GC法测定八角枝叶中反式茴香脑的含量

2011-04-18刘布鸣张宁宁

中国民族民间医药 2011年18期

林霄刘布鸣张宁宁刘元

广西中医药研究院广西中药质量标准重点实验室，广西南宁 530022

木兰科植物八角茴香Illicium verum Hook.f.主要产于广西、云南［1］，其新鲜枝叶或成熟果实经水蒸气蒸馏可得到八角茴香油［2］，临床上用于温阳散寒，理气止痛，用于寒疝腹痛，肾虚腰痛，胃寒呕吐，脘腹冷痛［2］。八角茴香油的主要成分为反式茴香脑。文献报道的八角茴香油中反式茴香脑的测定方法多采用填充柱气相色谱法或气质联用色谱法［3－5］，而以内标法计算的毛细管柱气相色谱法未见报道，且作为八角茴香油原料的八角枝叶亦鲜见有含量测定方面的报道。控制八角茴香油的质量首先就需从原料抓起。本实验采用毛细管柱气相色谱内标法测定八角枝叶中反式茴香脑的含量，结果表明，本法快速、准确，重现性和分离效果好，可作为八角枝叶质量控制的测定方法。

1 仪器、试药与试样

美国安捷伦7890A气相色谱仪。反式茴香脑对照品(trans－Anethol)，Lot:10370，含量≥99.0%，购自美国Sigma－Aldich Fluka公司;环己酮 (批号20070205)，分析纯，天津市福晨化学试剂厂，含量≥99%。水为蒸馏水，其余所用试剂均为分析纯。样品:八角茴香枝叶，采自广西金秀、马山、大新，广西中医药研究院中药所提供，经黄云峰助理研究员鉴定为木兰科植物八角茴香Illicium verum Hook.f.。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱:HP－INNOWAX(相当于PEG－20M)毛细管柱，内径 0.32mm，柱长为 30m，膜厚0.50μm。程序升温:初温90℃，以每分钟5℃的速率升温至140℃，再以每分钟10℃的速率升温至200℃，保持5分钟;分流进样，分流比为10∶1。进样口温度:230℃;FID检测器温度:230℃。进样量1.0μl，理论板数按环己酮峰计算大于50000。

2.2 对照品溶液的制备称取反式茴香脑对照品约5g，精密称定，得5.0917g，置50ml量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，即得 (101.834mg/ml)。

2.3 内标溶液的制备取环己酮约2.5g，精密称定，得2.5146g，置50ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，作为内标溶液 (50.292mg/ml)。

2.4 供试品溶液的制备取八角枝叶粉末约4g，精密称定，置500mL蒸馏瓶中，加水300ml，于电热套蒸馏至挥发油不再增加为止，挥发油测定器中蒸馏液用乙酸乙酯萃取3次，每次10ml，合并萃取液，置50ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.5 标准曲线及线性范围考察精密吸取反式茴香脑对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置50ml量瓶中，各精密加入内标溶液1ml，加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件，进样1.0μl，测定，以茴香脑与环己酮的峰面积积分值之比为纵坐标，茴香脑进样量为横坐标做标准曲线图，得回归方程Y=1.0579 X－0.006，r=0.9994，说表明茴香脑进样量在0.2037～2.0367μg范围内良好的线形关系。

2.6 校正因子测定精密称取上述反式茴香脑对照品溶液0.6ml置50ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，作为校正因子测定溶液 (含反式茴香脑 1.222mg/ml，环己酮 1.0058mg/ml)。吸取1.0μl，注入气相色谱仪，测定，计算校正因子。结果校正因子为0.9450，RSD=1.95%(n=6)。

2.7 精密度试验分别吸取同一供试品溶液，进样6次，依次测定，以茴香脑峰面积积分值对环己酮峰面积积分值的比值计算相对标准偏差，测得平均值为0.9706，RSD=0.35%。

2.8 重复性试验取同一批次八角枝叶 (广西金秀)，按供试品溶液制备方法制备6份，分别进样，测得反式茴香脑平均值为1.11%(g/g)，RSD=1.36%。

2.9 加样回收试验取已测知含量 (1.11%)的八角枝叶(广西金秀)6份，每份2g，精密称定，加入反式茴香脑对照品溶液0.2ml，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，再按上述色谱条件进样1.0μl，计算，结果见表1。