脐带血替代外周血用于新生儿血型和直接抗球蛋白试验的效果观察

黎海澜,焦 伟,莫柱宁,阳子骥

(广西壮族自治区人民医院,南宁 530021）

临床工作中,从新生儿身上采血比较困难,有时难以准确判定血型,使新生儿 A、B、O血型、Rh(D)血型鉴定和直接抗球蛋白试验检测无法常规进行。为适应输血医学发展,提高新生儿血型血清学检测的准确性和临床输血安全性,很有必要寻找一种安全、有效的措施,解决新生儿血型和血清学检测问题。作者尝试了以新生儿脐带血替代外周血用微柱凝胶技术(MGP)进行A、B、O血型、Rh(D)血型鉴定及直接抗球蛋白试验的检测探索。

1 资料与方法

1.1 一般资料 3 238例新生儿脐血均系2008年11月至2010年2月在本院产科足月顺产的新生儿,其中男1 714例,女1 524例。脐血采集的方法:新生儿娩出断脐带后,选择靠近儿端的脐静脉较充盈处,常规局部消毒后,用一次性5 m L注射器穿刺抽血2m L,用EDTA抗凝并将样本标记好;另外,采集其中336例新生儿外周静脉血2 m L,用EDTA抗凝,做好对照样本标记备用。

1.2 实验仪器与试剂 DiaM ed单克隆新生儿凝胶血型卡(简称新生儿卡,Diaclon1 ABO/Rh for New borns)、DiaMed自动加样仪、达亚美 2号稀释液(ID-Diluent 2)、DiaMed微柱凝胶卡专用离心机等,均由瑞士DiaMed公司提供。试管法所用单克隆抗A和抗B标准血清、抗H、抗人球蛋白试剂及抗D等,由上海血液生物医药有限责任公司提供。A、B、O试剂红细胞为本实验室自制。其他仪器KA-2200型离心机(日本久保田研究所)等。

1.3 方法

1.3.1 微柱凝胶技术 用微柱凝胶技术(DiaM ed新生儿卡)分别对新生儿脐带血样和外周血样进行 A、B、O血型、Rh(D)血型鉴定及直接抗球蛋白试验。严格按照产品操作说明书操作。由自动加样仪自动加样,仪器加样完毕,置卡于专用定速离心机内离心,离心速度和时间均按厂商推荐标准执行,最后通过系统的自动判读装置判读、保存并打印结果。

1.3.2 试管法 用试管法分别对新生儿脐带血样和外周血样进行A、B、O血型、Rh(D)血型鉴定及直接抗球蛋白试验。按《免疫血液学》中的具体步骤操作和判读结果[1]。

1.3.3 统计学处理 将检测所得的结果建立数据库,用SPSS13.0统计软件进行统计分析。

2 结 果

2.1 血型鉴定结果 采用传统试管法和微柱凝胶技术对3 238例脐血标本进行 A、B、O血型及 Rh(D)血型鉴定,两法检测结果一致。其中 O型1 334例(41.20%),B型 889例(27.46%),A型 828例(25.57%),AB型187例(5.78%);Rh(D)阳性3 226例(99.63%),阴性11例(0.34%),表位不完全型D 1例(DⅥ,为白种人)。

2.2 新生儿出生后同时检测脐带血和静脉血 对336份新生儿外周静脉血进行A、B、O血型和 Rh(D)血型鉴定发现,与其脐带血检测结果完全吻合。其中A型139例,B型140例,O型38例,AB型19例;Rh(D)阳性336例。2.3 直接抗球蛋白试验 应用微柱凝胶技术检出阳性者141例(4.35%),用试管法检出阳性者 117例(3.61%)。经χ2检验,χ2=2.328 4,P=0.127 0,两种检测方法结果差异无统计学意义(P＞0.05)。用试管法只出现镜下可见至±凝集的样本,用DiaMed新生儿卡检测则出现±至2+的凝集。用DiaMed新生儿卡检测直接抗球蛋白试验阴性的样本,采用试管法全部阴性。采用新生儿脐血进行直接抗球蛋白试验的结果,与用同一个体外周静脉血样本进行检测的结果一致。

2.4 对141例直接抗球蛋白试验阳性的标本进一步调查结果2例新生儿直接抗球蛋白试验强阳性(4+),通过血型血清学检测,均被证实其红细胞被来自母体的抗D所致敏;在76例母亲为O型新生儿为A型者中,新生儿红细胞放散液或红细胞放散液和血清中均检出IgG抗A(抗AB);在63例母亲为O型新生儿为B型者中,新生儿红细胞放散液或红细胞放散液和血清中均有而IgG抗B(抗AB)。

3 讨 论

3.1 临床上新生儿采血样困难问题一直困扰着广大医务工作者与家属。采集新生儿股静脉血难度大,穿刺成功率低,对新生婴儿有伤害(抽取新生儿股静脉血可能损伤股神经),家属也不愿意配合等。而脐带血容易采集,没有技术难度。脐血代替股静脉血作为标本的可靠性研究认为,采用脐带血与股静脉血的诊断价值相仿,为临床可行的方法。本研究发现采用容易获得的脐带血进行A、B、O血型、Rh(D)血型鉴定及直接抗球蛋白试验与用新生儿外周静脉血检测结果完全一致。用脐带血替代新生儿静脉血进行 A、B、O血型、Rh(D)血型鉴定及直接抗球蛋白试验,结果准确可靠,且避免了对新生儿的侵袭性操作和对新生儿的伤害,也大大减少了护理工作量,避免了不必要的医患矛盾,值得推广[2]。

3.2 脐带血代替新生儿外周静脉血进行血型血清学检测需要特别注意的地方:采取脐带血的关键问题就是操作中避免污染。胎盘娩出后,不要挤压,先抽血;抽血前先将脐带牵直,清洗干净、严格消毒穿刺部位,不要移动脐带,不要让针尖刺破穿出脐带的胶质层;尽量保证一次抽够2 m L,避免反复穿刺。采集脐血位置不准确,或脐静脉穿刺失误造成脐血中混入少量母亲血液,或采样错误,会造成结果不准确。特别是胎儿未娩出前母血已污染产道者,如会阴侧切术、前置胎盘流血者等,最好由助手采脐带血。进行 A、B、O血型、Rh(D)血型鉴定和直接抗球蛋白试验时,用DiaMed新生儿卡若出现双相或试管法出现混合凝集外观者,要警惕有异型(母血)细胞混入。输血科工作人员对送检可疑的新生儿脐血标本要详细询问采集部位和穿刺情况,必要时采集外周静脉血重新检测。要正确鉴定新生儿血型,除严格执行操作规程外,还应注意新生儿血液的特点(如华通胶胨的干扰)、先天性疾病、感染(细菌污染产生的类B抗原)等情况,结合父母血型加以分析,必要时重新鉴定父母的血型,以辅助判断孩子的血型是否符合遗传规律,发现异常及时复查[3-4]。必要时用分子生物学作进一步鉴定不失为一种有效手段[5]。本组对336例新生儿出生后同时鉴定脐带血和静脉血A、B、O血型、Rh(D)血型及进行直接抗球蛋白试验,结果完全一致。因此,只要注意避免母血的污染,用脐血替代外周血用于新生儿血型和直接抗球蛋白试验是可行的。

3.3 本研究通过试验对比发现,与传统试管法相比,以微柱凝胶技术进行直接抗球蛋白试验时,灵敏度有所提高,但2种检测方法结果比较差异无统计学意义(P＞0.05)。在A、B、O血型系统中,新生儿溶血病(hemoly tic disease of new born,HDN)的直接抗球蛋白试验反应常常较弱甚至无法检出。因此,其结果只能起参考作用。而Rh(D)血型系统中,HDN的直接抗球蛋白试验反应较强,阳性率高。本组对直接抗球蛋白试验阳性的标本进一步调查结果发现,141例患儿均被证实其红细胞被来自母体的IgG抗体所致敏,这提示对新生儿直接抗球蛋白试验阳性者应警惕异常或危险情况的存在,很有必要进行HDN的排查。

3.4 微柱凝胶技术已被发达国家常规应用于血型鉴定、不规则抗体检测、交叉配血等检测项目[6-8]。本研究显示,与传统试管法相比,MGP取样量准确,自动孵育和离心后直接判断结果,人为干扰因素少。微柱凝胶技术在鉴定脐血 A、B、O、Rh(D)血型和直接抗球蛋白试验时结果准确可靠,而且具有操作步骤化、程序化、自动化、标准化、安全性高等特点,优于试管法。与文献报道一致[9]。

[1] 刘达庄.免疫血液学[M].上海:上海科学技术出版社,2002:128-225.

[2] 焦伟,黎海澜.DiaM ed单克隆凝胶血型卡在脐血血型血清学中的应用研究[J].中国临床新医学,2009,29(9):908-910.

[3] 马印图,靳智春,高军.新生儿脐血血型鉴定误差原因分析[J].临床误诊误治,2002,15(5):381-382.

[4] 周湘静,陈碧乐,谢作听,等.37例血浆因素引起正反定型不符原因分析[J].重庆医学,2006,35(5):452-454.

[5] 翁彬,王雷萍,赵祥胜.用分子生物学技术鉴定新生儿脐血ABO疑难血型[J].现代检验医学杂志,2005,15(5):35-36.

[6] Leitch K,Forrest A,M itchell R.A p relim inary trial of the Gel test for blood group serology[J].Br J Biomed Sci,1993,50:64-69.

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[9] 罗梅,陈方祥,何 静,等.酶试验和微柱凝胶法在新生儿溶血病检测中的效果比较[J].重庆医学,2007,36(24):2486-2490.