MUC-1与β-Catenin在贲门癌组织中的表达及意义

甄 强 高丽娜 刘家宝

（1 石家庄第一人民医院胸外科，河北 石家庄 050000；2 河北省人民医院整形骨二科，河北 石家庄 050000）

世界范围内，肿瘤尤其是恶性肿瘤的发生和死亡仍呈上升趋势。食管癌贲门癌是世界常见的六大肿瘤恶性肿瘤之一，从19世纪起，许多专家对食管癌做了深入研究，人们逐渐认识到肿瘤细胞的转化、演进以及侵袭、转移等涉及到多种原癌基因的激活和抑癌基因的缺失，以及许多肿瘤相关因子的异常表达。MUC-1作为一种大分子跨膜黏蛋白在人体内多种脏器的腺细胞内均有表达，而其在于贲门癌组织中表达的相关文献报道甚少。Wen等对体外胰腺癌细胞研究发现，癌细胞中MUC-1过度表达可使核内β-Catenin的稳定性增加[1]。而MUC-1和β-Catenin协同表达在贲门癌组织中发生、发展的研究未见报道。因此研究二者在贲门癌组织中的表达既有理论意义又具有现实意义。

1 材料与方法

1.1 研究对象

本实验采用河北医科大学附属第一人民医院胸外科2000至2005年70例贲门癌的手术切除标本。所有标本均为福尔马林固定，常规石蜡包埋。患者均有完整的病理资料可供查询。年龄39～75岁，其中男27例，女43 例。每例均分别取材癌组织、癌旁组织、远癌组织。按肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结阳性结果等进行分组。

1.2 方法

采用链霉菌抗生物素过氧化酶（SP）免疫组织化学法。所有样本经体积分数为10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，制成厚 4 μm的切片，60 ℃烘烤，脱蜡，体积分数为 3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶，微波修复抗原，体积分数为10%非免疫血清封闭，加入1∶50的鼠抗人黏蛋白1（MUC-1）单克隆抗体（ZM-0391，克隆系：Ma695为北京中杉金桥生物技术有限公司产品）和鼠抗人β-连接素（β-Catenin）单克隆抗体（ZM-0442，克隆系：CAT-5H10为北京中杉金桥生物技术有限公司产品），4 ℃过夜孵育，PBS液冲洗，滴加1∶300生物素标记二抗，室温下30min，冲洗，滴加1∶40的SP液，室温下30min，冲洗后DAB（北京中杉金桥生物技术有限公司）显色，苏木素-伊红（HE）染色，封片。PBS液代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定

首先通过HE染色在显微镜下观察，确定组织标本的病理分型。免疫组织化学染色在光镜下阅片，随意选取5个高倍视野，每视野计数100个，以其平均数作为最后评定。分别由2位病理专业医师独立阅片，对有分歧者请第三位专业医师一同阅片，最后取意见一致者作为判定标准。MUC-1染色阳性判定标准：采用双盲法以胞质染出黄色或黄棕色为阳性。每例切片随机记数5个高倍视野（×400倍），每视野计数阳性细胞100个，按阳性细胞所占的百分比，将MUC-1阳性病例分为4级：“-”表示无阳性细胞，“+”表示阳性细胞≤25%，“++”表示阳性细胞数在26%～50%之间，“+++”表示阳性细胞数≥50%，其中“-”和“+”作为MUC-1阴性表达，“++”为低表达，“+++”为高表达。后二者作为阳性表达。其中“-”记1分，“+”记2分，“++” 记3分，“+++” 记4分。然后进行相关统计学分析。β-Catenin染色阳性判定结果：同MUC-1染色阳性判定标准。

1.4 统计学分析方法

基本资料在计算机上经统计软件SPSS13.0处理，不同率的比较采用行×列表的χ2检验，MUC-1与β-Catenin表达之间的关系行相关分析。P＜0.05视为有显著差异。

2 结 果

2.1 MUC-1的表达

MUC-1多表达于癌细胞的胞质中，为粗细不等的黄色颗粒，或为弥散性胞质染色，MUC-1在远癌组织贲门黏膜上皮细胞中的阳性表达率为15.71%（11/70），在癌旁组织中的表达率为34.29% （24/70），而在贲门癌中的阳性表达率是54.29%（38/70）。经统计学分析显示：MUC-1在贲门远癌组织和癌旁组织中的表达具有显著性差异（P＜0.05），在癌旁组织与癌组织中的表达有统计学意义（P＜0.05），远癌组织与癌组织中的表达也同样具有显著性差异（P＜0.05） （表1）。在肿瘤大小、分化程度、TMN分期、淋巴结转移、性别、年龄方面MUC-1的表达则无明显的差异。

2.2 β-Catenin的表达

β-Catenin同样多表达于癌细胞的胞质中，为粗细不等的黄色颗粒，或为弥散性胞质染色，β-Catenin在远癌组织贲门黏膜上皮细胞中的阳性表达率为1.43%（1/70），在癌旁组织中的表达率为41.43%（29/70），而在贲门癌中的阳性表达率是58.57%（41/70）。经统计学分析显示：三者比较具有显著性差异（P＜0.05）。β-Catenin在贲门远癌组织和癌旁组织中的表达具有显著性差异（P＜0.05），在癌旁组织与癌组织中的表达无统计学意义（P＞0.05），远癌组织与癌组织中的表达也同样具有显著性差异（P＜0.05）（表2）。在肿瘤大小、分化程度、TMN分期、淋巴结转移、性别、年龄方面MUC-1的表达则无明显的差异。

2.3 MUC-1与β-Catenin之间的关系

在贲门癌组织中，38例MUC-1阳性表达中β-Catenin的阳性表达率为81.58%（31/38），41例β-Catenin阳性表达中MUC-1阳性表达率为75.61%（31/41），二者阳性表达一致率为75.71%。两者之间既有回归关系也具有相关关系（表3）。

表1 MUC-1在不同组织部位的表达

表2 β-catenin在不同组织部位的表达

表3 MUC-1与β-catenin的相关性

3 讨 论

本实验应用免疫组织化学的方法，对贲门癌、癌旁组织、和远癌组织中的黏蛋白-1（MUC-1）和β-连环蛋白（β-Catenin）的表达进行检测。研究肿瘤增殖活性，与免疫组织化学的方法加以对照，研究了上述两种因子在贲门癌发生、发展中的作用，并结合临床、病理资料分析其相关性得到以下几点：①MUC-1的表达在远癌组织及癌旁组织中有显著差异，在癌旁组织与癌组织及远癌组织与癌组织中表达均有差异。越接近癌中心MUC-1表达越明显。说明在贲门癌的发生中MUC-1有促癌作用。其表达与贲门癌的侵袭性有关。②MUC-1的表达在不同的TNM分期中无差异，与分化程度、淋巴结转移、肿瘤大小、年龄、性别等诸多因素无明显关系。③β-Catenin的表达在远癌组织及癌旁组织中有显著差异，在远癌组织与癌组织中表达有显著差异，而在癌旁组织与癌组织中表达无明显差异。说明β-Catenin可能在贲门肿瘤早期发生、发展过程中起作用。④β-Catenin的表达在不同的TNM分期中无差异，与分化程度、淋巴结转移、肿瘤大小、年龄、性别等诸多因素无明显关系。⑤本组研究证实MUC-1与β-Catenin二者阳性表达一致率为75.71%。在癌组织的表达中两者之间具有相关关系，且为正相关。说明MUC-1和β-Catenin不仅可单独作为贲门癌生物学行为的标记，而且二者在贲门癌表达中具有协同作用。

大量研究表明[2-4]，MUC-1可以的通过Wnt信号通道辅助活化因子作用促进Wnt/β-Catenin信号通道异常活化，从而促进β-Catenin对肿瘤细胞增殖的调控。本研究显示在贲门癌发生、发展和局部转移过程中MUC-1与β-Catenin两种因子均发挥着重要作用，而且二者在贲门癌的发展过程中的阳性表达具有协同一直性。实验结果也有利于我们更好的认识贲门癌发生的分子生物学机制，并可以进一步扩展到其他肿瘤中，提高人们对肿瘤的认识。

[1]董志伟,谷铣之.临床肿瘤学[M].北京：人民卫生出版社,2002：659-662.

[2]Shiozaki H,Oka H,Inoue M,et al.E-cadherin mediatedadhesion system in cancer cells[J].Cancer,1996,77(8)：1605-1613.

[3]Utsunomiya T,Yonezawa S,Sakamoto.H,et al .Expression of MUC-1 and MUC-2 mucins in gastric carcinomas：its relationship with the prognosis of the patients[J].Clin Cancer Res,1998,4(11)：260.

[4]Takao S,Uchikura K,Yonezawa S,et al.Mucin core protein expression in extrahepatic bile duct carcinoma is associated with metas-tases to the liver and poor prognosis [J].Cancer,1999,86(10)：1966.