经肝动脉应用链球菌制剂沙培林治疗兔VX2肝肿瘤的实验研究

刘锦召 李鹤平 张冰 杨建勇 黄癸卯

肝癌是临床上常见的恶性肿瘤，经肝动脉插管栓塞化疗(TACE)是不能手术切除肝癌的首选治疗方法[1-2]。常规TACE主要依靠化疗药物及栓塞达到治疗目的，但化疗药物的副作用较为明显。沙培林是A族链球菌的灭活冻干制剂，主要通过激活宿主细胞免疫功能，提高T细胞及NK细胞活性来达到治疗目的，是目前已知最强的生物反应调节剂之一[3]。本实验建立兔VX2肝肿瘤动物模型，通过肝动脉插管灌注沙培林进行治疗，现将结果报告如下：

1 材料与方法

1.1 动物模型及分组 新西兰大白兔肝VX2肿瘤模型共27只，雌雄不限，体重2.5-3.5kg，其中雄性17只，雌性10只，购自中山大学动物实验中心。数字法随机分为三组：对照组9只，肝动脉内灌注生理盐水5ml；常规化疗栓塞组（下文简称常规组）9只，肝动脉内灌注MMC（0.2mg/Kg）+适量超液化碘油；沙培林实验组（下文简称实验组）9只，肝动脉内灌注沙培林（0.25mg/Kg）+适量超液化碘油。

1.2 介入治疗方法 动物麻醉后开腹，分离暴露胃十二指肠动脉，应用1.5-3F微导管逆行插管至肝动脉行造影，依造影所见肿瘤动脉供血进行超选择性插管，行不同药物灌注栓塞。术后关腹。

1.3 疗效标准 ①一般情况: 分别于介入治疗前及介入治疗后2周称重1次，观察各组兔的体重变化及兔的精神状态、活动情况、进食量、饮水量等。②介入治疗后4周记录每组兔的死亡数目，并计算生存率=死亡兔个数/治疗后每组兔总数x100%。③介入治疗后3天抽取兔耳缘静脉血测定:血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)。④介入治疗后4周每组选择3只兔处死，观察:A、兔肝脏外观形态，包括肝脏大小、色泽质地、表面结节等，完整摘取肝脏并称重，计算肝重与体重之比(各组兔处死前称重)；B、兔肝脏HE染色的病理，于肝叶纵切面丰厚处取0.3～0.5cm厚度的肝组织，10%中性甲醛溶液固定24h，常规包埋、切片、染色及封片。光镜下观察，包括整个切片中细胞的异型性，核浆比例，细胞排列、变性、增生及坏死等情况。

1.4 统计方法 采用SPSS17.0统计软件对各组数据及其差异的显著性进行分析，P＜0.05被认为差异具有显著性意义。

2 结果

2.1 兔一般情况观察比较 治疗前后体重减轻0～0.5kg为轻度，0.5～1.0kg为中度，超过1.0kg为重度。三组治疗前后体重变化及治疗后生存率比较见表1。对照组兔体重下降明显，并出现精神萎靡、活动少、食量、进水量减少等情况，其余两组进食、饮水量及精神活动尚好。

表1 各组兔治疗后体重变化和生存率比较

2.2 各组兔治疗后肝功能比较 见表2。

表2 各组兔治疗后肝功能的比较

2.3 病理学改变 对照组兔肝脏明显肿大，可见大小不一的灰色结节，色暗；光镜下可见肿瘤细胞体积增大，核仁明显，胞浆少，核浆比失调，并可见病理性核分裂及瘤巨细胞，大量肿瘤细胞向肝组织浸润，并伴有。常规组、实验组兔肝脏外观肿瘤结节相对较小；光镜下均有不同程度的肿瘤细胞坏死；常规组、实验组正常肝组织内均可见点灶状出血及肝细胞变性、坏死，但常规组的肝细胞变性、坏死及出血均较实验组严重。

3 讨论

经导管动脉化疗栓塞（TACE）已被公认是不能手术切除肝癌的一种安全有效、可重复的首选治疗方法，它能引起肿瘤细胞不同程度坏死和细胞凋亡。但TACE治疗由于肝癌病灶的不同大小、数目、血管形态、肝功能状态、动静脉瘘情况、门静脉癌栓情况、病理类型、对治疗的反应等因素常常在治疗效果上有一定的限度。如何进一步提高TACE治疗肝癌的疗效，是目前肝癌介入治疗中所面临的最主要问题[4]。

肝癌的动物模型有许多种，无论是诱发性还是移植性的肝癌造模方法都己十分成熟。但在选用肝癌介入动物模型方面，我们采用了兔肝VX2肿瘤模型作为研究基础。在本实验中，共制备兔肝VX2肿瘤模型27只。

沙培林是一种生物反应调节剂，由溶血性链球菌Su株制备而来。链球菌制剂类抗癌剂(沙培林)是已知免疫调节剂中作用最强之一。链球菌制剂的抗肿瘤作用已被广泛证实并应用于各种恶性肿瘤的临床治疗。有研究证明沙培林与癌细胞接触，能直接破坏癌细胞的RNA过程，使癌细胞出现膨胀，空泡化崩溃坏死[5]。此外沙培林能启动体内的细胞免疫和体液免疫，能大量增加和激活淋巴细胞，使体内肿瘤坏死因子、干扰素、白细胞介素等水平显著提高，使肿瘤细胞变性坏死。同时又有效地改善了化疗药物造成的免疫功能低下状态。在本实验中，对照组兔体重下降明显，并出现精神萎靡、活动少、食量、进水量减少等情况，而实验组应用沙培林进行治疗，一般情况与常规化疗栓塞组类似，两组进食、饮水量及精神活动尚好，且均明显优于对照组；对照组、常规组和实验组介入治疗后4周的生存率分别为55.6%、66.7%以及77.8%，虽然没有统计学差异，但是实验组的生存率明显高于对照组，也高于常规组。

碘化油是常用的造影剂、末梢栓塞剂和药物的载体。由于正常肝组织和肝癌组织血供和微循环的差别，碘化油会选择性地在肝癌组织内沉积并长时间停留。将沙培林同碘化油混合使用，可以达到中断肿瘤血供，增加沙培林在肿瘤组织内的停留和作用时间，促进抗肿瘤效应。其抗肿瘤作用机制除直接作用于肿瘤细胞外，还参与嗜中性粒细胞、巨噬细胞、NK细胞、T淋巴细胞和细胞因子的激活[6]。在本研究中沙培林碘化油乳剂治疗兔肝VX2肿瘤，兔的一般情况和生存率，实验组均优于对照组。介入治疗一般会对肝功能造成一定的损害，本实验结果也证实了这一点，治疗后常规组和实验组的肝功能几项指标明显增高。但是实验组的以上各项指标明显优于常规组，并且有统计学意义，这表明沙培林作为免疫制剂，配合碘化油在治疗肝癌的过程中，对于正常的肝脏细胞的损伤较小。并且，病理检查表明，常规组、实验组兔肝脏外观肿瘤结节相对较小；镜下比较常规组、实验组正常肝组织内均可见点灶状出血及肝细胞变性、坏死，但常规组的肝细胞变性、坏死及出血均较实验组严重；这说明沙培林的疗效较好，但对肝脏正常组织结构的破坏相对较小。

总之，本研究表明经肝动脉灌注沙培林配合碘化油在抑制兔肝VX2肿瘤的生长方面具有明显的效果，并且对于在改善兔的一般情况、提高兔的生存率及保护肝功能等方面则显示了较好的疗效。

[1]Achenbach T，Seifert JK，Pitton MB，et al.Chemoembolization for primary liver cancer[J].Eur J Surg Oncol 2002，28:37-41

[2]Alsowmely AM，Hodgson HJ.Non-surgical treatment of hepatocellular carcinoma[J].Aliment Pharmacol Ther，2002，16:1-15

[3]Huang GT，Yang PM，Sheu JC，et al.Intratumor injection of OK-432 for the treatment of small hepatocellular carcimoma [J].Hepatogastroenterology，1990，37(5):452-456

[4]叶强，张大海，顾伟中，等。经肝动脉沙培林碘化油乳剂治疗原发性肝癌临床观察[J]，同济大学学报(医学版)，2001，10（5）33-36

[5]薛德文，刘素贞，宋金龙，等。沙培林联合抗癌药肝动脉灌注治疗中晚期肝癌的疗效分析[J]，肿瘤研究与临床，2004，16（5）：337-338

[6]董培德，侯明显，孙晓风。沙培林联合化疗药物介入治疗晚期肝癌临床观察[J]，中国肿瘤临床，2001，28(2)：151-152