胭脂树低聚糖增强小鼠免疫功能的研究

王秒 白玉 李钢 任凤芝

（华北制药新药研究开发中心药理研究室 河北石家庄050015）

低聚糖或称寡糖，是由2～20个单糖通过糖苷键连接形成的直链或支链的低度聚合糖，有功能性低聚糖和普通性低聚糖两大类。多项文献研究报道显示，功能性低聚糖可以促进肠道内有益菌的增殖，激活机体的体液、细胞免疫系统从而提高动物机体的免疫力[1～3]。胭脂树低聚糖是由粉碎后的胭脂树种子或提取色素后的胭脂树种子，通过水或乙醇煮提，浓缩，加水稀释，离心，上清液经活性炭和凝胶柱层析处理，得到的低聚糖，其化学结构为α-D-Gal-(1→3)-α-D-Gal-(1→6)-α-D-Glc-(1→2)-β-D-Fru。本试验拟研究胭脂树低聚糖对小鼠体液免疫和单核巨噬细胞吞噬功能的影响。

1 材料与方法

1.1 药品与仪器 胭脂树低聚糖，华药新药研发中心；蜂胶胶囊，浙大生命药业公司；2100紫外分光光度计，Amersham Biosciences公司；BX-51生物显微镜，Olympus公司。

1.2 实验动物 清洁级KM小鼠，体重18～22 g，河北医科大学实验动物中心提供。

1.3 实验方法

1.3.1 血清溶血素实验 KM小鼠40只，随机分为四组：阴性对照组（蒸馏水）、胭脂树低聚糖高剂量组(0.6 g/kg)、低聚糖低剂量组(0.2 g/kg)、阳性对照蜂胶组(1.6 g/kg)，每组10只，雌雄各半。各组小鼠灌胃给药，1次/d，连续9 d。于给药第2天，小鼠腹腔注射5%鸡红细胞(CRBC)混悬液0.2 mL进行免疫。免疫7 d后，小鼠摘眼球取血1 mL，分离血清，用生理盐水稀释100倍，取稀释血清1 mL加入5%CRBC 0.5 mL，每管加入0.5 mL生理盐水1:10稀释过的豚鼠血清，随即移至37℃恒温水浴中，保温30 min，即放入冰浴以终止反应，2 000 r/min离心10 min，取上清1 mL，546 nm处测定吸光度(A)值。

1.3.2 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验 KM小鼠40只，分组同上。各组小鼠灌胃给药，1次/d，连续30 d。末次给药后每只小鼠腹腔注射10%鸡红细胞混悬液1 mL，间隔1 h颈椎脱臼处死，固定于鼠板上，剪开腹壁皮肤，注射生理盐水2 mL，转动鼠板1 min，吸出腹腔洗液1 mL，分滴于玻片上，置于垫有湿纱布的搪瓷盘内，于37℃孵箱内孵育30 min，用生理盐水漂洗轻洗，除去未贴牢固的细胞，晾干，以甲醇固定，Giemsa染色15 min，再以蒸馏水漂洗晾干，用油镜观察计数，每片计100个巨噬细胞，计算吞噬百分率。

2 实验结果

2.1 对小鼠血清溶血素的影响 与对照组相比，阳性药蜂胶显著增加血清溶血素含量，比对照组提高了35.6%，差异极显著（P＜0.01）；胭脂树低聚糖0.6 g/kg显著增加小鼠的血清溶血素含量，比对照组提高了20.5%（P＜0.05）。见表1。

表1 各组小鼠溶血素值比较 (±S)

表1 各组小鼠溶血素值比较 (±S)

注：与阴性对照组比较，**P ＜0.01，*P ＜0.05。

组别 溶血素值（OD546值）阴性对照 0.073±0.008蜂胶(1.6 g/kg) 0.099±0.021**胭脂树低聚糖(0.2 g/kg) 0.083±0.013胭脂树低聚糖(0.6 g/kg) 0.088±0.019*

2.2 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬的影响 与对照组相比，阳性药蜂胶显著增加小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率，比对照组提高了75.4%（P＜0.01）；胭脂树低聚糖0.2 g/kg和0.6 g/kg均显著增加小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率，比对照组分别提高了36.5%和47.8%（P＜0.01）。见表 2。

表2 各组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率比较 (±S) %

表2 各组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率比较 (±S) %

注：与阴性对照组比较，*P＜0.01。

组别 巨噬细胞吞噬率阴性对照 29.3±11.2蜂胶(1.6 g/kg) 51.4±19.2*胭脂树低聚糖(0.2 g/kg) 40.0±11.1*胭脂树低聚糖(0.6 g/kg) 43.3±12.2*

3 讨论

动物血清溶血素含量的高低是衡量体液免疫的重要指标，当动物血清抗体水平提高的同时血清凝集素水平也会提高[4]。本研究结果显示灌胃给予小鼠胭脂树低聚糖后，0.6 g/kg剂量的胭脂树低聚糖可显著增加小鼠的血清溶血素值，说明胭脂树低聚糖可以促进小鼠体液免疫功能。巨噬细胞是由循环血液中的单核细胞衍化而来，在免疫过程中起着重要作用。有研究报道大豆低聚糖是通过增殖的双歧杆菌而激活机体免疫系统中的巨噬细胞，提高其吞噬能力[5]。本研究结果显示灌胃给予小鼠0.2 g/kg和0.6 g/kg剂量的胭脂树低聚糖30 d后，可显著增加小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率，说明胭脂树低聚糖可以明显促进小鼠单核巨噬细胞吞噬能力。综上所述，胭脂树低聚糖能增强小鼠体液免疫功能和巨噬细胞的吞噬功能，具有一定的增强免疫作用。

[1]张树清,李小成,孙玉华.大豆低聚糖对小鼠体液免疫功能的影响试验研究[J].微生物学杂志,2007,27(2):97-99

[2]徐超斗,梁爱君,祝业,等.大豆低聚糖对免疫功能的促进作用[J].解放军药学学报,2005,21(1):37-39

[3]杭锋,伍剑锋,龚广予,等.不同剂量蔗果低聚糖对小鼠免疫调节的研究[J].食品工业科技,2010,31(10):359-363

[4]江振友,林晨,刘小澄,等.灵芝多糖对小鼠体液免疫功能的影响[J].暨南大学学报,2003,24(2):51-53

[5]王立生,朱惠明,杨林,等.双歧杆菌的完整肽聚糖对巨噬细胞产生IL-18的影响[J].中国微生态学杂志,2004,16(4):195-196