KLF4蛋白在结肠癌组织中的表达及临床意义

陈 涛 谢黎明

（南华大学附属第一医院，湖南 衡阳 421001）

结肠癌是常见的消化道肿瘤之一，随着人民生活方式、饮食结构的改变，其发病率呈上升趋势，此趋势在大中城市较明显。据我国统计资料估计，我国2005年结肠癌发病数和死亡数分别达17.2万和9.9万，严重影响人类健康。要治愈和预防结肠癌的发生，关键问题是了解结肠的病因及其发病机制[1]。KLF家族（krüppel-1ike factors）是真核生物中广泛存在的一类基础转录元件结合蛋白（BTEB），KLF4是该家族的一名重要分子[2]。本研究采用免疫组织化学检测KLF4在结肠癌及癌旁组织中的表达，探讨KLF4与结肠癌临床病理参数之间的关系，为进一步阐明结肠癌发生发展、浸润转移的分子机制提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

收集南华大学附属第一医院病理科2010至2011年间结肠癌切除标本58例，患者术前均未接受化疗及放疗。其中男性27例，女性31例；年龄41～79岁，年龄（54±9）岁，Ⅰ期9例，Ⅱ期13例，Ⅲ期15例，Ⅳ期21例，有淋巴结转移17例。所有样本均按照WHO结肠癌组织学分类及分级标准，并经病理学证实。

1.2 试剂

所用鼠抗人KLF4单克隆抗体购自美国Santa cruz公司，免疫组织化学SP 试剂盒及BAD显色剂均购自福州迈新生物技术有限公司。

1.3 免疫组织化学染色

所有标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋，4μL 厚切片，SP免疫组织化学染色。所用抗KLF4抗体浓度为1∶50，染色步骤按说明书进行。

1.4 结果判定

KLF4阳性结果判定标准：根据染色强度和分布范围进行半定量处理，以如下标准：根据光镜下观察阳性染色的细胞比例（5个高倍视野下的均数） 分为：①阴性（-），染色细胞数少于10%；②阳性（+），染色细胞数在10%～50%；③强阳性（++），染色细胞数多于50%。

1.5 统计学处理

2 结 果

2.1 KLF4在结肠癌及癌旁组织中的表达情况

免疫组织化学结果显示，58例结肠癌组织中KLF4表达阳性12例，阳性表达率为20.7%，58例癌旁正常组织中KLF4表达阳性44例，阳性表达率75.9%。二者比差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 KLF4表达与的表达与结肠癌临床病理参数之间的关系

KLF4表达与结肠癌患者性别、年龄、大体类型之间无显著相关（P＞0.05），KLF4在结肠癌不同的临床分期中的表达分别是Ⅰ期4/9（44.4%），Ⅱ期4/13（30.8%），Ⅲ期2/15（13.3%），Ⅳ期2/21（9.5%），分别与癌旁对照组比差异均有统计学意义（P＜0.05）；KLF4在有无淋巴结转移中阳性表达分别为2/17（11.8%），10/41（24.4%），二者比差异有统计学意义（P＜0.01）。

3 讨 论

KLF家族是真核生物中一大类基础转录因子（BTEB）[2]，最早发现于果蝇胚胎中的发育调控因子Krüppel，具备羧基端三个串连的Cys2His2类型的锌指结构，负责结合靶基因富含Gc的启动子序列，促进或抑制靶基因的表达，参与早期胚胎发育、癌症形成以及血管形成及其病理发生，进而影响细胞的各种代谢途径。KLF4是典型的KLF因子参与的转录激活作用，在平滑肌细胞（SMC）分化过程中，KLF4可以抑制血清反应因子的表达及其和SMC基因启动子的结合，进而抑制SMC的分化，也可通过结合SMC细胞中的肌动蛋白基因启动子中TCE元件来抑制SMC基因过表达，还可以促进PDGF-BB的表达。研究发现在癌变膀胱上皮细胞中，KLF4表达下调，而过表达KLF4后，癌变膀胱上皮细胞的生长被抑制，说明KLF4的表达下调和膀胱癌的发生相关[3]。

本研究运用免疫组织化学检测KLF4在结肠癌和癌旁组织中的表达水平变化，以及KLF4表达与结肠癌的临床分期以及淋巴结转移之间的关系。结果表明，KLF4在结肠癌组织中阳性表达率达20.7%，而在相应癌旁对照组织中阳性表达率为75.9% （P＜0.01），随着结肠癌的临床分期演进KLF4表达逐渐降低，且有淋巴结转移的KLF4表达明显低于无淋巴结转移组。提示KLF4可能作为肿瘤抑癌基因参与结肠癌的发生发展，与结肠癌临床分期、淋巴结转移密切相关，可能成为结肠癌潜在的治疗靶点和预后判断提供了更有力的实验证据。

[1]廖前进,苏坚,何洁,等.二烯丙基二硫对人结肠癌SW480细胞周期的阻滞作用[J].癌症,2009,28(2):138-41.

[2]Yang HW,Xia T,Chen ZL,et al.Cloning,chromosomal localization and expression patterns of porcine Kruppel-like factors 4,-5,-7 and the early growth response factor 2[J].Biotechnol Lett,2007.29(1):157-163.

[3]Ohnishi S,Ohnami S,Laub F,et al.Downregulation and growth inhibitory effect of epithelial-type Kruppel-like transcription factor KLF4,but not KLF5,in bladder cancer[J].Biochem Biophys Res Commun,2003,308(2):251-256.