流式细胞术和肿瘤标志物在妇科肿瘤早期诊断中的研究进展

蔡元菊 黄文波 马占忠

（1 韶关学院医学院医学技术系，广东 韶关 512026；2 汕头大学附属粤北人民医院医院检验科，广东 韶关 512026）

目前，妇科肿瘤的发病率呈上升趋势，且出现年轻化趋势[1]。其中卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌是最常见的三大妇科恶性肿瘤，已成为严重威胁妇女生命的主要顽症，其主要原因是早期诊断困难及高复发率，特别是卵巢癌在妇科恶性肿瘤中的病死率最高，其发病隐匿，约70%～80%的患者发现时已为晚期，5年存活率仅为20%～30%，而早期卵巢癌患者的生存率可达90%。因此，提高肿瘤的早期诊断水平、争取有利的治疗时机、对改善预后尤为重要。

长期以来，组织病理学检查一直作为肿瘤诊断的重要手段，但组织病理学作为形态学检查方法存在检测时间长、主观性强、阳性率低等缺点，尤其是对癌前病变和临界瘤的恶变倾向缺乏有效判断，常见肿瘤标志物检测已广泛应用于临床疾病诊治，但因其特异性不高，敏感性差，至今没有一种肿瘤标志物能完全满足临床需求。寻找早期诊断妇科恶性肿瘤的检测方法，一直是妇科临床所面临的主要任务，它对于早期诊治和预后评估有着极为重要的意义。近年来，流式细胞术作为新技术在肿瘤诊断中也取得了一定的进展，它们在肿瘤早期诊断中展示了良好的应用前景。

1 肿瘤标志物在妇科肿瘤诊断中的应用

肿瘤标志物是与肿瘤的生长密切相关的一组蛋白质，是肿瘤细胞分泌或脱落到体液或组织中的物质，也有一部分是宿主对体内寄生物反应后产生的物质。近年来，应用肿瘤标志物监测恶性肿瘤的生长状况是肿瘤诊断学上的巨大进步。

1.1 癌胚抗原125（cancer antigen 125，CA125）

CA125 是卵巢上皮性癌最常用的肿瘤标记物，在Ⅰ期卵巢上皮性癌患者中只有50 %～60 %为阳性，Ⅱ～Ⅳ期在80%以上。且存在一定假阳性。虽然CA125升高较临床上能检查到肿瘤通常要早3～6个月，但其在卵巢癌筛查中的价值尚未肯定，因此CA125不能单独用于卵巢癌筛选或早期诊断。CA125在卵巢浆液性上皮性癌、卵巢上皮性交界性肿瘤、宫颈癌、子宫内膜癌中均有升高，存在一定假阳性[2]。临床多用化学发光法进行检测，血清CA125参考值为＜35 U/ml。Moss 等[3]对799 例接受过血清CA125 测定的患者进行回顾性研究表明其在卵巢癌早期患者中CA125升高者仅占20%。因此是否适用于卵巢癌早期诊断有待于进一步研究。

1.2 癌胚抗原（carcinoembryonic，CEA）

CEA是一种酸性糖蛋白，编码基因位于19号染色体，是由29个分离基因组成的基因家族。临床常用化学发光法检测，血清CEA的参考值为＜3.4ng/mL。CEA对卵巢上皮性肿瘤较敏感，特别是在卵巢黏液性肿瘤时的阳性率为32.5%，是诊断卵巢黏液性肿瘤较好的标志物，血清CEA水平与卵巢肿瘤手术分期、组织学分级、病理学类型及患者预后均呈正相关。CEA也可做为子宫内膜癌组织分级及早期诊断复发的一项标志物，特别是与CA125联合检测时，对子宫内膜癌诊断、评价患者预后等方面均有较大意义[4]。

1.3 甲胎蛋白（alpha-feto protein，AFP）

AFP是由胚胎的卵黄囊和不成熟肝细胞合成的一种血清糖蛋白。正常情况下，主要在胎儿组织中存在。肝癌时血清AFP明显升高。生殖腺胚胎性肿瘤血清AFP水平也升高。血清AFP参考值为＜5.8IU/mL。妇科常用血清AFP作为卵巢胚胎性肿瘤的标志物。

1.4 人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，HCG）

HCG为一种糖蛋白激素，在正常妊娠时由胎盘滋养细胞产生，非孕期多为肿瘤产生。由α、β两个亚基组成，其β亚基具有较高特异性，β-HCG是各种肿瘤标志物中敏感性和特异性最高的一种，对卵巢原发性绒癌、胚胎癌具有特异性诊断价值。

另外，CA19-9、CA72-4、CA50等肿瘤标志物检测也已广泛应用于临床，在疾病诊治中提供了一定帮助，但因单独检测某一项肿瘤标志物其特异性不高，敏感性差，即使治疗后仍然有肿瘤生长，也有可能因为单项检测的局限性而不能及时发现。至今没有一种肿瘤标志物能完全满足临床要求。联合检测多项肿瘤标志物的方法来提高对肿瘤的检出率、特异性和敏感性，并在治疗后对患者的肿瘤标志物进行联合检测也可以及早发现治疗措施的合适与否，及时提醒医师对其做出恰当处理，为患者赢得宝贵的治疗时间和治疗机会。但妇科领域的肿瘤标志物甚多，敏感性及特异性各异，采用何种联合检测方式才是最经济、最实用的仍值得深入研究和探讨。

2 流式细胞术在妇科肿瘤诊断中的应用

流式细胞术（Flow Cytometry，FCM） 是20 世纪70 年代发展起来对单细胞定量分析的一种新技术。它借鉴了荧光标记技术、激光技术、单抗技术和计算机技术，具有极高的检测速度和统计精确性，而且从单一细胞可以同时测得多个参数，为生物医学与临床检验提供了一个全新视角和强有力手段。随着单克隆抗体技术的发展，流式细胞术已广泛应用在基础研究和临床实践的各个方面。在细胞生物学、肿瘤学、免疫学、遗传学及临床检验学等领域内发挥着重要的作用。目前，流式细胞术在肿瘤学中的应用主要集中在免疫功能检测、肿瘤早期诊断、预后评估和多药耐药基因相关蛋白表达检测等方面。

2.1 在肿瘤早期诊断中的应用

FCM 对DNA、RNA 含量及细胞周期的分析具有独到之处，人体正常的体细胞均有较恒定的DNA 二倍体含量，细胞癌变过程中伴随细胞DNA 含量的改变，DNA 非整倍体细胞是恶性肿瘤的特异性标志。根据DNA 分布直方图，可对细胞周期的分布状态进行分析，计算出G0/ G1期、S 期和G2/M期的比率并了解细胞的增殖能力。在肿瘤病理学研究中，通常以S 期比率（S-phase fraction，SPF） 作为判断肿瘤增殖状态的指标。此外，DNA 指数（DI）对肿瘤的早期诊断、鉴别诊断、判断预后及评价疗效有重要意义。大量研究表明：癌前病变的癌变率与病变的增生程度一致，而增生程度与DNA 含量的异常改变又呈平行关系。FCM 通过精确定量DNA 含量，能对癌前病变的性质和发展趋势作出判断，有助于癌前病变的早期判断。

黄红梅等[5]用细胞DNA定量分析宫颈癌及早期癌前病变发现DNA定量分析方法在筛查宫颈病变的敏感性为86%，特异性为71%；而常规细胞学方法则为57%和91%。黄宏思等[6]将l 206例妇科检查分别采用传统宫颈细胞学与细胞DNA倍体分析进行宫颈早期病变筛查，结果显示DNA 倍体分析宫颈上皮内瘤样变检出率为82.22%，明显高于传统宫颈细胞学检查，证实DNA 倍体分析是早期筛查宫颈癌和癌前病变敏感而准确的方法。

FCM对宫颈癌的早期诊断较之形态学方法更为敏感、准确，它可以测得正常细胞与异常细胞间的微小差异，在形态学还不能作出确诊癌变之前，使从DNA 定量的分子水平进行超早期癌变诊断成为现实。因此，FCM在肿瘤的早期诊断中有很好的应用前景。

2.2 作为判断良恶性肿瘤的辅助诊断指标

目前，组织病理学进行肿瘤良恶性分级时，切片的厚度可以影响计数结果，视野的人为选择更可使计数结果相差倍之多，组织切片计数的有丝分裂指数作为衡量细胞增殖活性的指标的不准确性，足以影响到肿瘤良恶性的判断。另外，通过病理学尚不能证实为恶性的交界瘤，经FCM检测出DNA 非整倍体细胞时可考虑为恶性肿瘤，而病理学认为良性的肿瘤经流式细胞仪测出非整倍体则提示有恶性转变的可能。流式细胞术对肿瘤组织进行细胞周期分析作为增殖指标，较全面了解细胞增殖情况，用于评价不典型、恶性肿瘤的侵袭性已得到许多学者的认可。

2.3 DNA 异倍体与恶性肿瘤预后的关系

国内外大量病理和临床资料已证明：肿瘤细胞倍型异常是恶性肿瘤的特征之一，用FCM分析DNA 含量和DNA 倍体及S 期分析对肿瘤的恶性程度判定、治疗方案选择、预测预后具有重要价值。通常认为，较高的S 期比率和非整倍体的肿瘤恶性程度高、预后差、复发率、转移和病死率均较高，而二倍体或近二倍体肿瘤预后则较好[7]。

相信通过新技术的转化应用能找出检出率高、特异性强和敏感性高的生物学检测指标，为妇科肿瘤的早期诊治和预后评估提供科学依据。

[1]王临虹.中国妇科肿瘤的流行病学[C].2008中国国际妇科肿瘤会议日程册和论文集,2008.

[2]吴文湘,蒋英萍,刘朝晖,等.卵巢癌九例误诊分析[J].中国全科医学,2005,8 (19):1612-1613.

[3]Moss EL,Hollingworth J,Reynolds TM.The role of CA125 in clinical practice[J].Clin Pathol,2005,58(3):308-312.

[4]刘坚,郡甫.多肿瘤标志物联合检测在妇科恶性肿瘤临床治疗中的应用研究[J].实用癌症杂志,2008,3(5):480-482.

[5]黄红梅,雪梅,云光.细胞DNA定量分析用于宫颈癌及癌前病变早期筛查的临床观察[J].当代医学,2010,6(15):3.

[6]黄宏思,黄卫彤,黄燕.用细胞DNA倍体分析法筛查宫颈癌[J].检验医学与临床,2010, 7(8): 724-725.

[7]李际春,李妍.卵巢恶性肿瘤的DNA倍体分析及临床意义[J].宁夏医科大学学报,2010,32(2):220-222.