全自动加样仪的应用

2011-02-11庞丽丽杜新凤

中国医药指南 2011年20期

关键词：采供血献血者血型

李荣庞丽丽杜新凤

（广西玉林市中心血站，广西玉林537000）

全自动加样仪的应用

李荣庞丽丽杜新凤

（广西玉林市中心血站，广西玉林537000）

全自动加样仪；自动化；血液检测

随着人们对安全输血问题的日益重视，采供血机构的质量保证工作已成为其关注焦点，全面质量管理的理念使血液的质量保证已不局限于对其最终的检查，而依赖于对生产过程的每一个环节加以控制。自动化设备如全自动加样仪解决了大量标本加样和数据传输的问题，通过实验室管理系统软件与其他检测设备连接，最终与局域网联网，使操作过程标准化、规范化，大大减轻了工作人员的工作强度、降低职业暴露的机会并减少了人为误差，提高了实验室检测的准确度和特异性，有效的保证血液检测质量。笔者根据实际工作经验并参照有关文献，从全自动加样仪的概况、发展、应用等方面加以综述。

1 ELISA试验

尽管在20世纪90年代初期，由于以聚合酶链反应（PCR）技术为代表分子生物学水平技术的发明，人们纷纷预测，酶免试验将被更高灵敏度、数百万级信号放大的、病原体水平检测的核酸检测（NAT）所取代。ELISA试验仍然是传染病血清学标志物（如肝炎、艾滋、致畸病原Torch）、肿瘤标志物及内分泌等各种临床免疫指标检测的主导技术，它检测的是免疫抗原或抗体，NAT检测的是病毒核酸，两个方法对同一份标本的检测是互补的[1]，NAT法虽然灵敏度更高，但据报道抗-HCV阳性而HCV核酸检测阴性的血液亦能使受血者感染，也就是说NAT亦会有部分弱阳性标本漏检；HIV DNA测不出不能说明HIV感染已消失，因为HIV还存在于人体的CD4淋巴细胞和其他细胞、组织、器官中，而且在停药治疗后HIV RNA水平还可能反弹，所以抗-HIV阳性（经确证）在目前还是我国诊断HIV感染的主要指标。我们应当充分利用两种方法优势互补作用用于血液筛查，不能互相代替[2,3]。

全自动加样仪与全自动酶免分析仪(后处理)——如瑞士Hamilton公司制造的FAME、Tecan公司生产的BEPⅢ等连接，这就是全自动酶免分析系统，实现了ELISA试验从标本加样、稀释到酶标孵育、洗板、加试剂、读数和结果打印全自动。

2 病毒核酸检测（NAT）

随着科学技术的发展，输血传染病的检测技术也在不断进步，如化学发光免疫法（CLIA）、NAT也逐步引进和应用。核酸检测能大大缩短窗口期、避免病毒变异和免疫沉默性感染等造成的漏检，在欧美等发达国家，NAT已成为常规血液筛查技术。我国自2000年起即已有人对献血者HCV NAT筛查的必要性和可行性做了初步探讨，现在国家也将NAT纳入新的输血技术操作规程，部分采供血机构也开展一些病毒的核酸检测。鉴于我国各地采供血机构发展不平衡，在献血者中全面推广应用NAT技术尚存在技术、资金等问题。但血液行业是一个特殊的行业，正如美国AABB出版的《新千年血液》所言：“极少有其他某个行业能够像血液制品行业这样，始终处于公众、新闻媒体、乃至政府高官的密切关注之下。当发生血液安全问题时，往往激发出极其独特的情绪化反应，其强度常超过其他更大的公共卫生问题[4]。”我国采供血机构实施HBV、HCV、和HIV病毒核酸检测或许是发展方向，但有关技术问题如试剂的灵敏度和实验的准确性、标本汇集检测的限度等还有待解决。

NAT血液筛查主要有单个样品（ID-NAT）和多样品汇集（MPNAT）两种模式，目前大多采用多样品汇集模式[5]，这是由我国的国情所决定。有研究[6]在已有加样设备基础上开发自动标本汇集，在MPLC上进行全自动核酸提取，最后在COBAS AMPLICOR上扩增和检测，实现从标本准备、核酸提取及扩增和检测一体化和自动化。

3 ALT检测

对献血者血液丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotrasferase，ALT)检测的意义虽然存在很大的争议，但ALT目前仍是我国采供血机构献血者必查项目之一。《献血者健康检查要求》[7]规定酮体粉法只限于ALT初检使用，复检必须用赖氏法或速率法。由于全自动生化分析仪价格昂贵还不能在中小血站普遍推广，所以不能使用FICC推荐的速率法，多数还是采用赖氏试管法，操作烦琐，费工费时，不适宜大批量标本的检测，而且无法对原始数据进行网络化管理。利用全自动加样器加样，结合微孔板、酶标仪以及局域网从而实现ALT的自动化检测。与传统赖氏法比较，微孔板法可实现自动化，具有测量速度快、操作简便的优点，虽然由于标本、试剂用量小容易出现误差，且受脂肪血和溶血的影响较大[8]，但只要加以制，还是能满足质量要求。现在多数中小血站都采用赖氏微孔板法检测献血者ALT。

4 血型自动化检测

以前采供血机构实验室多使用手工法玻片（纸板）法或试管法作ABO正反定型和RhD血型筛查，操作烦琐，每天大量的标本做得手酸眼花，错型、误报等差错时有发生。利用全自加样仪处理样本，用微孔板法对献血者血液样本进行ABO及RhD血型筛查，血液标本、试剂红细胞、标准血清等均由全自动加样仪完成，即便是用人工判读结果，也减少了大量烦琐的手工操作，实现血型检测的自动化；由于全自动加样仪加样精度高，保证了实验结果的重复性，实现了血型检测的标准化[9]。如果再配以全自动血型分析仪（如国产爱康智能血型分析仪），利用其判读系统所具有的自动读取自动加样仪生成的条码，并有影像记录，保存原始数据，便于查询和溯源；通过局域网自动发布结果，实现了血型检测的数字化和规范化，避免人为因素对血型检测结果的影响，提高工作质量，并可减轻劳动强度，提高工作效率，还可大量节约试剂[10]，尤其适合采供血机构大批量标本血型筛查。有关权威人士认为[11]，自动化检测可检出ABO亚型及相应盐水不规则抗体，从而保障输血的安全性和有效性，但微孔板的自动判读与肉眼判断结合还是必须的，特别是亚型。

5 标本留样存档

我国《血站管理办法》第三十一条规定：血清（浆）标本的保存期应在血液使用后2年。一般血站保存的血样为血袋小辫，先离心后热合，由于小辫软而不直，即使充分离心，仍有血样中红细胞不能完全下沉的现象，致使保存的血浆辫中混杂红细胞，冷冻后溶血，影响标本质量。采用保存板（Archive plare，孔深35mm，孔容量1.5mL）结合全自动加样仪和条形码技术留取血样（血清/浆），通过电脑记录留样信息并生成详细的留样文件，使血样保存板和加样文件形成一一对应的关系，确保留样的准确、可靠，便于查找，具有简单快捷、效率高且质量好、保存量大的特点[12,13]。更重要的是微板留样确保检测标本与留样标本一致，对实验室来说是一种有效的自我保护。但有报道[14]微板留样会造成弱阳性标本OD值显著下降，因此在微板留样的同时不能舍弃血袋上的小辫标本。