马来酸曲美布汀缓释片杂质3，4，5－三甲氧基苯甲酸的检测

(开开援生制药股份有限公司，河南 信阳 465200)

马来酸曲美布汀是一种治疗慢性胃炎引起的消化道疾病和肠易激综合征的药物，已经在许多国家使用多年，国内开开援生制药股份有限公司、天津田边制药等公司已有生产。马来酸曲美布汀原料和片剂已被收载于《日本药局方外医药品规格》中，3，4，5－三甲氧基苯甲酸是其主要降解产物[1－2]。控制3，4，5－三甲氧基苯甲酸含量，有利于保证缓释片的质量。

1 仪器与试药

SP8800型高效液相色谱仪(美国科学仪器公司);H.S6型电热恒温水浴锅(上海浦东荣丰科学仪器有限公司)。盐酸(开封市芳晶化学试剂有限公司);氢氧化钠(天津市德恩化学试剂有限公司);乙腈(色谱纯)，高氯酸(分析纯)，醋酸铵(分析纯)，戊烷磺酸钠(色谱纯);马来酸曲美布汀对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100580－200501);3，4，5－三甲氧基苯甲酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100617－200501);马来酸曲美布汀缓释片(开开援生制药股份有限公司，批号为08080117，08080217，08080317)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Century SIL C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:高氯酸缓冲液(取高氯酸0.85 mL，加水至1 000 mL，用0.1%醋酸胺溶液约 1 000 mL调 pH 至 3.75±0.05，取此溶液 1 000 mL，加戊烷磺酸钠1.54 g，振摇使溶解)－乙腈(65∶35);检测波长:267 nm;进样量:10 μL。

2.2 溶液制备

取马来酸曲美布汀缓释片10片，研细，精密称取细粉适量(约相当于马来酸曲美布汀0.1 g)，置100 mL量瓶中，加流动相适量，振摇使马来酸曲美布汀溶解，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液;精密称取3，4，5－三甲氧基苯甲酸对照品适量，用流动相溶解并稀释成约为1.0 g/L的溶液，作为杂质对照品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性试验

按处方量称取辅料适量，用流动相稀释(相当于含有1 mg/mL的马来酸曲美布汀)，超声处理15 min，离心，取上清液10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。结果辅料对3，4，5－三甲氧基苯甲酸无干扰。

2.3.2 破坏性试验

酸降解试验:取马来酸曲美布汀对照品50.3 mg，置50 mL容量瓶中，用1 mol/L盐酸溶液20 mL溶解，置80℃水浴30 min，冷却，用流动相稀释至刻度，摇匀。色谱见图1 A。

碱降解试验:取马来酸曲美布汀对照品50.2 mg，置50 mL容量瓶中，用5 mL乙醇使溶解，加0.02 mol/L NaOH溶液20 mL，置60℃水浴10 min，冷却，用流动相稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液即得碱降解溶液。色谱见图1 B。

光照试验:以4 000 lx光照条件，在自制的光照试验箱中试验10 d。结果马来酸曲美布汀缓释片非常稳定，未发生变化。

2.3.3 检测限与定量限确定

在色谱图中，噪声的信号为0.03mV，质量浓度为0.0099μg/mL的对照品溶液的信号为0.07 mV，计算得检测限为12.73 ng/mL(S/N≥3)，定量限为 42.43 ng/mL(S/N≥10)。

2.3.4 标准曲线绘制

精密称取3，4，5－三甲氧基苯甲酸对照品9.9 mg，置100 mL容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。分别精密量取该溶液 1 mL，稀释成质量浓度为 0.099，0.495，0.990，4.950，9.900，19.800 μg/mL 的溶液。精密量取上述溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以样品峰面积 A对质量浓度(C)进行线性回归，得标准曲线方程 Y=27 366 X+324.09，r=0.999 9(n=6)。结果表明，3，4，5－ 三甲氧基苯甲酸质量浓度在0.099 ～19.8 μg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。

图1 高效液相色谱图

2.3.5 精密度试验

精密称取3，4，5－三甲氧基苯甲酸对照品适量，用流动相配制成质量浓度分别为0.5，1，10 μg/mL的溶液，在同一天内连续5次，连续测定5 d，分别计算日内差、日间差。结果二者的 RSD均≤1.5%(n=5)，表明3，4，5－三甲氧基苯甲酸溶液在5 d内稳定。

2.3.6 回收率试验

称取制剂处方空白辅料10 mg，置10 mL量瓶中，分别精密加入取标准曲线项下质量浓度为 0.495，0.990，4.950 μg/mL 的对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法计算回收率。结果3种质量浓度的溶液回收率分别为100.23%，98.89%，100.08% ，RSD 分别为 0.11% ，0.45% ，0.12% ，平均回收率为99.73% ，RSD=0.23% 。

3 讨论

紫外扫描结果表明，马来酸曲美布汀在267.2 nm波长处有最大吸收，主要降解产物3，4，5－三甲氧基苯甲酸在262 nm和268 nm波长处有最大吸收。经试验，254 nm和267 nm波长处测得的杂质个数一致，杂质含量测定结果基本一致。但267 nm波长处处各杂质更易于检出，故确定将267 nm作为检测波长。

由于目前药品标准中没有3，4，5－三甲氧基苯甲酸的定量控制要求，笔者参照文献[3]，将样品中3，4，5－三甲氧基苯甲酸的含量控制在0.25%。

[1]王 卫，左文坚.反相离子对高效液相色谱法测定马来酸曲美布汀片的含量及有关物质[J].药物分析杂志，2003，23(2):111－115.

[2]卓开华，唐 彦，毛亚珠.三种HPLC法测定马来酸曲美布汀片有关物质及含量[J].安徽医药，2007，11(8):701－703.

[3]WS1－(X－083)2003Z－2010，马来酸曲美布汀片质量标准[S].