主动免疫治疗习惯性流产的疗效研究*

李 睿 王宗军 张业霞 李泽武

(菏泽医学专科学校病原学教研室，山东 菏泽 274030)

习惯性流产，尤其原因不明的流产，目前在国内外仍属产科的难题之一。目前，国内治疗此类患者仍大部分以常规安胎保胎治疗为主，或中药安胎治疗，但疗效不一[1]。近年来，国内部分大医院开始探讨用免疫疗法治疗不明原因的习惯性流产，但鉴于免疫治疗不明原因的习惯性流产的机理仍不太清楚，总结病例较少，故免疫疗法治疗不明原因的习惯性流产仍在探讨之中。我们自2000年以来, 对门诊习惯性流产的病例建立常规病因筛查, 对原因不明的原发性习惯性流产病例进行主动免疫治疗，取得较好疗效。现报告如下。

1 临床资料

1.1研究对象 为我院门诊2000年10月至2009年9月连续流产3次或3次以上，年龄在22～39岁之间，平均年龄25.15岁，经门诊诊断为习惯性流产的102例患者，经筛查后，有59例未找出病因, 诊为原因不明习惯性流产, 她们的配偶身体健康，全血常规正常，甲、乙、丙肝炎病毒及 HIV 病毒检测阴性，精液常规分析在正常范围内，性生活正常，夫妇双方染色体核型分析未发现异常。排除遗传、解剖、感染、内分泌及自身免疫等引起的习惯性流产。

1.2方法

1.2.1一般情况 详细询问患者现病史、既往史、月经史、生育史、遗传史等情况。

1.2.2妇科常规检查 优生四项(TORCH)；不孕习惯流产抗体系列：抗精子抗体(AS-Ab)、抗子宫内膜抗体(EM-Ab)、抗卵巢抗体(AO-Ab)、抗心磷脂抗体(ACA-Ab)、抗HCG抗体(HCG-Ab)、抗透明带抗体等；激素系列：雌二醇(E2)、孕酮(P)、卵泡刺激素(FSH )、黄体生成素(LH)、催乳素(PRL)、睾酮(T)、甲状腺功能(T3、T4)；子宫、输卵管造影；妇科盆腔B超，妇科常规检查及阴道分泌物涂片。

1.2.3方法 夫妻双方对主动免疫治疗有充分的了解, 并乐意接受治疗。抽取其丈夫肘静脉血30 ml加入适量肝素钠抗凝，取淋巴细胞分离液(美国 CE2 DARLANE)置于灭菌离心管内，将血液沿管壁徐徐加入离心管，使血液重叠于淋巴细胞分离液上(分离液与血液体积比例为1︰1)，两者之间有一明显界面，用水平离心机以5000～ 6000 r /min离心15 min。离心后管内容物分为三层：上层为血浆，中间层为分离液，底层为红细胞和多形白细胞，在上、中层液体界面可见乳白色混浊的单个核细胞层，用无菌吸管轻轻插到白膜层，沿试管壁周缘吸取该层单个核细胞(PBMC)，移入另一试管，用 RPMI1640培养液洗涤三遍，2500 r /min离心5 min。将淋巴细胞分离液分离的淋巴细胞移入尼龙毛柱 , 37℃下孵育 30 min后，洗去T淋巴细胞，然后挤压洗下B淋巴细胞，用无菌生理盐水离心洗涤3次，计细胞数，调整 B淋巴细胞数达( 2 ～3)×107个 /ml，最后用生理盐水恢复1 ml。于妻子前臂掌侧皮内注射5个皮丘, 每个皮丘0.2 ml，每次间隔1周，共6次，即孕前注射3次，注射后用比林氏自然排卵预测法指导患者尽早妊娠，治疗后半年以上未妊娠者，再给予4次免疫即可让其怀孕，发现怀孕后再注射3次，间隔同上。对孕期治疗3次后仍有先兆流产症状的患者，再增强治疗2～4次。

2 结 果

接受淋巴细胞主动免疫治疗的患者59例都妊娠，其中9例早中期再次发生流产，妊娠32周以上者50例，成功率为85%。随访至今，最大的为9岁，最小的妊娠33周，出生后的婴幼儿均发育正常。

3 讨 论

生殖免疫学认为不明原因习惯性流产绝大多数与免疫因素有关，有研究认为可能是由于胚胎抗原的免疫低反应性所致，即患者由于对胚胎同种异体抗原无法产生足够的封闭抗体而使胚胎得不到免疫防护而流产[2]；或是夫妻双方HLA不相容性过弱，不能产生胎儿保护性抗体而使胎儿流产所致[3]；还有研究认为可能与CD8 细胞数量下降，CD4/ CD8 比率上升有关[4-5]。从现代生殖免疫观点看，习惯性流产的病因可能由母体对胚胎抗原免疫反应不足或母体免疫系统不能识别胚胎抗原而导致流产。基于该理论国内外学者采用丈夫或无关个体白细胞、淋巴细胞等对母体进行免疫治疗，目的是诱导母体对胚胎抗原或相关同种异体抗原产生免疫反应性。

维持正常妊娠最重要的是伴随妊娠而产生的特异性免疫抑制因子，包括体液因子(封闭抗体)和细胞因子(抑制免疫细胞)，以及非特异性抑制因子，这些因子作用的结果，使母体的细胞免疫功能降低，体液免疫功能增强，胎儿胎盘抗原性减弱，妊娠顺利进行。封闭抗体存在于妊娠妇女血清中，可通过与胎儿胎盘滋养叶抗原结合或母体淋巴细胞结合而防止胚胎父系抗原被母体免疫系统识别和杀伤。封闭抗体的缺乏是习惯性流产的重要原因之一[6]。如母胎滋养层细胞膜抗原一致 ,胎儿则不能激发母体产生封闭抗体，此时可用与母体滋养层细胞膜抗原不一致的淋巴细胞(如丈夫或第3者淋巴细胞)给流产妇女行皮下注射，促使其产生封闭抗体，此乃原发性习惯性流产的治疗依据。

原因不明的习惯性流产妇女血清中缺乏该封闭抗体，但通过注射丈夫的PBMC可刺激机体产生封闭抗体[2,7]。本研究成功50例中，其中40 例治疗前HLA-ABC抗体均为阴性，而治疗后HLA-ABC抗体均为阳性，说明治疗有效。

不明原因习惯性流产的发病机制及病因尚不完全清楚, 目前认为绝大多数与免疫因素有关，但由于检测一些免疫项目(HLA、CD4、CD8等)的设备昂贵、技术要求高，故给诊断带来困难，从而限制了其治疗的开展[5]。我们用PBMC皮内注射治疗的59例不明原因习惯性流产病人中，有效率达 85%，方法安全可靠，对孕妇及胎儿未发现任何负反应。

用丈夫淋巴细胞主动免疫法治疗原发性习惯性流产，其免疫反应性强，发生快、持续时间短，是一种简便可行的方法，目前未发生明显的副反应。本研究用丈夫的血液分离PBMC进行治疗，较无关个体免疫原来说，可减少潜在的血源性感染的危险性[2]。此方法经济方便，病人易接受，具有较可靠的临床效果及应用价值。

[1] 李景林.中华医学检验全书[M].北京:人民卫生出版社,1996:659.

[2] 林其德,赵爱民,周涵春,等. 原发性习惯性流产的主动免疫治疗[J].中华妇产科杂志, 1996, 31 (6) : 351-356.

[3] 毕爱华,龚非力.医学免疫学[M].北京:人民军医出版社, 1995:160-162.

[4] 赵爱民,林其德,周涵春,等.原因不明习惯性流产患者外周血T淋巴细胞亚群的变化[J].中华妇产科杂志,1994, 29 (4) : 227-229.

[5] 李弘,王怀秀,王静,等. 淋巴细胞注射治疗免疫因素引起的习惯性流产[J].山西医药杂志,2003,32(4): 308-309.

[6] 余江,张进,何晓宇.封闭抗体在反复自然流产中的作用[J].中华妇产科杂志,2000,4(35):248-249.

[7] 严坤,刘敏,廖丹,等.淋巴细胞免疫治疗习惯性流产55例疗效研究[J].海南医学,2008,19(1): 48-49.