痛风颗粒抗炎降尿酸作用的实验研究Δ

2011-01-30徐玲玲上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院药剂科上海200437

中国医院用药评价与分析 2011年1期

徐熠，徐玲玲，年华(上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院药剂科，上海 200437)

痛风是由嘌呤代谢紊乱，尿酸产生过多或尿酸排泄减少所引起的一组代谢障碍性疾病［1］。近年来，随着人们生活水平的不断提高，痛风的发病率呈逐年上升的趋势［2］。对于该疾病的研究也逐渐受到广泛关注，其中中医药和中西医结合的方式治疗痛风有着疗效好、不良反应小等特点。目前，对于痛风发病的作用机制、代谢方式等研究也已取得了显著成果［3，4］，这为中医药治疗痛风疾病的基础研究提供了理论依据。痛风颗粒(沪药制字Z05050342)是源自上海市名老中医夏涵教授的经典方，已有数十年临床使用经验，在减轻痛风症状上取得了良好治疗效果。该方具有清热利湿、通络的功效。其主要成分为绿原酸及阿魏酸等［5］，具有抗炎、镇痛及降尿酸等作用。故本实验对其中的抗炎及降尿酸作用进行药效学研究，为进一步了解其作用机制提供理论依据。

1 材料

1.1 动物

健康SD大鼠48只，雄性，清洁级，由上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院实验动物中心提供。

1.2 药物

痛风颗粒，由上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院药剂科提供，批号20090722;苯溴马隆(立加利仙)，由德国赫曼大药厂生产，批号0807845。临用前以蒸馏水配成所需浓度。

1.3 试剂

尿酸(uric acid)，由美国 Sigma公司生产，批号 Lot.No.WA200907212;NaOH，由上海凌峰化学试剂有限公司生产，批号081020。

1.4 仪器

日立7170全自动生化分析仪，由日立公司生产;KX-21血球计数仪，由sysmex公司生产;自制足跖体积测量仪。

2 方法

2.1 尿酸钠晶体的制备［6，7］

取3 g尿酸加入600 mL沸水中，用1 mol·L-1的 NaOH溶液调pH至7，加热至95℃，室温搅拌至冷却，4℃冰箱放置24 h，过滤，用0.9%氯化钠注射液洗涤3次，用滤纸将沉淀吸干，70℃烘干，取出，刮下粉末，研细，高温灭菌。使用前用0.9%氯化钠注射液配成100 mg·mL-1的悬浮液。

2.2 分组及给药

取体重在(180±20)g左右雄性SD大鼠48只，按随机数字表法随机分为6组，每组8只，即空白组、模型组、痛风颗粒低剂量组、痛风颗粒中剂量组、痛风颗粒高剂量组和阳性药组(苯溴马隆)。空白组和模型组分别灌服蒸馏水;痛风颗粒低剂量组，痛风颗粒中剂量组和痛风颗粒高剂量组依次灌服3.8、7.7 、15.4 g·kg-1剂量的痛风颗粒;阳性药组灌服 5.25 mg·kg-1的苯溴马隆，1日1次。

2.3 实验方法

2.3.1 尿酸钠致大鼠踝关节肿胀实验［8］:上述大鼠正常饲养2 d后，连续灌胃9 d。末次给药1 h后，除空白组外在各组大鼠右后足踝关节上同一位置划一标记线，测量标记线以下正常足容积，后由踝关节背侧向关节腔内注射尿酸钠混悬液0.2 mL/只，在注射后 1、2、3.5、5 h时分别再次测量足容积，计算肿胀率。

2.3.2 尿酸钠致大鼠足跖肿胀实验［9］:各组大鼠灌胃至第15 d，末次给药1 h后，在除空白组外各组大鼠左后足踝关节上同一位置划一标记线，测量标记线以下正常足容积，后向左后肢足底皮下注射尿酸钠混悬液0.2 mL/只，在注射后1.5、3、4.5、6 h时分别再次测量足跖体积，计算肿胀率。

2.3.3 大鼠患肢压力积分及步态积分实验:在2.3.2实验4 h时观测大鼠站立及行走患肢压力积分、步态积分［6］。大鼠患肢压力积分评分标准:0分:后肢正常压力，2后肢一样重量或平等负重;1分:模型侧后肢负重轻度减少，完全在地上;2分:后肢压力中度减少，腿屈曲仅有部分肢体负重，接触板;3分:后肢负重严重减少，少接触地。大鼠患足步态积分评分标准:0分:正常步态;1分:轻度跛行，注射尿酸钠的患肢屈曲;2分:中度跛行，注射尿酸钠的下肢接触地;3分:严重跛行，甚至出现3肢拖行步态。

2.3.4 尿酸致大鼠高尿酸症实验:第16 d灌胃0.5 h后向除空白组外的各组大鼠左后足跖皮下注射尿酸钠混悬液0.2 mL/只;空白组腹腔注射0.9%氯化钠注射液，其余5组均腹腔注射100 mg·kg-1尿酸。1.5 h后处死，腹主动脉取血2 mL，测定血液内白细胞数量，将全血以3 500 r·min-1转速离心10 min，取血清测定血尿酸值。摘取大鼠两侧肾脏，称重，计算肾脏重量系数(肾脏重量系数(mg·g-1)=(左侧肾脏重量 +右侧肾脏重量)/(2×体重))。

2.4 统计学方法

采用SPSS for Windows 15.0统计软件进行分析，踝关节肿胀和足跖肿胀实验采用repeated measures和multivariate过程进行分析;血尿酸、白细胞计数和肾脏重量系数采用One-Way ANOVA方差分析;压力积分及步态积分采用 nonparametric test中Kruskal-Wallis H法分析。

3 实验结果

3.1 对尿酸钠致大鼠踝关节肿胀的影响

结果表明当模型组肿胀率达最高值时，高中低3组中药组均能不同程度抑制尿酸钠致大鼠的踝关节肿胀，与模型组相比，有显著性差异(F=6.403，P＜0.01)，见表1。

表1 痛风颗粒对尿酸钠致大鼠踝关节肿胀的影响(n=8，±s)Tab 1Effect of gout granula on sodium urate－induced swelling of ankle joints in rats(n=8，±s)

注:与模型组相比，*P ＜0.05，**P ＜0.01note:vs.model group:*P ＜0.05，**P ＜0.01

1 h 2 h 3.5 h 5 h模型组 8 82.23±20.54 106.39±25.59 27.48±16.50 7.80组别动物数/只剂量/g·kg-1肿胀率/(±s，%)±11.38痛风颗粒 8 3.8 72.65±17.49 73.34±23.66** 5.56±6.47** 1.39±3.93痛风颗粒 8 7.7 66.87±12.47* 58.42±15.28** 12.39±4.9** 3.18±4.24痛风颗粒 8 15.4 69.10±15.63* 51.14±18.68** 13.93±13.20* 6.91±6.91苯溴马隆 8 5.25 mg·kg-1 68.49±17.95* 48.55±21.07** 11.00±5.88**2.77±4.19

3.2 对尿酸钠致大鼠足跖肿胀的影响

造模后3～6 h间高中低3组中药剂量均能抑制尿酸钠致大鼠的足跖肿胀，与模型组相比，有显著性差异(F=17.972，P ＜0.01)，见表2。

表2 痛风颗粒对尿酸钠致大鼠足跖肿胀的影响(n=8，±s)Tab 2 Effect of gout granula on sodium urate － induced voix pedis swelling of rats(n=8，¯x ± s)

注:与模型组相比，*P ＜0.05，**P ＜0.01note:vs.model group:*P ＜0.05，**P ＜0.01

1.5 h 3 h 4.5 h 6 h模型组 8 77.93±23.91 143.16±21.06 46.00±11.49 24.5组别动物数/只剂量/g·kg-1肿胀率/(±s，%)5±10.58痛风颗粒 8 3.8 73.72±12.95 54.08±7.76** 26.30±9.85** 11.34±8.30**痛风颗粒 8 7.7 82.64±12.95 55.59±15.61** 28.79±9.68** 13.20±5.87*痛风颗粒 8 15.4 61.77±15.65 29.68±7.15** 11.16±6.99** 3.66±3.22**苯溴马隆 8 5.25 mg·kg-1 67.52±17.17 64.50±20.66** 9.88±7.42** 7.70±7.70**

3.3 对大鼠站立行走的影响

痛风颗粒3组和阳性药组的患肢压力和步态积分高于空白组，中药高剂量组和西药组与模型组相比，有显著性差异(P＜0.05)，说明痛风颗粒能缓解足跖关节肿胀，见表3。

3.4 对尿酸钠致炎大鼠血液中白细胞计数的影响

高剂量痛风颗粒组能减少白细胞数量，与模型组相比，有显著性差异(P＜0.05);中低剂量组痛风颗粒及阳性药组与模型组相比，无显著性差异(P＞0.05)，见表4。

3.5 对尿酸致大鼠高尿酸的影响

高中低3组痛风颗粒能有效降低高尿酸血症大鼠的血尿酸水平，与模型组相比，有显著性差异(F=25.264，P＜0.01)，见表4。

3.6 对尿酸致大鼠高尿酸的肾脏变化影响

与模型组相比，各实验组肾脏系数无显著性差异(F=1.060，P=0.396)，见表4。

表3 患肢压力及步态积分(n=8)Tab 3 Scores of pressure and gait of affected limbs(n=8)

4 讨论

痛风属于中医学的“痹症”、“风湿热痹”范畴［10］，痛风慢性期是由于长期高尿酸在体内累积，使尿酸盐在关节内沉积增多，炎症反复发作进入慢性期而不能消失以至于关节组织受损从而累积肾脏的阶段，中医在临床上主要采用清热利湿、伸筋活络的治疗方法。本方采用茵陈和连钱草清热利湿，加之伸筋草的通络作用，在临床上治疗达到显著的疗效。

痛风性关节炎的发生是由于体内尿酸浓度超出正常范围，析出的尿酸盐结晶沉积在关节软骨、滑膜等部位。结晶激活补体及因子，诱发白细胞渗出聚集，吞噬结晶，在吞噬过程中白细胞破裂释放致炎致痛因子，改变体液环境，体液的pH环境改变又引起了更多白细胞的侵袭，从而引起关节周围的非特异性炎症反应［11］。针对关节炎的发炎机制，考虑处方有效成分可能改变关节体液pH环境，从而达到抑制炎症细胞增生的作用。本研究采用尿酸钠致大鼠踝关节及足跖肿胀模型对该方的抗炎作用进行药效学研究。将临床常用的治疗慢性痛风的排尿酸药物苯溴马隆作为阳性对照药物。抗炎实验结果表明痛风颗粒有明显抑制尿酸钠致大鼠踝关节及足跖炎症的作用，且痛风颗粒高剂量组大鼠血液中的白细胞数较模型组有明显的减少，提示痛风颗粒对致炎细胞的抑制有一定的作用。这与临床疗效结果相一致。

表4 白细胞计数、血尿酸值及肾脏系数实验结果(n=8，±s)Tab 4 Experimental results of white blood cell count，uric acid level and the weight coefficient of kidney(n=8，¯x ± s)

注:与模型组相比，*P ＜0.05，**P ＜0.01note:vs.model group:*P ＜0.05，**P ＜0.01

组别动物数/只剂量/g·kg-1 白细胞计数/(个/L) 血尿酸值/mol·L-1 肾脏系数/mg·g -1空白组 8 (5.20±0.65)×109** 141±6**4.33±0.40模型组 8 (8.09±1.46)×109 235±26 4.15±0.27痛风颗粒 8 3.8 (7.91±3.20)×109 182±19** 4.39±0.15痛风颗粒 8 7.7 (6.43±1.07)×109 159±33** 4.34±0.45痛风颗粒 8 15.4 (6.36±1.12)×109* 158±10** 4.44±0.28苯溴马隆 8 5.25 mg·kg-1(6.69±1.22)×109 147±7**4.31±0.32

肾损害是高尿酸血症常见的并发症，血液中高尿酸可刺激肾素的合成，减少一氧化碳的释放，造成肾内高压，使肾脏肥大，同时尿酸结晶沉积可破坏肾小管上皮细胞，引起肾脏纤维化和硬化［12］。本研究结果显示痛风颗粒能够有效降低体内尿酸水平，但下降幅度较阳性对照组较少。肾脏系数统计结果表明其组间并无显著性差异，推测原因可能是造模时间较短，尿酸未能在肾脏累积，使其未产生器质性变化所致。

痛风颗粒对于抑制炎症，降低尿酸水平有明显的作用，故将其推广用于治疗痛风有着广泛的前景。在深入的研究中，可进一步对方中活性物质的代谢途经及代谢方式进行药动学研究。

［1］潘善余.痛风的病因病机及治疗浅探［J］.浙江中医学院学报，2004，5(28):12.

［2］朱君，余军文.高尿酸血症和痛风的流行病学及其危险因素的研究进展［J］.现代生物医学进展，2008，8(1):191.

［3］Cheng LS，Chiang SL，Tu HP，et al.Genomewide scan forgoutin taiwanese aborigines reveals linkage to chromosome 4q25［J］.Am J Hum Genet.2004，75(3):498.

［4］Pouliot M，James MJ，McColl SR，et al.Monosodium Urate Microcrystals Induce Cyclooxygenase-2 in Human Monocytes［J］.Blood，1998，91(5):1769.

［5］徐熠，徐玲玲，年华.HPLC测定痛风颗粒中绿原酸和阿魏酸的含量［J］.上海医药，2010，31(7):325.

［6］H.G.沃格尔，W.H.沃格尔.药理学实验指南［M］.北京:科学出版社，2001:542.

［7］杨洪霞，杨丽芸，张灵敏，等.痛风饮对实验性急性痛风性关节炎大鼠抗炎镇痛作用机制的研究［J］.时珍国医国药，2008，19(11):2784.

［8］张莹，龚冬梅，霍蓉.中药抗痛风水丸对大鼠实验性关节炎的作用［J］.哈尔滨医科大学学报，2008，42(3):221.

［9］时乐，徐立，尹莲.去多糖处理对加味四妙方抗炎镇痛作用的影响［J］.中药新药与临床药理，2006，17(1):7.

［10］毛黎明，朱彩凤.慢性痛风性肾病中医辨治［J］.浙江中医学院学报，2005，29(6):38.

［11］江海，陈景璋.痛风灵冲剂对慢性痛风性关节炎患者血尿酸、血沉、血脂的影响［J］.中华医护杂志，2007，4(7):583.