BM高效腐熟剂对烤烟三种常见病害病原物的影响

刘元东,郝文利,王风英,何畅

（1.鹤壁市土壤肥料工作站,河南鹤壁 458030；2.国营浚县农场,河南鹤壁 458030；3.河南师范大学生命科学学院,河南新乡 453000）

烤烟提倡施用腐熟有机肥近年来已被行业专家普遍认可[1].河南宝融生物科技有限公司生产的BM高效腐熟剂是专门处理畜禽粪便的微生物制剂,其所处理畜禽粪便后生产的有机肥对烤烟落黄产生的明显影响,已经被技术人员试验并且得到验证.根结线虫Meloidogyne incognita、黑胫病病原菌Phytophthora nicotiana和角斑病病原菌Pseudomonas angulata是烤烟上的3种常见病原[2],BM高效腐熟剂对上述病原有无抑制作用尚不清楚.因此,我们分别对烤烟的3种常见病害病原物进行了BM高效腐熟剂的效果试验,以期为BM高效腐熟剂用于烤烟病害的防治提供理论依据.

1 材料与方法

1.1 供试材料

供试的BM高效腐熟剂由河南宝融生物科技有限公司提供.

供试的根结线虫Meloidogyne incognita、黑胫病病原菌Phytophthora nicotiana和角斑病病原菌Pseudomonas angulata3种病原采自染病的烟草植株.

1.2 试验方法

1.2.1 BM高效腐熟剂对烤烟根结线虫的影响 取结瘤烟根数条,切取根瘤,称3份各5.0 g,将3份根瘤切片,做不同的处理.处理Ⅰ：将5.0 g根瘤切片与BM高效腐熟剂处理的畜禽粪便5 g均匀混合,置于100 mL三角瓶中,保持含水量50%,置于25℃恒温培养箱中培养10 d后取出,加入无菌水50mL,同时加入玻璃珠数颗,在往复式振荡器上振荡24 h,用微量移液器吸取250μL于洁净载玻片上,用吕氏美蓝染色液染色,不加盖玻片于16×4倍显微镜下观察,随机选择10个视野,记录活体雄成虫、雌成虫、卵囊数.处理Ⅱ：将5 g根瘤切片放入透气塑料薄膜袋中,置于正在用BM高效腐熟剂进行处理的畜禽粪便中,10 d后取出,用与处理Ⅰ相同的方法进行计数.对照于25℃恒温培养箱中自然放置10 d,取出后用与处理Ⅰ相同的方法进行计数.

1.2.2 BM高效腐熟剂对烤烟角斑病病原菌的影响 取30 g病斑样品,剪成细碎小块,分成3份.试验设2个处理,处理Ⅰ：将10 g病斑碎片与10 g用BM高效腐熟剂处理的畜禽粪便均匀混合,置于150mL三角瓶中,保持含水量50%,于26℃恒温培养箱中培养10 d后进行CFU（colony forming units,CFU）计数，具体方法为：加入带玻璃珠的100mL无菌水中,静置20min,在旋转式摇床上200 r/min充分振荡2 h,制成基础液,用5mL无菌液管分别吸5mL上述母液菌加入45mL无菌水中,按1：10进行系列稀释,分别得到1：10-1、1：10-2……1：10-8稀释的菌悬液（每个稀释度应换无菌移液管）.取 10-6、10-7、10-83 个连续稀释浓度,用0.5mL无菌移液管分别吸取不同稀释度度的菌悬液0.1mL,加至预先制备好的固体肉汤培养基平板上,分别用无菌玻璃刮刀将不同稀释度的菌悬液均匀涂布于表面,每一稀释浓度重复3次.同时以无菌水作空白对照,于适宜的条件下培养,根据烤烟角斑病菌的特征,确认有效菌.以出现20～300个菌落数的稀释浓度为计数标准,统计有效活菌数.10 d后取出检测菌含量.处理Ⅱ：将10 g角斑病病斑碎片用适合塑料袋包装好置于用BM高效腐熟剂处理的畜禽粪便堆肥中,其余方法同处理Ⅰ.对照取10 g病斑小块,于26℃恒温培养箱中自然放置10 d后取出,其余方法同处理Ⅰ.

1.2.3 BM高效腐熟剂对烤烟黑胫病病原菌的影响 BM高效腐熟剂对烤烟黑胫病病原菌的影响试验方法同1.2.2,不同之处在于所用培养基为PDA孟加拉红培养基,稀释浓度为10-3、10-4、10-5,培养温度30℃,计数标准为10～150个菌落数.

2 结果与分析

2.1 BM高效腐熟剂对烟草根结线虫的影响

由表1可以看出,处理Ⅰ较对照活体根结线虫雄虫数、雌虫数、卵囊数分别减少37.9%、48%、34.9%.处理Ⅱ从堆肥中挖出,根瘤切片呈炭黑状,未曾观察到有完整的雄虫雌虫和卵囊,判定3者含量为0.处理Ⅰ利用BM高效腐熟剂处理的有机肥中含有某些生物防治菌,如苏云金芽胞杆菌[3]的伴孢晶体及毒素和大量抗生素类物质,可能是导致根线虫活体数量减少的一个原因.处理Ⅱ由于连续60℃以上的高温导致了根结线虫虫体和虫卵自溶,所以未见活体根结线虫[4].

表1 不同处理烟草根结线虫数量变化情况

2.2 BM高效腐熟剂对烤烟黑胫病、角斑病病原菌的影响

由表2可以看出,BM高效腐熟剂对角斑病菌、黑胫病菌按处理Ⅰ的方法处理10 d后均有一定的抑制效果,但处理Ⅱ中未观察到2种病原菌存在.病原菌的减少可能是因为用BM高效腐熟剂处理的畜禽粪便中含有大量抗生素类物质和生防菌群,对病原菌具用杀灭、拮抗或寄生作用.

表2 不同处理烤烟两种病原菌数量的变化

3 讨论

以菌治菌,以菌治虫[5]是近年来植物保护领域的研究热点之一.BM高效腐熟剂由河南宝融生物科技有限公司从自然界众多微生物中筛选出来的若干有益微生物组合而成,其含有大量具有生物防治效果的微生物.从试验中可以看出,BM高效腐熟剂对根结线虫、烟草角斑病菌、烟草黑胫病菌都有一定的抑制作用.在模拟土壤的条件下,杀灭了大部分有害病原物,从而促进了烤烟正常的生长发育.究其原因,BM高效腐熟剂中含有大量具有生物防治效果的微生物,其所产生的毒素和抗生素类物质对病原物具有拮抗、杀灭作用.但是,在10 d内并不能彻底杀灭有害病原物也是事实,关于BM高效腐熟剂处理时间对烤烟病原物的影响,以及如何提高BM高效腐熟剂的抑虫抑菌效果,是尚需继续研究解决的问题[6].

[1]韩锦峰,王凌,张秀英,等.生物有机肥对烤烟生长发育及其产量和品质的影响[J].河南农业科学,1999（6）：11-14.

[2]杨建卿,江彤,承河元.烟草病理学[M].北京：中国科学技术出版社,2003.

[3]常明,孙启宏,周顺桂,等.苏云金芽孢杆菌生物杀虫剂发酵生产的影响因素及其工艺选择[J].生态环境学报,2010,19（6）：1471-1477.

[4]刘维志.植物病原线虫学[M].北京：中国农业出版社,2000.

[5]顾月华.生物技术与绿色环境[J].生物学杂志,1998,15（5）：25-26.

[6]朱贵明,何命军,石屹.对我国烟草肥料研究与开发工作的思考[J].中国烟草科学,2002,23（1）：19-20.