小鼠高尿酸血症模型的建立及小春花的干预作用

林宇星 阮君山 傅慧玲 周 欢 王少明 庄 捷

1.福建医科大学省立临床学院，福建 福州 350001;2.福建省立医院，福建 福州 350001

健康人的血清尿酸值一般为男性238－357umol/L，女性178－297umol/L，但由于饮食结构和生活习惯的变化，如摄入高嘌呤的食物，劳累及剧烈运动等也会有一过性的上升。因此通常1～2周内测定2～3次，男性若持续超过380umol/L，女性持续超过300umol/L，就可称为高尿酸血症［1］。

以往人们对嘌呤代谢产物的作用和意义认识较少，HU在我国一直被当作少见病。近年来由于人们生活水平的提高、饮食结构的变化，HU和痛风的发病率逐年提高。流行病学研究表明，痛风的发病率在不断上升，导致了经济负担的不断加重［2－4］。高尿酸血症 (HU，hyperuricemia)是痛风发展的一个关键性因素，而且与肾功能不全、心血管疾病、高血压、高脂血症、肿瘤、糖尿病肿瘤与衰老、糖尿病、器官移植以及代谢综合症的发生相关［5－9］。血尿酸产生过多、肾脏尿酸排泄障碍或者这两个因素的综合作用导致高尿酸血症的发生。建立适合的HU模型，对人们无论研究嘌呤代谢产物的检测方法，还是研究与嘌呤代谢有关的其他各种疾病，都具有重要的意义。

小春花系阴地蕨科植物阴地蕨 Sceptridium ternatum(Thunb1)Lyon的民间习称，主产地为福建。性甘平、味淡，具有清肝、肺火、明目、解热祛风的功效［10］。临床上可用于高尿酸血症及痛风的治疗。我们前期的研究表明其具有解热、抗炎、免疫调节和抗肿瘤等活性［11－14］。我们利用建立的模型观察小春花的干预作用，以检验模型是否成功。

1 材料与方法

1.1 实验动物 雄性昆明小鼠100只，体重17.5～31.0克，由福建省立医院实验动物中心提供。

1.2 主要仪器 代谢笼:苏州实验动物器械厂;离心机:贝克曼高速离心机;电子天平:上海精密化学仪器有限公司;全自动生化仪:日立仪器 (苏州)有限公司。

1.3 主要药物 盐酸乙胺丁醇片购自沈阳红旗制药有限公司 (国药准字H21022349)，腺嘌呤购自国药集团化学试剂有限公司。小春花浸膏，浓度为1g生药/ml，福建省立医院制剂室提供。

1.4 检测用试剂 尿素氮 (BUN)试剂盒、肌肝 (cr)试剂盒、尿酸 (UA)试剂盒，南京建成生物工程研究所。

1.5 模型建立方法 将50只小鼠随机分成5组，每组10只，设立给药组4个剂量组和空白对照组，称重分别给予不同剂量的腺嘌呤和乙胺丁醇 (A组，腺嘌呤25mg/kg，乙胺丁醇 50mg/kg;B组，腺嘌呤35mg/kg，乙胺丁醇75mg/kg;C组，腺嘌呤50mg/kg，乙胺丁醇100mg/kg;D组，腺嘌呤100mg/kg，乙胺丁醇200mg/kg)。药物用蒸馏水配制成混悬液，按0.1ml/10g体重，分别按上述剂量灌胃，连续15天。空白组给予同体积的生理盐水。实验第16天，各组小鼠断头取血，分离血清按试剂盒说明测定尿素氮、肌及尿酸的含量。

1.6 药物干预 造模方法同上，另取40只小鼠，分为小春花组高低剂量 (3g、1.5g生药·kg－1体重)，模型组，正常组，每组10只动物，除正常组外按前述筛选的模型方法造模，于实验第7天给予不同浓度的小春花浸膏，实验第16天小鼠断头处死，取血，分离血清按试剂盒说明测定测定尿素氮、肌及尿酸的含量。

1.7 统计学分析 采用SPSS10.0分析软件，进行 t检验，分析各组的差异。

2 实验结果

2.1 高尿酸血症动物模型的建立

A、B组老鼠造模后，血清中BUN和CREA和正常组比较，显著上升 (p＜0.01)，而UA没有差异。C、D组的UA和正常组相比有显著的升高 (p＜0.01)，同时D组的BUN、CREA的浓度显著上升，提示肾脏损伤，而C组的BUN、CREA与正常组相比没有差异。故选用C组的剂量及腺嘌呤50mg/kg，乙胺丁醇100mg/kg作为HU的造模方法。

2.2 小春花的干预作用

选用腺嘌呤50mg/kg，乙胺丁醇100mg/kg这个剂量造模后，实验第7日给予不同剂量的小春花，实验第16天取血测定BUN、CRE、UA的变化。结果表明，小春花能有效的降低血中UA的含量 (P＜0.01)，保护小鼠的肾功能 (P＜0.01)。结果见表2.

表1 各组血BUN、CRE、UA值比较

表2 小春花对高尿酸血症小鼠的干预作用

3 讨论

高尿酸血症是由血UA浓度过高引起的代谢性疾病。成人不论男女，UA的正常值为90－420umol/L(尿酸酶－过氧化物偶联法)，超过此范围即为高尿酸血症。无症状性高尿酸血症是痛风发生的前期状态。由于UA的水溶性较差，血UA过高会形成结晶，沉积于关节、肾脏等处，引起关节炎和肾脏损害。并且与高血压、高脂血症、冠心病、脑卒中、糖尿病的发生密切相关［15－18］。

近年来，由于人们饮食习惯的改变，痛风和HU的发病率，在全世界范围内都呈上升趋势，同时其导致的心脑血管并发症，亦严重影响人们的生活质量。

动物模型是研究疾病发病机理，寻找新型治疗药物的重要工具。开展关于HU和痛风的研究，也应首先建立起可靠的HU动物模型。现有的建模方法，主要从以下几个方面达到升高血尿酸的目的:(1)抑制尿酸酶的活性;(2)抑制肾脏排泄尿酸;(3)补充尿酸的前体物质;(4)直接补充外源性尿酸。

最理想的动物模型是尿酸酶基因敲除小鼠，这种方法是通过破坏胚胎干细胞的尿酸酶基因，由于尿酸酶基因完全缺失，此动物模型的血UA浓度可升高十倍引起HU。目前两种方法可以减弱或消除尿酸酶的作用。但是这种模型方法技术较为复杂，成本也较高，这限制了它的广泛使用。且此种小鼠一般不能成活4周以上［19－21］。

另外常见的方法是将尿酸酶抑制剂乙胺丁醇与腺嘌呤合用于大鼠的高尿酸血症模型。但这种模型容易导致大鼠出现肾小球肥大、和硬化、甚至纤维化，与临床实际有出入［15，22］。

本实验采用腺嘌呤 (Adenine)、乙胺丁醇灌喂小鼠诱导高尿酸血症动物模型，根据参考文献［28、29］造模方法及预实验结果，配置四个浓度的腺嘌呤跟乙胺丁醇，分别为25mg/kg(50mg/mg)、 35mg/kg(75mg/kg)、 50mg/kg(100mg/kg)、100mg/kg(200mg/kg)，灌胃造模。根据实验结果选取腺嘌呤50mg/kg，乙胺丁醇100mg/kg这个剂量造模实验结果及小春花的干预实验结果表明小鼠UA升高明显，且肾功能的损害较小，模型可靠稳定。

小春花是福建民间常用的草药，具有清热解毒的作用。临床上可以用于高尿酸血症及痛风的治疗。实验结果表明，小春花能降低模型小鼠的血尿酸值。但其作用机制如何，有待于进一步的研究。

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