IVF失败者ICSI效果观察

刘海萍，王海玉，郝天羽，王建业，李云飞

(济南军区总医院，济南250031)

在实施体外受精—胚胎移植(IVF-ET)治疗的周期中有5% ～15%［1～5］受精失败，以往常于 IVF后18～20 h行卵胞质内单精子注射(ICSI)治疗，但临床效果并不理想［6，7］。2007年 9月 ～2011年 5月，我们在常规IVF后8 h对65例受精失败者行ICSI治疗，效果满意。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 在我院生殖医学中心行IVF治疗的原发性不孕患者831例，共获卵10 893枚;其中65例642枚MⅡ期卵子短时授精后8 h未观察到第二极体。65例受精失败患者年龄(32.56±1.81)岁，不孕时间(4.1±2.3)年;不育原因为输卵管因素28例、盆腔粘连4例、子宫内膜异位症3例，原因不明30例。

1.2 IVF、ICSI方法 超促排卵采用常规长方案，当至少有3个卵泡直径达16 mm时注射10 000 U HCG，注射后36～38 h在超声引导下经阴道取卵。取卵后培养2～4 h授精，精液采用密度梯度离心+上游法处理，精子浓度为5～10万条/卵，精卵共育4～8 h。IVF后4 h拆卵观察第二极体，对未出现第二极体的卵子于8 h后再次观察，若未出现原核或第二极体则判为完全受精失败，立即对其行ICSI补救，操作过程同常规 ICSI［8］。ICSI后 16 ～18 h 确认受精情况，继续培养至第3天移植。选择优质胚胎(Ⅰ、Ⅱ级胚胎)2～3枚进行移植，移植后35 d后超声观察到妊娠囊及胎心搏动的判为临床妊娠。

2 结果

本组ICSI后16 h观察到541枚卵子出现双原核及第二极体，判断为正常受精，正常受精率为84.3%;12枚卵出现3个原核为异常受精，89枚卵未受精。第2天受精卵均出现卵裂，第3天观察到289个6～8个细胞的优质胚胎，优质胚胎率为53.4%。移植补救ICSI胚胎152个，平均移植2.34个。移植后50 d行B超检查发现临床妊娠29例，临床妊娠率44.6%。

3 讨论

导致受精完全失败的根本原因是精卵不能识别或识别失败，IVF后18 h行挽救性治疗，虽可受精，但受精率、优质胚胎率、5个细胞以上胚胎率均低。其原因可能为卵龄延长及暴露于培养液中的卵母细胞内遗传物质及染色体发生异常的几率增加［9］，胚胎发育能力低，而且胚胎发育状况与子宫内膜不同步，所以妊娠率并不理想。我们以往采用授精后18 h对受精失败的卵子进行ICSI补救，23例患者中仅2例妊娠。因此，探索早期卵子受精的判断和最适宜的补救ICSI时间有重要意义。

第二极体的排出是卵子受精的早期表现。Nagy等［10］报道，ICSI授精后 2、4、6 h 约有 23%、68%、90%的受精卵出现第二极体，而46.37%的卵于授精后8 h出现原核［11］。我们发现，授精后4、8 h通过观察第二极体的出现判断受精的符合率分别为86.0%和96.8%，所以本研究对8 h未观察到第二极体或原核的卵子实施 ICSI，可以最大限度减少误穿，从而避免多精受精的可能。本研究对642枚未出现第二极体的MⅡ期卵子立即行ICSI，ICSI后16 h 541枚卵子出现双原核及第二极体，判断为正常受精，正常受精率为84.3%，优质胚胎率53.4%，临床妊娠率44.6%。这表明IVF后8 h对失败者实施ICSI补救，可避免卵子老化，其受精率、优质胚胎率、受精和胚胎的发育模式更接近于常规ICSI，且可供冷冻胚胎数多，累积妊娠率也增加，而异常受精率并未增加。值得注意的是，IVF授精8 h后4% ～5%的卵细胞有可能出现延迟受精，ICSI对这部分卵子会造成多精受精。其次，当第一极体出现分裂或碎片时很难与第二极体区别，易造成误判，实施ICSI后亦可造成多精受精。本结果显示，有12枚受精卵出现3个原核，所占比例较小。对于极体分裂难于区分是否是第二极体时，通过8 h观察早期原核的出现可显著减少误判。因此，我们认为IVF后8 h对未出现原核或未排出第二极体的卵子及时实施ICSI，可成为预防受精失败的有效方法。

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