败酱草药材高效液相色谱指纹图谱鉴别研究

(上海医药高等专科学校药学系，上海 201318)

败酱草(Herba Patriniae)是一种常用中药，具有清热解毒、消痈排脓之功效，临床上用于治疗多种妇科炎症及化脓性疾病。1977年版《中国药典》规定正品为败酱科植物黄花败酱 Patrinia scabiosaefolia Fisch.和白花败酱 Patrinia villosa Juss.的干燥全草。笔者用高效液相色谱(HPLC)法对这两个品种的败酱草进行指纹图谱对比研究，旨在为该药材的品种鉴别和质量标准研究提供参考。

1 仪器与试药

1100型高效液相色谱仪(美国Agilent公司);MILI－Q型超纯水仪(美国Millipore公司);Sartorius BT25S型电子天平(北京赛多利斯有限公司);Branson B3500S－DTH型超声波清洗仪(必能信超声上海有限公司)。异牡荆苷标准品(中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，批号为1429－070320);异荭草素标准品(上海融禾医药科技有限公司，批号为080916);磷酸、乙腈(色谱纯);败酱草(来自全国各地药材市场，见表1)。

表1 败酱草的产地和批号

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Kromasil－C18柱(250mm×4.6mm，5μm);流动相:乙腈－0.1%磷酸，梯度洗脱(见表 2);进样量:5 μL;流速:0.8 mL/min;检测波长:320 nm;柱温:25℃ 。

2.2 溶液制备

精密称取0.29 mg异牡荆苷标准品，以1 mL甲醇溶解，得异牡荆苷对照品溶液;精密称取异荭草素标准品0.50 mg，以1 mL甲醇超声溶解即得异荭草素对照品溶液。称取药材粉末(过 40 目筛)1.0 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，加50 mL甲醇，超声处理60 min(功率 140 W，频率42 kHz)，放冷，抽滤，用适量甲醇洗涤残渣，滤液减压蒸干，加甲醇定量转入5 mL量瓶中，定容，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，即得供试品溶液。

表2 流动相梯度洗脱表

2.3 方法学考察

2.3.1 精密度试验

取对照品溶液5 μL，重复进样6次，记录指纹图谱。结果表明，各主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积无明显变化，相对保留时间的 RSD＜1%(n=6)，相对峰面积的 RSD＜2%(n=6)，符合指纹图谱要求，精密度良好。

2.3.2 重现性试验

取PVJ01号药材样品粉末，精密称定6份，依法制备供试品溶液，记录指纹图谱。结果表明，各主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积无明显变化，相对保留时间的 RSD＜1%(n=6)，相对峰面积的 RSD＜4%(n=6)，符合指纹图谱要求，重复性良好。

2.3.3 稳定性试验

取PVJ01号药材样品粉末，精密称定，依法制备供试品溶液，分别于制备后0，8，12，24 h时检测指纹图谱。结果表明，各主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积无明显变化，相对保留时间的RSD＜1%，相对峰面积的 RSD＜5%，符合指纹图谱要求，24 h内供试品溶液稳定性良好。

2.4 指纹图谱建立及分析

2.4.1 共有峰确定

依法不同产地的败酱药材，比较各样品的色谱图，应用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(国家药典委员会，2004年版)生成对照指纹图谱。白花败酱有15个峰为共有峰(图1)，其中3号峰是异牡荆苷，为参照峰;2号峰为异荭草素。黄花败酱有10个峰为共有峰，未检测出异牡荆苷和异荭草素。两种药材的指纹图谱差异较大。

图1 白花败酱对照指纹图谱

图2 黄花败酱对照指纹图谱

图3 白花败酱与黄花败酱的指纹图谱

2.4.2 相似度计算

应用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，对白花败酱和黄花败酱的各批次药材进行了相似度分析。结果见表2，两种败酱草各批次药材的相似性均较差;同时二者的对照图谱相似度仅为0.021，提示二者在物质基础上有较大差异。

3 讨论

预试验中拟采用不同的样品制备方法，以优化样品色谱图。但讨论后认为，首次研究败酱草指纹图谱，由于仍不确定其活性部位，不宜只以某一部位为主，不宜过度纯化样品，否则会失去样品的整体性。经过考察，发现甲醇作为提取溶剂色谱峰最多，响应最高，有利于指纹鉴别，因此选择甲醇作为提取白花败酱的提取溶剂。

试验中发现，白花败酱和黄花败酱物质基础相差较大，而目前药材标准中均作为败酱草的法定药材，因此考虑采用统一指纹条件对其进行分辨。采用210 nm波长虽然对白花败酱较为适宜，但对黄花败酱不适用，难以统一色谱条件，而在320 nm波长下二者均可以达到较好分离，利于采用统一色谱条件对其进行指纹分析，故选择320 nm作为检测波长。在参照物的选择上，难以找到二者共有的成分作为参照物，故以白花败酱中含量最高、分离度最好的异牡荆苷和异荭草素作为参照物。

表2 白花败酱和黄花败酱20批药材相似度评价结果

用高效液相色谱法对法定的两种败酱草药材进行指纹图谱对比研究，发现二者在物质基础上具有较大差异，这就对临床上将这两种药材作为一种中药来使用的合理性提出了质疑。据本草考证，《神农本草经》中最早记载的是黄花败酱，而白花败酱记载于明代医学家李时珍编著的《本草纲目》[1－2]，两种药材的入药时间相差久远，功能主治也有所不同，《本经》记载“主暴热火创，赤气，疥搔，疸痔，马鞍，热气”，《纲目》记载“败酱，善排脓破血，故仲景治痈，及古方妇人科皆用之”，似乎后者用途更接近现今败酱草的临床用途。本研究结果提示，这两种药材作为一种中药使用值得商榷，需要在今后的工作中对其药理学和临床学进行更为深入的研究。

[1]卢寅熹.败酱草的本草考证[J].时珍国药研究，1996，7(3):129－130.

[2]杨学浩.败酱草的品种鉴别和应用[J].山西中医，2005，21(6):44.