高效液相色谱法测定生发素中米诺地尔含量

(第三军医大学西南医院药剂科，重庆 400038)

生发素是医院制剂，用于治疗脱发，效果显著。其主要成分米诺地尔对毛囊生长具有直接促进作用。笔者采用高效液相色谱法测定生发素中米诺地尔含量，旨在为控制该制剂质量提供可靠依据。

1 仪器与试药

Waters 810型液相色谱仪，包括Waters 510泵和Waters 2487型双波长紫外检测器;DU－650型紫外可见分光光度计(美国Beckman);KQ－400KDE型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司);Milli－QPlus型超纯水器(美国);pH计(DELTA 320);BP 221S型电子天平(德国赛多利斯)。米诺地尔对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100125－200404);生发素样品(西南医院药剂科自制，批号分别为080902，090108，090423);甲醇为色谱纯，磷酸氢二钾为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:北京迪马公司 C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:0.03mol/LK2HPO4溶液(pH=3.3)－甲醇(55∶45);流速:0.9mL/min;检测波长:287 nm;柱温:30 ℃;进样量:10 μL。

2.2 溶液配制

精密称取米诺地尔对照品10.8 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇适量，超声使之溶解后用甲醇定容，得质量浓度为0.108 g/L的对照品贮备液。精密量取生发素样品1 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇定容后摇匀，再精密吸取稀释液1 mL，用甲醇稀释至100 mL，即得供试品溶液。按生发素溶液处方比例配制不含米诺地尔的阴性对照品溶液，按供试品溶液配制方法处理，即得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:在上述色谱条件下，生发素样品溶液中米诺地尔与其他成分分离较好，阴性对照品溶液不干扰米诺地尔的测定。阴性对照品溶液、对照品溶液及供试品溶液的色谱见图1。

标准曲线绘制:精密量取米诺地尔对照品贮备液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4 mL，分别置 10 mL 容量瓶中，用甲醇定容，即得质量浓度分别为 2.16，4.32，6.48，8.64，10.80，12.96，15.12 μg/mL 的对照品溶液。吸取上述对照品溶液各 10 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图及米诺地尔的峰面积。以米诺地尔的质量浓度对峰面积进行回归，得回归方程 Y=973.036 9 X－14.286 3，r=0.999 96(n=7)。结果表明，米诺地尔质量浓度在2.16 ～15.12 μg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密量取0.108 g/L的米诺地尔贮备液，分别配成质量浓度为 8.64，10.80，12.96 μg/mL 的 3 种溶液，对各质量浓度溶液连续测定6次，以峰面积考察其精密度，RSD分别为 0.70% ，0.85% ，0.92% ，均小于 2%;上述 3种溶液，于 0，24，48，72，96 h 时分别进样，每个质量浓度连续测定3次，记录峰面积，以峰面积考察其日间精密度，RSD 分别为 0.79%，0.86%，0.96%，均小于 2%。

加样回收试验:取已知含量(含米诺地尔5 μg/mL)的样品6份，分别加质量浓度为10.8 μg/mL的米诺地尔对照品溶液适量，制成质量浓度分别为 4.32，5.40，6.48 μg/mL 的溶液各 2 份。按上述色谱条件进样，记录色谱图，测定峰面积，计算回收率。结果见表1。

图1 高效液相色谱图

检测限和定量限确定:精密称取干燥的米诺地尔对照品适量，配制成系列质量浓度的样品溶液。按信噪比 S/N=3，测得检测限为20.4 ng/mL;按信噪比 S/N=10，测得定量限为62.4 ng/mL。

2.4 样品含量测定

精密量取3批生发素溶液样品1 mL，用甲醇稀释1 000倍，分别取10 μL注入液相色谱仪，记录峰面积，带入回归方程计算米诺地尔含量，结果见表2。

表2 生发素样品含量测定结果

3 讨论

本试验用高效液相色谱法测定生发素中米诺地尔的含量，方法快速简便，灵敏度高。在预试验中，根据文献[1]先后以水－甲醇(30∶70)和(40∶60)为流动相，但都不能将米诺地尔与其他成分分离，以水－甲醇(55∶45)为流动相，虽能将米诺地尔与其他成分分离，但米诺地尔有严重拖尾。根据文献[2]将水换成KH2PO4缓冲液，米诺地尔与其他成分色谱峰分离不完全，将KH2PO4缓冲液换成K2HPO4缓冲液(pH=3.3)，由于pH的变化，米诺地尔以离子形式出峰，出峰时间提前，且能与其他成分较好分离，故采用文中的色谱条件。紫外扫描结果显示，米诺地尔在240 nm波长处有最强吸收，但方中水杨酸也在240 nm波长附近有很强的吸收，为了避免相互干扰，选287 nm为米诺地尔的检测波长。

[1]管继平，王国团，程立华.HPLC测定米诺地尔洗剂含量[J].中国医院药学杂志，2006，26(10):1 298.

[2]林惠强.HPLC法测定敏乐啶洗剂中敏乐啶含量[J].海峡药学，2008，20(2):44.