RP-HPLC法测定独一味胶囊中木犀草苷的含量

陈 林（江苏如皋市人民医院，如皋市 226500）

RP-HPLC法测定独一味胶囊中木犀草苷的含量

陈 林＊（江苏如皋市人民医院，如皋市 226500）

目的：建立测定独一味胶囊中木犀草苷含量的方法。方法：采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Ultimate XB-C18，流动相为甲醇（A相）-0.2%醋酸溶液梯度洗脱（0～35m in，A相33%；35～37m in，A相33%～70%；37～47m in，A相70%；47～50 m in，A相70%～33%），检测波长为349 nm，流速为1.0m L·m in－1，进样量为10μL，柱温为30℃。结果：木犀草苷进样量在0.041 1～2.056 0μg范围内与峰面积积分值线性关系良好（r＝0.999 8）；平均加样回收率为98.06%、96.71%、95.75%，RSD＝1.70%。结论：该法稳定、简便，可用于独一味胶囊的质量控制。

独一味；木犀草苷；黄酮；反相高效液相色谱；含量测定

独一味胶囊收载于2005年版《中国药典》（一部）中[1]，具有活血止痛、化瘀止血的作用[2]。临床用于多种外科手术后的刀口疼痛、出血，外伤骨折，筋骨扭伤，风湿痹痛以及崩漏、痛经、牙龈肿痛、出血等。本文报道笔者对独一味胶囊中黄酮苷类成分木犀草苷进行测定，旨在为该药的质量控制研究提供参考。

1 仪器与试药

Agilent1100高效液相色谱仪、Chemstationsys工作站（美国安捷伦公司）；Sartorius CP225D分析天平（德国赛多利斯公司）。

独一味胶囊（甘肃独一味生物制药股份有限公司，批号：20100218，规格：每粒0.3 g）；木犀草苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111720-200604）；甲醇、磷酸为色谱纯，水为纯净水，其他试剂均为分析纯。

图1 高效液相色谱图A.对照品溶液；B.样品；C.阴性对照溶液；1.木犀草苷Fig 1 HPLC chromatogram sA.control solution；B.sample；C：negative control solution；1.galuteolin

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Ultimate XB-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇（A相）-0.2%醋酸溶液梯度洗脱（0～35m in，A相33%；35～37 m in，A相33%～70%；37～47 m in，A相70%，47～50min，A相70%～33%）；流速：1.0m L·min－1；检测波长：349 nm；进样量：10μL；柱温：30℃。在此条件下，木犀草苷能达到基线分离。色谱见图1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷干燥过夜的木犀草苷对照品约10mg，置于50m L容量瓶中，用70%乙醇溶液溶解并定容至刻度，作为对照品贮备液。精密量取上述对照品贮备液1m L，置于10m L容量瓶中，用33%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取独一味胶囊内容物（碾碎，过40目筛）8份，每份约1 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入50倍70%乙醇，密塞，称定重量，超声60m in，放冷，70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。取续滤液2m L，置于10m L容量瓶中，加33%甲醇稀释至刻度，0.45μm微孔滤膜过滤，取滤液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液 取缺少独一味药材的阴性对照样品，按“2.2.2”项下方法操作，制备阴性对照溶液。

2.3 线性关系考察

精密量取对照品贮备液0.2、0.4、1.0、2.0、5.0、10.0m L，分置于10m L容量瓶中，加33%甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度为4.11、8.22、20.56、41.12、102.80和205.60μg·m L－1的溶液。分别精密吸取10µL注入高效液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件进样测定。以峰面积积分值（Y）为纵坐标，木犀草苷进样量（X）为横坐标进行回归，得回归方程Y＝2 732.5X－19.337。结果表明，木犀草苷进样量在0.041 1～2.056 0µg范围内与峰面积积分值线性关系良好（r＝0.999 8）。

2.4 精密度试验

精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液10µL，按“2.1”色谱条件连续进样6次。结果，木犀草苷峰面积值的RSD＝0.43%，表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验

精密吸取同一样品溶液10µL，于0、2、4、6、8、12 h进样。结果，木犀草苷峰面积值的RSD＝0.83%，表明处理后的样品室温放置12 h内稳定。

2.6 重复性试验

取独一味胶囊内容物适量，共6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，测峰面积，并计算木犀草苷的含量。结果，木犀草苷的平均含量为8.016mg·g－1，RSD＝1.02%，表明重复性良好。

2.7 加样回收率试验

取独一味胶囊样品（批号：20100218）内容物9份，每份约0.5 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，按样品含量的80%、100%、120%分别加入对照品，每份平行3份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积，计算木犀草苷的含量。结果，木犀草苷平均回收率为96.90%，RSD＝1.69%，结果见表1。

2.8 样品含量测定

样品按“2.2.2”项下方法制备，按“2.1”项下色谱条件分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液10μL，注入液相色谱仪，以外标法计算样品中木犀草苷的含量，结果见表2。

3 讨论

3.1 提取溶剂的选择

表1 加样回收率试验结果Tab 1 Results of recovery test of galuteolin in Lam iophlom is capsules

表2 木犀草苷的含量测定结果（n＝3）Tab 2 Results of content determ ination of galuteolin in Lam iophlom is capsules（n＝3）

笔者比较了甲醇、50%甲醇、70%乙醇等不同的提取溶剂对含量测定结果的影响。结果表明，3种溶剂对分析成分的提取率从高到低分别为：70%乙醇＞甲醇＞50%甲醇，故选择70%乙醇为提取溶剂。

3.2 提取时间的选择

笔者比较10、20、30、60m in不同超声时间对含量测定结果的影响。结果表明，超声提取60m in木犀草苷的含量较其他3个提取时间均高，故选择60m in为超声提取时间。

3.3 溶剂用量的选择

笔者比较了20、30、40、50倍体积的提取溶剂对含量测定结果的影响。结果表明，不同溶剂体积对待分析成分的含量无明显影响，因此选择20倍体积70%乙醇进行提取试验。

综上所述，笔者建立了RP-HPLC测定独一味胶囊中木犀草苷含量的方法，该法简便、准确，可用于独一味胶囊的质量控制。

[1] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：184-185.

[2] 张 凤，孙连娜，陈万生.独一味的化学成分及药理作用[J].药学实践杂志，2008，26（3）：169.

Content Determ ination of Galuteolin in Lam iophlom idis Capsules by HPLC

CHEN Lin（Rugao Municipal People’s Hospital of Jiangsu Province，Rugao 226500，China）

OBJECTIVE：To establish themethod for the content determ ination of galuteolin in Lam iophlom is capsules.METHODS：RP-HPLC method was adopted.The samples were separated on Ultimate XB-C18column w ith mobile phase consisted of methanol（phase A）-0.2%acetic acid（gradient elution）at 30℃.The ratio of phase A constant of 33%from 0 to 35 m in，and increased to 70%during 2 m in，then kept constant from 37 to 47 m in，and decreased from 70%to 33%in 3 m in.The detection wavelength was set at 349 nm and the flow rate was 1.0 m L·min－1.The injection volume was 10μL and column temperature was 30℃.RESULTS：The linear range of galuteolin in Lam iophlom is capsuleswas 0.041 1～2.056 0mg·g－1（r＝0.999 8）w ith an average recorery of 98.06%，96.71%，95.75%（RSD＝1.70%）.CONCLUSION：Themethod is stable and convenient.Themethod is suitable for the quality control of Lam iophlom is capsules.

Lam iophlom is；Galuteolin；Flavonoids；RP-HPLC；Content determination

R917

A

1001-0408（2011）36-3447-02

＊主管药师，本科。研究方向：医院制剂和药品质量监控。电话：0513-87537126。E-mail：chenlin19766@163.com

2011-04-22

2011-05-13）

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