不同方法检测疑似甲流患者标本的结果分析

李启欣 李炜煊 陈斌鸿 徐杰伟 戴伟良

禽流感病毒属正粘病毒科甲型流感病毒属，该病毒根据表面糖蛋白血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）的抗原性不同可分为16个H亚型（H 1～H 16）和9个N亚型（N1～N9）[1]。H 5N1禽流感病毒不仅对陆禽有高致死性,1997年还在香港首次引发传人事件,造成18人感染,6人死亡[2]。2003年底,H 5N1禽流感疫情在东亚和东南亚地区持续暴发,2005至今又逐渐蔓延到俄罗斯、欧洲、中东、非洲和南亚地区,给世界各国的农业经济和公共卫生带来严重威胁[3]，因此,有关医疗机构监测可疑患者,在第一时间内发现H 5N1病毒并采取相应措施控制其扩散传播,对于H 5N1疫情的控制具有重要意义。H 5N1病毒诊断方法包括病毒培养、PCR检测、免疫学检测和血清学检测等[4]。根据2001～2003年香港H 5N1疫情控制经验,应用甲流病毒抗原快速检测试剂对疫情的早期发现有帮助,但其缺点是只能测定流感病毒的型别（即甲、乙、丙或A、B、C型）,而不能直接测定病毒的H亚型，导致阳性结果过多。为了检验实验室所用抗原快速检测试剂的质量，我们设计了对疑似甲流患者平行各取两份鼻咽拭子，一份用抗原快速检测法检测，另一份用PCR方法检测，对比两种方法检测结果的差别，为临床确诊甲流提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 病毒标本的采集 56名患者均为我院2009年7～8月发热门诊患者和感染科住院病人，每名患者平行取两份鼻咽拭子，一份用甲流病毒抗原快速检测法检测，另一份先浸入病毒输送液（Viraltransportmedia,VTM）保藏于4℃条件下,然后集中用PCR方法检测。

1.2 甲流胶体金法快速检测

1.2.1 将擦拭后的鼻咽拭子置于塑料试管的专用稀释液（300m l）中，充分挤压，使鼻咽分泌物充分溶于稀释液中，将鼻咽拭子尽量拧干后取出，塑料试管中液体作为待检测样品，立即用于检测。

1.2.2 打开铝箔包装，取出检测试纸卡，置于水平台面上，用滴管吸取溶有患者鼻咽部分泌物的稀释液4滴加入检测试纸卡加样孔中。

1.2.3 加样后15m in观察结果。

表1 不同方法检测疑似甲流患者标本结果（例）

1.2.4 阳性：在检测区（T）和对照区（C）各出现一条红色条带；阴性：只在对照区（C）出现一条红色条带。无条带出现或仅在检测线位置出现一条红带，均为无效检测，应更换新批号试剂重新检测。

2 结果

对我院发热门诊和感染科住院疑似病例共56份鼻咽拭子标本，用抗原快速检测试剂进行检测,其中阳性2例,弱阳性7例,其余47例为阴性.用PCR方法检测,除抗原快速检测法1例弱阳性结果为阴性外，其余阳性和弱阳性的8例结果均为阳性，阴性48例。两种方法经卡方检验（x2=1.0），无显著性差异（P＞0.05）。结果见表1。

3 讨论

3.1 在甲流流行其间，我院作为佛山市定点收治医院，每天有较大量疑似甲流病人就诊，为此我们选用质量稳定、敏感性高的甲流快速筛查试剂,以帮助临床尽快筛查出甲流患者。

3.2 实验结果显示,甲流抗原快速检测法阳性率为16%,PCR方法阳性率为14%,两种方法的阳性符合率较高，与其他文献报道有差异,可能跟我们选择的病例种类有关，56例病例中,20例是发热门诊患者，36例是感染科疑似甲流住院患者。也可能与我们检测标本数少、取材时间、取材部位以及是否治疗过有关。有一例患者标本，抗原快速检测法结果弱阳性而PCR法结果阴性,可能是快速胶体金法发生了非特异性反应，导致实验结果出现假阳性。

3.3 抗原快速检测法9例弱阳性以上结果的病例中，有3例是感染科疑似甲流待确诊的住院患者，余下6例是看发热门诊的住校学生，这部分过群居生活的学生,一旦出现感冒症状,病毒容易在群体中互相感染,造成大流行。学校应配合卫生部门及时控制疫情，对孩子进行必要的健康教育，加强体育锻炼，培养良好的卫生习惯。

本研究结果表明：甲型流感病毒抗原快速检测试剂,虽然不能检测H 5等亚型甲流，但无需任何专用设备即可在20m in内得出检测结果，可以满足现场标本初步诊断的需要,尤其适合缺乏仪器设施和高素质专业技术人员的基层单位，对禽流感疫情防控的需要。有助于提高防控第一线对H 5N1禽流感疫情的检测效率和快速应对能力，但疫情的确诊应结合流行病学,临床症状以及传统的PCR方法和病毒分离方法。

[1]陈毅歆,罗海峰,徐飞海,等.H5N1禽流感病毒血凝素抗原快速检测试剂对不同现场标本的检测比较[J].病毒学报,2007,23（2）：91-92.

[2]于康震,陈化兰,唐秀英,等.97香港禽流感[J].中国畜禽传染病,1998,20（3）：187.

[3]http://www.cdc.gov./flu/avian/outbreaks/asia.htm.

[4]赵翠燕,崔恒敏.禽流感检测方法研究进展[J].养禽与禽病防治，2003（05）：4-7.