毛细管柱顶空气相色谱法测定培美曲赛二钠中有机溶剂残留量

刘津爱，朱 梅

(中国医药研究开发中心有限公司，北京 102206)

培美曲赛二钠商品名力比泰(Alimta)，是礼来公司开发的一种抗叶酸代谢的抗肿瘤药物，通过干扰细胞复制过程中叶酸依赖性代谢过程而发挥抗肿瘤作用，在临床上联合顺铂用于不可切除的恶性胸膜间皮瘤的一线治疗，单药用于非小细胞肺癌二线治疗[1]，临床效果确切，备受国内外关注。因其生产工艺要用到多种溶剂(正己烷、丙酮、四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、乙腈、N，N－二甲基甲酰胺)，为有效控制所用的溶剂残留量以及适应生产快速检测的要求，笔者建立了测定上述残留溶剂的毛细管柱顶空气相色谱法，现报道如下。

1 仪器与试药

ShimadzugC－14A气相色谱仪(日本岛津公司)；DANI HSS86.5顶空进样器(意大利DANI公司)；氢火焰检测器；载气为高纯氮气；TL 9 900色谱工作站；培美曲赛二钠样品(批号为20040809，20040810，20040811，由内蒙古科诺医药开发有限公司提供；正己烷、丙酮、四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇均为分析纯(北京化工厂)，乙腈(Feisher)、N，N－二甲基甲酰胺(Dima Technology Inc.)、二甲基亚砜(天津市津科精细化工研究所)均为色谱纯，水为美国Mili－Q系统纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为交联聚乙二醇ECTM－Wax毛细管色谱柱(30 m× 0.53mm×1.20μm，Alltech Econo－CapTM)；采取程序升温方式，起始柱温为40℃保持10min，然后以每分钟10℃的速率升至120℃，保持2min；瓶温85℃，加热时间为40 min，进样口温度180℃，FID检测器温度为180℃；分流比2∶1；柱流量为1.0mL/min；载气为高纯氮气。各溶剂的色谱图见图1。

图1 气相色谱图

2.2 系统适用性试验

在上述气相色谱条件下，正己烷、丙酮、四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、乙腈、N，N－二甲基甲酰胺的保留时间分别为1.467，2.883，3.350，4.000，4.267，4.883，5.283，8.367，16.317 min；空白溶剂水不出峰，空白溶剂二甲基亚砜的保留时间为18.103 min，对正己烷、丙酮、四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、乙腈、N，N－二甲基甲酰胺的含量测定没有影响；分离度及拖尾因子符合中国药典的要求，其中各相邻溶剂峰的分离度符合要求。结果见表1。理论板数均大于5 000。

2.3 溶液制备

精密称取正己烷29mg、丙酮500mg、四氢呋喃500mg、乙酸乙酯500mg，甲醇300mg、二氯甲烷60mg、乙醇500mg、乙腈41mg、N，N－二甲基甲酰胺88mg，置同一100mL容量瓶中，加10%二甲基亚砜(DMSO)溶液稀释至刻度，摇匀，制成对照品贮备液。精密量取对照品贮备液1 mL，置10 mL容量瓶中，加10%二甲基亚砜(DMSO)至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称取培美曲赛二钠0.2g，置顶空瓶中，精密加10%二甲基亚砜(DMSO)溶液2 mL使完全溶解，即得供试品溶液，加盖，轧封。

2.4 方法学考察

线性关系考察：精密量取对照贮备液 0.5，1.5，2.5，5.0，10.0 mL，分别置50mL容量瓶中，加10%二甲基亚砜溶液稀释至刻度，摇匀。分别精密量取2mL，置顶空瓶中，加盖，轧封，启动进样程序进样，取每个浓度的3次平均峰面积(Y)对质量浓度(X，μg/mL)进行线性回归，结果见表1。

表1 方法学考察结果

精密度试验：精密量取线性关系考察项下2.5mL组溶液2mL 5份，分别置顶空瓶中，轧盖，进行测定。结果见表1，表明方法精密度良好。

加样回收试验：精密称取已知各有机溶剂残留量的培美曲塞二钠样品9份(各约0.2g)，分别置顶空瓶中，各精密加入3个不同浓度的对照品溶液2mL，各待测溶剂的质量浓度分别为对照品溶液各溶剂质量浓度的80%，100%，120%后轧盖。在上述色谱条件下测定，测得各溶剂的回收率结果见表1。

最低检出浓度确定：取对照液逐步稀释，按 S/N(信噪比)约为3时，9种溶剂的最低检出浓度见表1。

2.5 定量下限的精密度和加样回收试验

以信噪比为10∶1时相应的质量浓度确定定量限，各溶剂的定量下限见表2。

表2 定量下限的精密度考察和加样加收试验结果(n=9)

精密称取各溶剂适量，使溶液中正己烷、丙酮、四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、乙腈、N，N－二甲基甲酰胺的质量浓度分别为其定量下限。精密量取2 mL分别置顶空瓶中，轧盖，进行测定。结果精密度的 RSD见表2。

表3 样品中残留溶剂的测定结果(%，n=3)

精密称取已知各有机溶剂残留量的样品9份(各约0.2g)，分别置顶空瓶中，各精密加入定量下限精密度考察用溶液2mL，轧盖。在该色谱条件下测定，测得各溶剂的回收率结果见表2。

2.6 样品含量测定

在该色谱条件下，用外标法对3个批号的培美曲塞二钠样品进行有机残留量的测定。结果见表3。

3 讨论

根据本品的溶解性质，分别选择了二甲基亚砜、N，N－二甲基甲酰胺、水作为溶剂溶解样品，经试验证明，本品在二甲基亚砜、N，N－二甲基甲酰胺中的溶解性不好，在水中的溶解度很好，但待测溶剂正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯在水中的溶解比较差，故选择水－二甲基亚砜混合溶液9∶1作为稀释对照品溶液及供试品溶液的溶剂。试验证明，本品在该溶剂中的溶解度能达到100g/L，且各待测溶剂也溶解良好，二甲基亚砜对各溶剂的测定也无干扰。

参照2005年版《中国药典(二部)》附录ⅧP残留溶剂测定法[2]以及人用药品注册技术要求国际协调会(ICH)的对各溶剂的不同限度要求，选择不同的质量浓度范围对线性关系进行考察，结果各溶剂质量浓度与峰面积的呈现良好的线性关系。

曾选择不同极性的毛细柱，如ECTM－Wax，DM－624，DB－5等不同极性的色谱柱，经试验证明，ECTM－Wax柱能使上述各溶剂达到基线分离，故最终选择ECTM－Wax柱。

经试验证明，本品待测的9种有机溶剂除N，N－二甲基甲酰胺以外均能在柱温为40℃时出峰，出峰时间在10min以内，并能达到基线分离，但N，N－二甲基甲酰胺需要较高的柱温，故选择梯度升温，在温度40℃保留10min后，以10℃/min的速度升至120℃。

对属于卤素的溶剂，一般采用电子捕获检测器(ECD)检测，以便获得更高的相应值。由于二氯甲烷的限度为600×10－6，FID的灵敏度也可以满足测定要求。另外从生产控制上来说，同时测定待检溶剂，方法简便、省时。因此，在选择在一个条件下完成了上述测定。

根据2005年版《中国药典(二部)》附录ⅧP残留溶剂测定法以及ICH的规定，本品中的待测溶剂丙酮、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醇均为3类溶剂，正己烷、甲醇、二氯甲烷、乙腈、N，N－二甲基甲酰胺为二类溶剂，分别对3批样品进行了测定。结果在3批样品中仅检出微量的丙酮和乙醇，其他溶剂均未检出，说明本品的合成工艺良好地革除了上述的有害溶剂，合成工艺较合理。

[1]Wang L，Yao YB，Wang Z.Pemetrexed disodium：a multiple receptor folic acid inhibitor[J].World clinical drugs，2007，28(5)：293－298.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京：化学工业出版社，2005：附录54－57.