 2（R2），然后再用剩余的基础血清稀释上述两份样本，使其加入物含量均分别为0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%，充分混匀后上机检测上述常用项目，按基础数据样本检测方式测定样本，每样本连续重复测定3次。

1.4 统计学方法 上述所有样本测试数据，采用SPSS10.0软件统计分析。

2 结果

见表 1、表 2。

表1 基础数据与干扰试验测试数据比较

表2 干扰物加入量与被干扰检验项目结果偏倚的剂量效应

3 讨论

本实验研究干扰物加入量，按探针最大允许携带0.5%量进行模拟，实验数据统计和分析中扣除稀释效应，按照 CLSI EP7-A2 评价方案要求[3～4]，并力求避免试剂探针和搅拌棒的携带污染，采用了按项目连续重复检测的方法。统计结果显示：不同的测试项目受HCY试剂不同组分干扰效应各不相同，造成的数据偏倚有正负之分，剂量效应也有大小差别。同型半胱氨酸检测试剂对常用5个项目检测结果产生影响，究其原因，与其试剂组方应有很大关系，因其R1中含有较高浓度的还原剂、R2中含有高浓度的氧化剂，其对检测系统的内源性污染造成部分敏感项目结果偏倚增大。据报道NADH氧化酶检测体系对氧化剂敏感[5]，而UA、GSP检测体系对还原剂敏感[6]。另R2中可能含较高浓度镁盐或影响镁盐检测的成分。

生化分析系统中分析项目间的交叉污染问题，近年来受到较多学者关注[7～8]，而象我们研究的这种千分之几的污染物，引起百分数位检测物含量变化，更应仔细研究和探讨。更有可能有部分生化分析系统携带污染率可能高达百分之十几或几十，其结果报告给临床医疗可能带来灾难性后果。生化分析系统中反应性交叉污染的机制和效应，是一个很深层次的系统问题，建议有研究条件的学者应重点关注。

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