宣肺和解方对流感病毒感染小鼠的保护作用

刘丽琴 胡 旭 浙江省中西医结合医院 杭州 310003吕 华 北京中医药大学

宣肺和解方对流感病毒感染小鼠的保护作用

刘丽琴 胡 旭 浙江省中西医结合医院 杭州 310003吕 华 北京中医药大学

目的：观察宣肺和解方对流感病毒感染小鼠的保护作用。方法：取体重为17～18g的NIH小鼠分为正常对照组、感染模型组、宣肺和解方组和病毒唑组。以流感病毒FM1株滴鼻感染小鼠，致病毒性肺炎模型。应用宣肺和解方进行防治，以病毒唑注射液为对照。结果：在观察的时间内，与模型组比较，宣肺和解方可以显著降低流感病毒感染小鼠的死亡率（P＜0.05），显著延长平均生存时间（P＜0.05），显著降低肺指数（P＜0.05），以及显著降低肺匀浆中病毒血凝滴度（P＜0.05）；各组小鼠体重也有显著性差异（P＜0.05）。结论：宣肺和解方可有效抑制病毒性肺炎小鼠体内病毒增殖，降低肺指数，提高存活率。

小鼠 流感病毒 病毒性肺炎 宣肺和解方

宣肺和解方由麻杏石甘汤合小柴胡汤加减组成，是临床用于流感样疾病的经验方，可用于流感流行季节具有发热、咽痛、咳嗽等症状患者的防治。为了进一步研究其防治呼吸道感染的作用机制，我们进行了宣肺和解方抗小鼠呼吸道流感病毒感染的研究。

1 材料与方法

1.1 实验动物 NIH小鼠112只，清洁级，雌雄各半，体重17g～18g，由北京生物制品研究所提供（医动字第01-3071号），置于实验动物洁净柜中饲养。

1.2 病毒及药物 SPF鸡胚，购自北京生物制品研究所。流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株（FM1），中国预防医学院病毒所提供，实验室液氮保存。病毒复苏后在鸡胚中传代两次，小鼠LD50为10-5.11，血凝滴度1∶256。宣肺和解方由炙麻黄、炒杏仁各9g，生石膏30g，生甘草6g，柴胡、黄芩、连翘、牛蒡子各15g，知母10g组成。上方药物经药学鉴定后，确定工艺，制备成实验研究用的口服制剂，含生药0.4g/mL。病毒唑注射液，100mg/mL，由江苏扬州制药厂生产（批号：20030915），用时以无菌生理盐水配制成2mg/mL，0.05g/（kg·d）。

1.3 死亡保护实验 小鼠雌雄各半，随机分为四组，每组20只。正常对照组、感染模型组和宣肺和解方组均提前4天灌胃，每次灌胃0.5mL，1天2次，其中正常对照组、感染模型组以生理盐水灌胃；宣肺和解方组以宣肺和解口服液灌胃。第5天除正常对照组外，另三组灌胃后感染FM1，以乙醚轻度麻醉小鼠后，以50μL流感病毒液滴鼻，感染剂量为30 LD50。正常对照组以生理盐水50μL滴鼻。感染后再灌胃7天。病毒唑组在感染FM1后30min给药，每次腹腔注射病毒唑0.5mL，1天2次，共给药6天。记录不同时间的小鼠体重，逐日观察动物发病症状，记录死亡时间和死亡数。直至感染后14天。死亡保护率（%）＝感染模型组死亡率-药物治疗组死亡率。

1.4 肺指数及病毒血凝滴度测定 小鼠分组、感染、给药方法同上，每组8只。肺指数测定：在流感病毒感染后第4天，按文献方法测定。肺指数＝小鼠肺重/小鼠体重×100%。肺悬液病毒血凝滴度测定：分别取各组肺置匀浆器中加生理盐水（肺重（g）/生理盐水（mL）＝1/9），研磨制成匀浆，4℃，2500 rpm，离心30min，取上清按文献方法作微量病毒血凝试验，计算滴度[1]。

1.5 统计学方法 计数资料用χ2检验。计量资料用方差分析，组间比较用q检验。

2 结 果

2.1 FM1感染对小鼠行为的影响 正常对照组小鼠精神良好，行动敏捷有力，毛发有光泽，呼吸正常，体肥。感染模型组感染24小时后出现甩头、呼吸逐日加快、短促，以腹式呼吸为主，行动迟缓无力，蜷缩、怕冷、毛发无光泽，食少消瘦，饮水量明显降低，这种状态在一直持续4天左右。第5天感染病毒的小鼠陆续出现死亡，直至第9天左右达到高峰，出现大量死亡，以感染模型组为最。从第10天起，各感染病毒组，小鼠活动逐渐增加，饮食量接近正常对照组，体重开始缓慢增长，状态恢复。14天后，各组均不再有死亡，除体重有差异外，小鼠饮食与活动无差别。病毒唑组、宣肺和解方组与感染模型组比较，活动与摄食减少的症状相对较轻。

2.2 宣肺和解方对FM1感染小鼠的死亡保护作用宣肺和解方可以延长FM1感染小鼠生存时间，降低死亡率，同感染模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 宣肺和解方对FM1感染小鼠的死亡保护作用（±s）

表1 宣肺和解方对FM1感染小鼠的死亡保护作用（±s）

注：与感染模型组比较，△P＜0.05,△△P＜0.01

组别正常对照组感染模型组病毒唑组宣肺和解方组平均存活时间/天＞14 9.7±3.2 13.2±2.2△△11.4±3.1△n/只20 20 20 20死亡数/只0 16 4 8死亡保护率/% --死亡率/% 0 80.0 20.0△40.0△60.0 40.0

2.3 宣肺和解方对FM1感染小鼠体重的影 FM1感染可以导致小鼠体重明显下降，至感染第9天，平均体重比感染前降低。宣肺和解方组可以一定程度地抑制FM1感染导致的体重下降，同感染模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。病毒唑虽然有明显的抗病毒作用，但也不能完全阻止小鼠FM1感染导致的体重下降，见表2。

表2 宣肺和解方对FM1感染小鼠体重的影响（±s）

表2 宣肺和解方对FM1感染小鼠体重的影响（±s）

注：与感染模型组比较，△P＜0.05,△△P＜0.01

组别正常对照组感染模型组病毒唑组宣肺和解方组n/只20 20 20 20感染前7天17.8±0.8 17.8±1.0 17.9±0.7 17.9±0.6感染第9天22.9±0.9△△14.8±2.4 18.7±2.9△17.3±2.7△

2.4 宣肺和解方对FM1感染小鼠肺指数病毒血凝滴度的影响 宣肺和解方组可以降低FM1感染小鼠的肺指数和肺悬液病毒血凝滴度，同感染模型组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 宣肺和解方对FM1感染小鼠肺指数和病毒血凝滴度的影响（± s）

表3 宣肺和解方对FM1感染小鼠肺指数和病毒血凝滴度的影响（± s）

注：与感染模型组比较，△P＜0.05,△△P＜0.01

组别正常对照组感染模型组病毒唑组宣肺和解方组血凝滴度（lnX）0 5.16±0.58 3.33±0.53△△4.31±0.77△n/只8 8 8 8肺指数（%）0.864±0.081△△1.271±0.189 0.971±0.159△△1.050±0.140△

3 讨论

实验研究表明，小柴胡汤及麻杏石甘汤均有良好的抗流感病毒的作用[2-3]。但是，不是所有具有解表作用的方药均有抗病毒作用，例如小青龙汤可以抑制流感病毒感染小鼠的病毒复制，抑制病毒从鼻向肺传播，增加支气管肺泡灌冼液中IgA抗体含量；而组方与小青龙汤部分相似的葛根汤在同样条件下，无抗流感病毒活性[4]，其机制尚待进一步研究。本研究所采用的宣肺和解方，即是由麻杏石甘汤合小柴胡汤加减组成，可以显著降低流感病毒感染小鼠的死亡率，延长平均生存时间。实验结果显示，宣肺和解方对小鼠FM1感染所致病毒性肺炎的程度和肺内的病毒复制，具有一定的抑制作用，对流感病毒感染小鼠有一定的保护作用。

中药复方抗流感病毒具有成分复杂、多作用靶点的特点。不同配方的中药，抗流感病毒免疫机制不尽相同，有的是改善非特异性免疫，有的是改善血清免疫球蛋白水平，有的则作用于T淋巴细胞亚群、调节细胞因子（如IFN、IL、TNF）合成和释放，这些研究对深入阐述中药调节机体抗病毒免疫的机制提供了依据。

［1］傅继华.病毒学实用实验技术［M］.济南:山东科学技术出版社,2001：53-59.

［2］袁长津,卢芳国,朱应武.小柴胡汤及其加减方体外抗流感病毒的实验研究［J］.中华中医药杂志,2006,2l（1）:4l-42.

［3］张仲海,王胜春,王汝娟,等.麻杏石甘汤不同方法提取液对发热模型及抗病毒作用的影响［J］.第四军医大学学报,2007, 18（6）:522-524．

［4］胡旭,邱全瑛.中医药抗呼吸道流感病毒感染实验研究概况［J］.中国中医药信息杂志,2004,11（2）:180-182.

Antiviral Effect of Chinese Herbal Medicine Xuan-fei-he-jie Formula on Influenza Virus Infection in Mice

LIU Liqin,HU Xu,LV hua.Zhejiang Provincial Hospital of the Integration of Traditional Chinese and Western Medicine, Hangzhou（310003）,China

Objective:To study the effect of Chinese herbal medicine Xuan-fei-he-jie Formula on the treatment of influenza virus infection in mice.MethodsPulmonary inflammation model was established in mice by nasal drop of influenza virus.The effect of prophylaxis and treatment with Xuan-fei-he-jie Formula was investigated in the mice with influenza virus infection.Ribavirin served as control.ResultsIn the Xuan-fei-he-jie Formula group,the survival rate of infected mice was significantly increased than that in the model group（P＜0.05）,with a prolonged survival time（P＜0.05）. Both the lung index and viral titers were decreased in the Xuan-fei-he-jie Formula group than those in the model group（P＜0.05）.The mouse body weight was significant different in the 2 groups（P＜0.05）.ConclusionXuan-fei-he-jie Formula can effectively inhibit the proliferation of influenza virus,decrease lung index,promote survival rate in mice infected by influenza virus.

influenza Virus respiratory tract infection mouse

2010-07-05