延长初发酵时间对生活饮用水中总大肠菌群结果影响分析

李昊宇，王艳红，韩立君

(吉林铁路疾病预防控制所，吉林 吉林 132001)

2006年12月29日，我国标准委和卫生部联合发布了经过修订的 GB5749—2006《生活饮用水卫生标准》和 GB/T5750—2006《生活饮用水标准检验方法》，并自2007年7月1日起实施，这也是从1985年来对原标准进行的首次修订。在长期工作实践中我们发现延长初发酵培养时间可以增加总大肠菌群检出率，也有其他报道证实我们的观点［1－2］。但新标准对总大肠菌群培养时间未作调整，而随后发布食品卫生微生物学检验大肠菌群计数初发酵培养时间已由24 h延长为48 h(GB/T4789.3—2008)。为了解延长初发酵培养时间对生活饮用水检出率的影响，笔者对生活饮用水样本初发酵培养时间进行了24 h和48 h对比，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品均来源于吉林铁路疾控所微生物实验室检验样品，共计326件。

1.1.2 培养基:乳糖蛋白胨培养基，伊红美蓝(EMB)琼脂平板，均为北京路桥技术有限责任公司生产，有效期内使用。

1.2 试验方法

依据生活饮用水国标中总大肠菌群多管发酵法(GB5750.12—2006)进行，将初发酵培养24 h未产酸产气的阴性管继续培养至48 h，观察结果。

1.3 统计分析

采用四表格χ2检验。

1.4 评价标准

经乳糖发酵试验、分离培养、证实试验有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在，为阳性结果。

2 结果

对326份生活饮用水中做如下分类:水厂出厂水列入集中式供水，末梢水及列车自备水箱供水列为二次供水，自备井列为分散式供水。在对全部样品进行检测中，将初发酵培养24 h未产酸产气的阴性管继续培养至48 h，经平板分离及复发酵证实有16份样品出现迟缓发酵现象，使总大肠菌群阳性率有所提高，延长初发酵培养时间引起的生活饮用水中总大肠菌群增加情况见表1。

表1 初发酵培养时间与生活饮用水中总大肠菌群检出情况

由表1可见，二次供水样本在两个不同发酵时间的总大肠菌群阳性率差异具有统计学意义(χ2=4.95，P＜0.05)，其他两类样本总大肠菌群超标率差异无统计学意义(P＞0.05)。

3 讨论

实验结果显示三类样本通过延长初发酵培养时间总大肠菌群检出率均有不同程度提高，比较几类样本阳性率增加情况依次为二次供水、其次为分散式供水、集中式供水最低。总大肠菌群出现迟缓发酵现象是一个很常见的现象，造成原因有很多。我们分析主要是水受到不同环境和不同理化因素的影响，最常见如低营养、消毒剂的残留、东北寒冷的温度等等。在试验中我们经常遇到的一种情况是培养24 h总大肠菌群产生的气泡非常小，用肉眼几乎看不到，即使是有经验的技师也容易漏检、或者过几个小时后气泡可见，但这时已超过报告时限，很难做出阳性报告。在本次实验中我们也发现通过延长初发酵培养时间阳性样本发酵管数有不同程度增加，而超过48 h不管是24 h培养阳性管数还是迟缓发酵阳性管数基本上都不增加了，这说明通过延长初发酵培养时间提高总大肠菌群检出率是一个更科学更客观的方法。

总大肠菌群不是指单一一种细菌，而是指一群在37℃培养24 h能发酵乳糖、产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌，主要包括4个菌属:埃希氏菌属、柠檬酸菌属、克雷伯菌属和肠杆菌属。作为粪便污染指示菌，大肠埃希氏菌检出意义最大，其次为耐热大肠菌群，而总大肠菌群的意义要稍逊一些。GB/T 5750.12－2006《生活饮用水标准检验方法》中规定如果在水中检出总大肠菌群，则应再检验大肠埃希氏菌或耐热大肠菌群以证明水体是否已受到粪便污染，如果水样中没有检出总大肠菌群就不必检验大肠埃希氏菌或耐热大肠菌群［3］。这就意味着总大肠菌群是否检出决定着大肠埃希氏菌或耐热大肠菌群检测是否继续做下去，也就是说总大肠菌群阳性率有可能直接影响大肠埃希氏菌或耐热大肠菌群检出率。因此笔者认为通过延长初发酵培养时间提高总大肠菌群检出率就更有必要了。

［1］ 李奇英.食品监测中如何提高大肠菌群检出率的探讨［J］.食品工业科技，1998，19(1):70.

［2］ 刘国辉，刘志坚，谢丽芬.对大肠菌群值认定的探讨［J］.中国国境卫生检疫杂志，2001，24(1):10－13.

［3］ 金银龙.GB5749－2006《生活饮用水卫生标准》释义［M］.北京:中国标准出版社，2007.42.