动脉粥样硬化及脑梗死患者血中HCMV IgM抗体检测及临床意义

沈雪莉，张薇，张斯萌，崔梦遥

（1.中国医科大学第一临床学院神经内科，沈阳 110001； 2.辽宁电力中心医院神经内科，沈阳 110015； 3.中国医科大学94期临床医学七年制，沈阳 110001）

动脉粥样硬化是脑梗死的主要病因及病理基础，大量研究表明动脉粥样硬化的发生与多种因素相关，包括血管内皮损伤、高血压、吸烟、饮酒、高胆固醇、同型半胱氨酸等［1，2］。近年来研究资料表明人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）感染内皮细胞可能在动脉粥样硬化的发生发展过程中起重要作用［2，3］。Guech-Ongey 等［4］和 Potena［5］研究指出急性心脑血管事件与HCMV感染相关，同时是脑梗死患者病情进展的重要原因之一。本研究旨在对颈动脉粥样硬化及动脉粥样硬化脑梗死患者进行HCMV抗体检测，从血清学角度来验证颈动脉粥样硬化及动脉粥样硬化脑梗死的发生及病情进展与HCMV感染的关系。

1 材料与方法

1.1 实验对象

1.1.1 病例选择：选取2009年1月至12月期间在我院神经内科住院和门诊就诊患者230人，其中健康对照72人（对照组），男42人、女30人，年龄44~75岁；颈动脉粥样硬化77人（颈动脉粥样硬化组），男44人、女33人，年龄46~73岁；动脉粥样硬化脑梗死（脑梗死组）81人，男49人，女32人，年龄45~75岁；各组性别、年龄匹配无统计学差异。

1.1.2 各组入选标准：正常对照组标准为颈动脉超声正常、头CT/MRI检查未见异常病灶，无神经功能缺损体征。颈动脉粥样硬化组标准为颈动脉超声检查证实有颈内动脉内膜增厚、斑块形成和管腔狭窄，头CT/MRI检查未见异常病灶，无神经功能缺损体征。脑梗死组符合1995年第四届全国脑血管病会议脑梗死诊断标准［6］，并经头CT/MRI检查证实为脑梗死。

1.1.3 排除标准：年龄>75岁、出血性脑卒中、脑栓塞、短暂脑缺血否发作、入院前4周有发热及感染史、入院前4周内应用抗生素及免疫抑制剂、血液病、心肝肾功能严重不全者、酗酒及长期服用避孕药者。

1.2 主要仪器与方法

1.2.1 仪器及试剂：电热恒温箱、离心机、酶标仪、HCMV IgM抗体检测试剂盒（德国）。

1.2.2 HCMV IgM抗体检测方法：采集各组患者空腹静脉血5 mL，1 500 r/min离心取上清，－70℃冰箱保存，用ELISA方法检测血清HCMV IgM抗体，操作过程及结果评定严格按照试剂盒说明进行。用酶标仪405 nm处读取OD值。

1.3 统计学方法

应用SPSS11.5软件包进行统计学分析，数据以x±s表示。对计量资料进行方差分析并进行组间两两比较；计数资料采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 实验组与对照组HCMV IgM抗体OD值比较

正常对照组、颈动脉粥样硬化组及脑梗死组血清HCMV IgM抗体的OD值分别为（0.60±0.05）、（0.81±0.08）和（0.94±0.07），实验组与对照组比较差异有统计学意义（P<0.01），2实验组比较差异无统计学意义（P>0.05）。

2.2 实验组与对照组HCMV IgM抗体检测阳性率比较

正常对照组、颈动脉粥样硬化组及脑梗死组血清检测HCMV IgM抗体的阳性率分别为17.8%（13/72）、39%（30/70）和 49.4%（40/81），实验组与对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）；2实验组比较差异无统计学意义（P>0.05）。

2.3 HCMV IgM抗体阳性与颈动脉粥样硬化及脑梗死相关分析

HCMV IgM抗体阳性与颈动脉粥样硬化和脑梗死发生的相对危险度（OR）分别是2.95和4.51，95%可信区间分别是［1.39~6.27］和［2.16~9.40］。

3 讨论

动脉粥样硬化是急性脑血管事件的主要病理基础和重要原因，70%~79%的缺血性脑卒中系由颈动脉粥样硬化引起。早期动脉粥样硬化病变为动脉脂质条纹，动脉壁增厚，在脂蛋白摄入和排除失衡时，逐步演变为不稳定的纤维斑或易破碎的粥样斑，管腔狭窄或闭塞，血流速度加快，斑块碎片脱落造成远端动脉闭塞，最终成为动脉粥样硬化性脑梗死。动脉粥样硬化的发生与多种因素相关，包括血管内皮损伤、高血压、吸烟、饮酒、高胆固醇、同型半胱氨酸等［7］。自1984年Fabricant在火鸡巨细胞病毒接种后引起动脉粥样硬化以来，病毒感染因素愈加受到人们重视。近年来，大量的血清流行病学和分子生物学的研究资料表明人HCMV感染内皮细胞可能在动脉粥样硬化的发生发展过程中起重要作用［2，3］。但国内有关这方面研究开展的较少。

HCMV IgM是HCMV进入人体最早产生的抗体，它在体内持续时间不超过4个月，是HCMV活动性感染的血清学标志之一，因而检测血清HCMV IgM是识别HCMV活动感染的一种简便易行的方法。本实验结果显示，颈动脉粥样硬化组和脑梗死组患者血清中HCMV IgM抗体OD值和HCMV IgM抗体阳性率显著高于正常对照组，说明HCMV感染与颈动脉粥样硬化和脑梗死的发生有关。通过进一步分析显示，与HCMV IgM抗体阴性者比较，HCMV IgM抗体阳性者发生颈动脉粥样硬化的相对危险性为2.95倍；HCMV IgM抗体阳性者发生脑梗死的相对危险性为4.51倍，提示HCMV感染是缺血性脑血管病发生的危险因素之一。

Chen等［8］通过PCR法和原位杂交术检测HCMV即刻早期基因（IEA）和晚期基因（LA）片段，发现动脉粥样硬化组IEA和EA基因阳性率显著高于无动脉粥样硬化组，且病毒DNA主要集中于内皮细胞核和内膜下肌层及病变区域的平滑肌层，提示HCMV感染可能为动脉粥样硬化的发病机制之一。Tarnacka等［9］测定脑卒中患者及正常对照组血清HCMV抗体滴度，结果显示脑卒中组明显升高，认为HCMV是脑卒中相关的危险因素。本实验结果与上述研究结果一致，提示HCMV感染是脑血管疾病发生和发展的危险因素之一。

目前认为巨细胞病毒参与动脉粥样硬化和脑梗死的作用机制可能有以下4个方面：（1）HCMV潜伏感染可使内皮细胞的功能受损，导致一氧化氮合成和分泌减少。一氧化氮分泌减少使血小板从抗凝状态变为促凝状态，增加其在血管内皮的黏附，促使血栓形成［10］；（2）HCMV感染平滑肌细胞可直接诱导局部血小板衍生生长因子表达，后者可促进平滑肌细胞增殖和新内皮细胞的形成参与动脉粥样硬化发展和再狭窄形成［11］；（3）HCMV引起炎性反应导致斑块不稳定［12］；（4）HCMV 可引起代谢紊乱，脂质沉积增加［13］。

本研究从血清学角度为澄清HCMV感染与颈动脉粥样硬化和脑梗死的关系提供了实验依据，为今后制定脑血管疾病发生和发展的防治措施提供了重要的参考依据。

［1］李俊涛，王高频.对动脉粥样硬化炎症认识的新进展［J］.新医学，2009，40（11）：762-764.

［2］Elkind MS，Luna JM，Moon YP，et al.Infectious burden and carotid plaque thickness：the northern Manhattan study ［J］.Stroke，2010，41（3）：117-122.

［3］Smith MS，Goldman DC，Bailey AS，et al.Granulocyte-colony stimulating factor reactivates human cytomegalovirus in a latently infected humanized mouse model［J］.Cell Host Microbe，2010，8（3）：284-291.

［4］Guech-Ongey M，Brenner H，Twardella D，etal.Roleof cytomegalovirus sero-status in the development of secondary cardiovascular event in patients with coronary heart disease under special consideration of diabetes［J］.Int JCardio，2000，111（1）：98-103.

［5］Potena L，Grigioni F，Magnani G，et al.Prophylaxis versus preemptive anti-cytomegalovirus approach for prevention of allograft vasculopathy in heart transplant recipients［J］.JHeart Lung Translant，2009，28（5）：461-467.

［6］崔元孝.脑血管疾病诊治进展-脑血管病的分类与诊断标准［J］.山东医药，2004，44（30）：62-63.

［7］Griggs RM，Bluth EI.Noninvasive risk assessment for stroke：special emphasis on carotid atherosclerosis，sex-related differences，and the development of an effective screening strategy ［J］.AJR Am J Roentgenol，2011，196（2）：259-264.

［8］Chen R，Xiong S，Yang Y，et al.The relationship between human cytomegalovirus infection and atherosclerosis development［J］.Cell Biochem，2003，249（1-2）：91-96.

［9］Tarnacka B，Gromadzka G，Czlonkowska A，et al.Increased circulating immune complexes in acute stoke：the triggering role of Chlamydiaand cytomegalovirus［J］.Stoke，2002，33（4）：936-940.

［10］Lunardi C，Dolcino M，Peterlana D，et al.Endothelial cells activation and apoptosis induced by a subset of antibodies against human cytomegalovirus：relevance to the pathogenesis of atherosclerosis［J］.PloSOne，2007，2（5）：e473.

［11］Croce K，Libby P.Intertwining of thrombosis and inflammation in atherosclerosis［J］.Curr Opin Hematol，2007，14（1）：55-61.

［12］Dahl TB，Yndestad A，Skjelland M，et al.Increased expression of visa fat in macrophages of human unstable carotid and coronary atherosclerosis role in inflammation and plaque destabilization［J］.Circulation，2007，115（8）：972-980.

［13］牛玉红，许从峰，史剑慧，等.巨细胞病毒感染加剧ApoE基因敲出小鼠动脉粥样硬化［J］.中华人兽共患病杂志，2004，20（10）：825-828.